石草鞋化學(xué)成分的研究

代紅梅， 李 馨， 張林果

（平頂山學(xué)院，河南 平頂山467000）

石草鞋Hoya lyi Levl.又稱鐵草鞋、鐵足板，是蘿藦科植物香花球蘭的莖葉。其性溫、味辛微酸，歸肝、脾經(jīng)，具有活血祛瘀、祛風(fēng)除濕的功效，用于跌打損傷、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、腳強(qiáng)痛、胸前飽脹［1］。化學(xué)成分主要為黃酮、色素、有機(jī)酸、甾體等［2］。王治陽等［3］從石草鞋中分離鑒定出15 個單體化合物。為了進(jìn)一步闡述其有效成分，課題組對石草鞋乙酸乙酯部位進(jìn)行分離，鑒定出11 個化合物，除阿魏酸外，其余化合物均首次從該植物中分離得到。

1 材料

ESI-MS 質(zhì)譜儀（TMS 為內(nèi)標(biāo)，美國Finnigan公司）；BUCHI-R-210 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；薄層、柱色譜硅膠GF254（青島海洋化工廠）；Bruker AR X400 型核磁共振儀（TMS 內(nèi)標(biāo)，美國Bruker 公司）；RE-501 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州華特儀器設(shè)備有限公司）；Sephadex LH-20（美國Pharmacia 公司）；AP-100 A 型循環(huán)水真空泵（日本Tokyo Rikakai 公司）；所用試劑均為分析純。

實(shí)驗(yàn)用石草鞋于2015 年采自河南省葉縣，經(jīng)平頂山學(xué)院王磊教授鑒定為蘿藦科植物香花球蘭Hoya lyi Levl.［H．yuennanensis Hand-Mazz 的莖葉。標(biāo)本保存于平頂山學(xué)院分析實(shí)驗(yàn)中心。

2 提取與分離

取干燥石草鞋全葉12.8 kg，加8 倍量95%乙醇回流提取3 次，每次3 h。提取液經(jīng)減壓濃縮得到浸膏1.1 kg，加純化水超聲溶解。依次用石油醚（沸點(diǎn)60 ～90 ℃）、乙酸乙酯、正丁醇萃取。取乙酸乙酯萃取物96 g。用12 倍量硅膠（200 ～300目） 裝柱分離，以石油醚-丙酮（100 ∶0、80 ∶20、50 ∶50、20 ∶80、0 ∶100） 梯度洗脫，合并相同組分。再經(jīng)硅膠（300～400 目） 柱，以石油醚-丙酮-甲醇（80 ∶20 ∶0、50 ∶50 ∶0、20 ∶80 ∶0、0 ∶100 ∶0、0 ∶20 ∶80、0 ∶50 ∶50、0 ∶0 ∶100） 梯度洗脫，合并相同組分。經(jīng)Sephadex LH-20 反復(fù)分離、純化。石油醚-丙酮-甲醇（80 ∶20 ∶0） 洗脫部分得化合物1 （8.7 mg）、7 （11.6 mg）、8（17.6 mg）。石油醚-丙酮-甲醇（50 ∶50 ∶0） 洗脫部分得化合物2（6.8 mg）、3（21.6 mg）、6（9.4 mg）、11 （23.9 mg）。 石油醚-丙酮-甲醇 （20 ∶80 ∶0） 洗脫部分得化合物4（26.8 mg）、5（18.4 mg）、10 （12.6 mg）； 石油醚-丙 酮-甲醇 （0 ∶50 ∶50） 洗脫部分得化合物9（8.6 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，ESI-MS m／z：169［M+H］+，分子式C8H8O4。1H-NMR（500 MHz，DMSOd6） δ：7.56 （1H， d， J=7.8 Hz， H-6），7.52（1H，s，H-2），6.79（1H，d，J=7.8 Hz，H-5），4.02 （3H， s，-OCH3）； 13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6） δ：121.2（C-1），109.4（C-2），151.9（C-3），163.8（C-4），114.2 （C-5），119.6 （C-6），172.9（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］ 一致，故鑒定為3，4-二羥基苯甲酸甲酯。

化合物2：白色粉末，ESI-MS m／z：169［M+H］+，分子式C8H8O4。1H-NMR（500 MHz，DMSOd6） δ：13.9 （1H， brs， HO-2），10.6 （1H， s，HO-5）， 8.3 （1H， d， J=2.0 Hz， H-6）， 8.1（1H，d，J=7.8 Hz， H-3），7.5 （1H， dd， J=2.0，8.0 Hz， H-4）， 4.2 （3H， s， H-8）；13CNMR （150 MHz， DMSO-d6） δ： 125.7 （C-1），162.9 （C-2）， 121.8 （C-3）， 132.2 （C-4），153.7（C-5），110.4（C-6），173.6（C-7），57.9（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］一致，故鑒定為2，5-二羥基苯甲酸甲酯。

化合物3：黃色針晶，ESI-MS m／z：151［MH］-，分子式C8H8O3。1H-NMR（500 MHz，DMSOd6） δ：10.62（1H，s，2-OH），8.93（1H，s，5-OH）， 7.61 （1H， d， J=2.0 Hz， H-6）， 6.92（1H，dd，J=2.0，7.8 Hz，H-4），6.73（1H，d，J=7.8 Hz，H-3），2.49（3H，s，H-8）；13C-NMR（150 MHz， DMSO-d6） δ： 106.4 （C-1）， 156.8（C-2），109.2（C-3），118.3 （C-4），151.6 （C-5），118.7 （C-6），212.6 （C-7），24.6 （C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］一致，故鑒定為2，5-二羥基苯乙酮。

化合物4：白色粉末，ESI-MS m／z：151［MH］-，分子式C8H8O3。1H-NMR（500 MHz，DMSOd6）δ：7.28（1H，s，H-2），7.14 （1H，d，J=7.8 Hz，H-6），6.83（1H，d，J=7.8 Hz，H-5），2.59 （3H， s，-CH3）； 13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ：131.7（C-1），112.4（C-2），143.5（C-3），153.1（C-4），115.7 （C-5），129.4 （C-6），199.6（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］ 一致，故鑒定為3，4-二羥基苯乙酮。

化合物5：白色粉末，ESI-MS m／z：151［MH］-，分子式C8H8O3。1H-NMR（500 MHz，DMSOd6） δ：7.73 （1H， d， J=7.8 Hz， H-6），6.82（1H，d，J=7.8 Hz，0.5 Hz，H-5），6.51（1H，d，J=2.0 Hz，H-3），2.67（3H，s，-CH3）；13CNMR（150 MHz， DMSO-d6） δ： 116.93 （C-1），169.83（C-2）， 113.82 （C-3）， 171.93 （C-4），117.06（C-5），136.84 （C-6），24.63 （C=O），28.63（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］一致，故鑒定為2，4-二羥基苯乙酮。

化合物6：黃色粉末，ESI-MS m／z：197［MH］-，分子式C9H10O5。1H-NMR（500 MHz，DMSOd6） δ： 6.93 （2H， s， H-2， H-6）， 5.62 （2H，q，J=7.3 Hz，-OCH2），2.49 （3H， t， J=7.3 Hz，CH3）；13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6） δ：135.8 （C-1）， 152.9 （C-3）， 143.7 （C-4），152.9（C-5），113.8（C-6），63.4（-OCH2CH3），174.8（-COOH），20.6（-CH2CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］一致，故鑒定為4-O-乙基沒食子酸。

化合物7：白色粉末，mp 240 ～243 ℃，ESIMS m／z：199［M+H］+，分子式C10H10O4。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6） δ：7.24（1H，d，J=3.2 Hz，H-2），7.15（1H，dd，J=9.0，3.2 Hz，H-6）， 7.08 （1H， d， J=10.0 Hz， H-β）， 6.81（1H，d，J=9.0 Hz， H-5），6.26 （1H， d， J=16.0 Hz，H-α）；13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6）δ：128.6 （C-1）， 115.3 （C-2）， 149.7 （C-3），148.2 （C-4）， 114.6 （C-5）， 123.7 （C-6），145.1（C-7），108.4（C-8），169.5（C-9），55.4（3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］ 一致，故鑒定為阿魏酸。

化合 物8： 淡 黃 色 粉 末， ESI-MS m／z： 195［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.57（1H，s，5-OH），12.86（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），7.62 （1H， d， J=2.0 Hz， H-6′）， 6.82（1H，d，J=2.0 Hz， H-8），6.73 （1H， d， J=2.0 Hz， H-6）， 6.15 （1H， d， J=9.0 Hz， H-1′′），4.29 （3H， s，-OCH3）， 4.08 （3H， s，-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：106.2（C-1），163.5（C-2），141.8 （C-3），182.1 （C-4），172.6（C-5），102.8（C-6），173.2 （C-7），97.4 （C-8）， 164.9 （C-9）， 115.8 （C-10），138.5 （C-1′）， 125.9 （C-2′）， 161.2 （C-3′），164.5（C-4′），141.9（C-5′），112.68.5（C-6′），107.9 （C-1′′）， 81.9 （C-2′′）， 83.4 （C-3′′），71.9 （C-4′′）， 80.3 （C-5′′）， 69.3 （-OCH3），63.8（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］ 一致，故鑒定為3′，4′-二甲基楊梅素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合 物9： 淡 黃 色 粉 末， ESI-MS m／z： 317［M-H］-，分子式C15H10O8。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ：11.73（1H，s，5-OH），7.18（2H，s，H-2′，6′），6.37（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.03（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ：129.7（C-1），153.8（C-2），146.2 （C-3）， 183.9 （C-4）， 171.8 （C-5），101.6（C-6），176.4（C-7），97.8（C-8），161.9（C-9）， 109.5 （C-10）， 108.2 （C-2′）， 157.4（C-3′）， 140.3 （C-4′）， 152.8 （C-5′）， 110.6（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］ 一致，故鑒定為楊梅素。

化合物10：無色粉末，ESI-MS m／z：181［MH］-， 分 子 式 C9H10O4。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6） δ：10.6（1H，s，-OCH），7.82（2H，s，H-2， 6）， 4.27 （6H， s，-OCH3）；13C-NMR（150 MHz， DMSO-d6） δ： 137.1 （C-1）， 112.6（C-2），153.8（C-3），143.2 （C-4），153.8 （C-5）， 112.6 （C-6）， 58.7 （-OCH3）， 188.6（-OCH）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］ 一致，故鑒定為4-羥基-3，5-二甲氧基苯甲醛。

化合物11：白色固體，ESI-MS m／z：183［MH］-，分子式C8H8O5。1H-NMR（500 MHz，DMSOd6） δ：6.97（2H，s，H-2，6），4.02（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：125.9（C-1）， 109.8 （C-2， 6）， 153.7 （C-3， 5），140.3（C-4）， 171.9 （C-7）， 53.7 （7-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］一致，故鑒定為沒食子酸甲酯。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)分離鑒定出11 個化合物，化合物6、8為首次從蘿藦科植物中分離得到，化合物1～5、9、10～11 為首次從該植物中分離得到。7 個化合物為蘿藦科植物中目前已報(bào)道的成分，在蓼科中廣泛存在。其中楊梅素具有抗腫瘤、抗氧化性，抗炎、抗血栓、抗心肌缺血、抗抗突變、降血糖、消除體內(nèi)自由基等多種藥理活性，廣泛用于保健品、食品添加劑中［14-16］。4-O-乙基沒食子酸具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、抗腫瘤、抗菌、抗病毒作用［17-18］，其可能為石草鞋治療跌打損傷、關(guān)節(jié)疼痛的物質(zhì)基礎(chǔ)。以期本研究為石草鞋的開發(fā)和利用奠定一定的理論基礎(chǔ)。