石草鞋化學(xué)成分的研究（Ⅰ）

王治陽(yáng)， 代 震， 安 華

（河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院， 河南 鄭州 450004）

石草鞋Hoyalyi Levl 為蘿藦科球蘭屬植物香花球蘭Hoya lyi Levl. [H． yuen-nanensis Hand. -Mazz］的全草， 又稱鐵足板、 鐵草鞋[1］， 具有活血祛瘀、祛風(fēng)除濕、 消食積的功效， 用于跌打損傷、 風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、 腳強(qiáng)痛、 胸前飽脹等[2］， 主要含有香豆素、黃酮類(lèi)、 有機(jī)酸、 甾醇類(lèi)化合物[3］， 課題組前期曾對(duì)全草進(jìn)行分離鑒定， 得13 個(gè)化合物[4］。 為了進(jìn)一步闡明石草鞋全草中有效成分， 促進(jìn)其資源開(kāi)發(fā)， 本研究對(duì)其進(jìn)行了分離鑒定， 得12 個(gè)化合物，化合物3、 7、 9～12 為首次從蘿藦科植物中分離得到， 化合物1、 2、 4～6、 8 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

AV400 型核磁共振波譜儀（TMS 為內(nèi)標(biāo)， 瑞士Bruker 公司）； 薄層、 柱色譜硅膠（100 ～200、300～400 目， 青島海洋化工廠）； RE-2000A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）； 5973N 型質(zhì)譜儀（高真空， 美國(guó)Agilent 公司）； SephadeX LH-20（美國(guó)GE Pharmacia 公司）； YRT-3 型熔點(diǎn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）； ZF-20D 型暗箱式紫外分析儀 （鞏義予華儀器有限責(zé)任公司）；KQ5200B 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。 所用試劑均為分析純。

石草鞋采自河南省南陽(yáng)市， 經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)王民集教授鑒定為石草鞋Hoya lyi Levl 的全草。

2 提取與分離

取石草鞋干燥全草28.6 kg， 90%乙醇回流提取3 次（2、 2、 1 h）， 經(jīng)低壓回收得提取物6.4 kg， 加水超聲溶解后， 依次采用石油醚（60 ～90℃， 下同）、 二氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取，得到石油醚萃取物263.8 g、 二氯甲烷萃取物196.4 g、 乙酸乙酯萃取物206.9 g、 正丁醇萃取物186.5 g。 二氯甲烷萃取物經(jīng)硅膠柱， 以石油醚-丙酮（80 ∶20～20 ∶80） 梯度洗脫， 重結(jié)晶得化合物1 （8.3 mg）、 3 （21.7 mg）、 8 （16.4 mg）； 乙酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱， 以二氯甲烷-丙酮（80 ∶20～20 ∶80） 梯度洗脫， 經(jīng)重結(jié)晶、 硅膠、 Sephadex LH-20 柱， 得化合物2 （12.4 mg）、 5 （23.7 mg）、6 （36.4 mg）、 9 （16.3 mg）、 11 （20.6 mg）、 12（16.3 mg）； 正丁醇萃取物經(jīng)硅膠柱， 以二氯甲烷-甲醇（60 ∶40～20 ∶80） 梯度洗脫， 經(jīng)硅膠、 Sephadex LH-20 柱， 得化合物4 （9.6 mg）、 7 （28.4 mg）、 10 （16.2 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 白色粉末（甲醇）。 ESI-MS m／z：209 [M＋H］＋。 三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)為陽(yáng)性， 紫外燈254 nm 下顯示為藍(lán)色熒光。1H-NMR（DMSO-d6， 500 MHz） δ： 7.72 （1H， d， J=13.5 Hz， H-7）， 7.24 （1H， dd， J=7.6， 2.2 Hz， H-6）， 7.12 （1H， d， J=2.2 Hz， H-2）， 7.01 （1H，d， J=7.6 Hz， H-5）， 6.43 （1H， d， J=13.5 Hz，H-8）， 4.02 （3H， s， -OCH3）， 3.86 （3H， s，-OCH3）；13C-NMR （DMSO-d6， 150 MHz） δ： 172.4（C-9）， 152.6 （C-7）， 149.3 （C-3）， 147.2 （C-4）， 132.6 （C-1）， 127.5 （C-2）， 121.4 （C-5），116.8 （C-6）， 113.7 （C-8）， 57.3 （CH3O-）， 52.6（CH3O-）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5］ 基本一致， 故鑒定為阿魏酸甲酯。

化合物2： 白色粉末（甲醇）。 ESI-MS m／z：179 [M＋H］＋。 三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)為陽(yáng)性， 紫外燈254 nm 下顯示為藍(lán)色熒光。1H-NMR（DMSO-d6， 500 MHz） δ： 7.82 （1H， d， J=13.5 Hz， H-7）， 7.52 （2H， d， J=7.6 Hz， H-2， 6），6.96 （2H， d， J=7.6 Hz， H-3， 5）， 6.53 （1H，d， J=13.5 Hz， H-8）， 3.79 （3H， s， CH3O-）；13CNMR （DMSO-d6， 150 MHz） δ： 171.5 （C-9），161.7 （C-4）， 149.3 （C-8）， 135.8 （C-2， 6），131.6 （C-1）， 117.6 （C-3， 5）， 114.9 （C-7），52.6 （CH3O-）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5］ 基本一致，故鑒定為反式對(duì)羥基桂皮酸甲酯。

化合物3： 黃色針晶 （甲醇）。 ESI-MS m／z：245 [M＋Na］＋。 三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)為陽(yáng)性， 紫外燈254 nm 下顯示為藍(lán)色熒光。1H-NMR（DMSO-d6， 500 MHz） δ： 7.73 （1H， d， J= 7.6 Hz， H-4）， 6.83 （1H， s， H-5）， 6.49 （1H， d，J=7.6 Hz， H-3）， 4.16 （3H， s， CH3O-8）， 4.02（3H， s， CH3O-6）；13C-NMR （ DMSO-d6， 150 MHz） δ： 162.7 （C-2）， 147.6 （C-4）， 147.2 （C-6）， 145.9 （C-8）， 142.6 （C-9）， 136.8 （C-7），118.4 （C-3）， 115.9 （C-10）， 105.8 （C-5）， 62.4（CH3O-8），55.8 （CH3O-5）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6］基本一致， 故鑒定為7-羥 基-6， 8-二甲基香豆素。

化合物4： 棕色粉末（甲醇）。 mp 179 ～181 ℃，ESI-MS m／z： 441 [M ＋Na］＋。1H-NMR （DMSO-d6，500 MHz） δ： 6.72 （4H， s， H-2， 2′）， 6.72（4H， s， H-6，6′）， 5.02 （2H， d， J=3.8 Hz， H-7，7′）， 3.89 （12H， s， CH3O-3， 3′）， 3.89 （12H， s，CH3O-5， 5′）， 3.79 （2H， dd， J=8.2 Hz， H-9′a），3.76 （2H， dd， J=8.2 Hz， H-9a）， 3.61 （2H， dd，J=8.2， 2.2 Hz， H-9b）， 3.57 （2H， dd， J=8.2，2.2 Hz， H-9′b）， 3.24 （2H， m， H-8， 8′）；13C-NMR（DMSO-d6， 150 MHz） δ： 148.6 （C-3， 3′， 5，5′）， 135.4 （C-4， 4′）， 129.7 （C-1， 1′）， 101.6（C-2， 2′， 6， 6′）， 85.3 （C-7， 7′）， 69.5 （C-9，9′）， 54.7 （CH3O-3， 3′， 5， 5′）， 48.3 （C-8，8′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7］ 基本一致， 故鑒定為diasyringaresinol。

化合物5： 白色粉末（甲醇）。 ESI-MS m／z：219 [M＋Na］＋。1H-NMR （DMSO-d6， 500 MHz） δ：7.63 （1H， d， J=2.2 Hz， H-2）， 7.52 （1H， dd，J=2.2， 8.2 Hz， H-6）， 7.02 （1H， d， J=8.2 Hz，H-5）， 6.28 （1H， s， HO-8）， 5.24 （1H， q， J=8.2 Hz， H-8）， 4.06 （3H， s， 3-OCH3）， 1.64（3H， d， J= 8.2 Hz， H-9）；13C-NMR （DMSO-d6，150 MHz） δ： 201.8 （C-7）， 156.8 （C-3）， 149.5（C-4）， 127.5 （C-1）， 126.8 （C-6）， 116.8 （C-5）， 112.8 （C-2）， 68.5 （C-8）， 58.4 （CH3O-3），24.6 （C-9）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8］ 基本一致， 故鑒定為2-羥基-1- （4-羥基-3-甲氧基-苯基） -丙基-1-酮。

化 合 物 6： 黃 色 粉 末 （ 甲 醇）。1H-NMR（DMSO-d6， 500 MHz） δ： 6.92 （1H， d， J = 2.2 Hz， H-2）， 6.84 （1H， d， J=8.2 Hz， H-5）， 6.78（1H， dd， J=8.2， 2.2 Hz， H-6）， 7.24 （1H， d，J=2.2 Hz， H-2′）， 6.92 （1H， d， J=8.2 Hz， H-5′）， 6.84 （1H， dd， J = 8.2， 2.2 Hz， H-6′），5.63 （1H， d， J=2.2 Hz， H-9）， 4.92 （1H， d， J=8.2 Hz， H-7）， 4.86 （1H， d， J=8.2 Hz， H-7′），4.28 （1H， dd， J = 8.2， 2.2 Hz， H-9′α）， 4.16（1H， dd， J=8.2， 2.2 Hz， H-9′β）， 3.92 （3H，s， -OCH3）， 3.43 （1H， m， H-8）， 2.83 （1H， m，H-8′）；13C-NMR （DMSO-d6， 150 MHz） δ： 151.6（C-4， 4′）， 151.2 （C-4′）， 147.6 （C-3）， 147.2（C-3′）， 135.2 （C-1）， 134.9 （C- 1′）， 119.6 （C-6）， 119.2 （C-6′）， 116.8 （C-5）， 116.2 （C-5′），110.8 （C-2）， 110.2 （C-2′）， 106.8 （C-9）， 89.4（C-7′）， 86.3 （C-7）， 71.3 （C-9′）， 64.8 （C-8），55.8 （CH3O-3， 3）， 52.6 （C-8′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9］ 基本一致， 故鑒定為9α-hydroxypinoresinol。

化合物7： 黃色粉末（甲醇）。 三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)為陽(yáng)性， 紫外燈254 nm 下顯示為藍(lán)色熒光。1H-NMR （DMSO-d6， 500 MHz） δ： 7.79（2H， dd， J=8.2， 2.2 Hz， H-3， 6）， 7.62 （2H，dd， J=8.2， 2.2 Hz， H-4， 5）， 4.64 （4H， t， J=8.2 Hz， H-8， 8′）， 1.84 （4H， m， H-9， 9′）， 1.52（4H， m， H-10， 10′）， 1.04 （6H， t， J=8.2 Hz，H-11， 11′）；13C-NMR （DMSO-d6， 150 MHz） δ：168.4 （C-7， 7′）， 136.4 （C-4， 5）， 132.4 （C-1，2）， 129.6 （C-3， 6）， 65.8 （C-8， 8′）， 31.4 （C-9， 9′）， 20.4 （C-10， 10′）， 14.8 （C-11， 11′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10］ 基本一致， 故鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物8： 白色粉末（甲醇）。 三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)為陽(yáng)性， 紫外燈254 nm 下顯示為藍(lán)色熒光。1H-NMR （DMSO-d6， 500 MHz） δ： 7.14～7.20 （5H， s， H-2 ～3， 5 ～6）， 3.06 （2H， t， J=8.2， 2.2 Hz， H-7）， 4.96 （1H， d， J = 8.2 Hz，H-1′）， 1.58 （3H， d， J=8.2 Hz， H-6″）；13C-NMR（DMSO-d6， 150 MHz） δ： 142.6 （C-1）， 132.6（C-2， 6）， 130.6 （C-3， 5）， 128.6 （C-4）， 112.8（C-1′）， 104.9 （C-1″）， 79.4 （C-3′）， 78.4 （C-5′）， 76.8 （C-2′）， 76.5 （C-4″） 75.2 （C-2″），74.3 （C-3″）， 72.6 （C-4′）， 71.4 （C-8）， 70.3（C-5″）， 69.3 （C-6′）， 38.5 （C-7）， 20.4 （C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11］ 基本一致， 故鑒定為phenylethyl D-rutinoside。

化合物9： 白色粉末（甲醇）。 三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)為陽(yáng)性， 紫外燈254 nm 下顯示為藍(lán)色熒光。1H-NMR （DMSO-d6， 500 MHz） δ： 7.64（1H， d， J= 8.2 Hz， H-5′）， 7.46 （1H， d， J =2.2 Hz， H-2′）， 7.06 （1H， dd， J = 8.2 Hz， H-6′）， 6.86 （1H， d， J = 2.2 Hz， H-2， 6）， 5.98（1H， d， J=8.2 Hz， H-7′）， 5.58 （1H， d， J=8.2 Hz， H-glc-1）， 3.84 （2H， t， J = 8.2 Hz， H-9a，9b），3.76 （1H，m，H-8′），3.46 （3H，s， -OCH3），2.78 （2H， t， J=8.2 Hz， H-7a， 7b）， 2.16 （2H，m， H-8a， 8b）；13C-NMR （DMSO-d6， 150 MHz） δ：152.8 （ C-4′）， 149.6 （ C-3′）， 148.9 （ C-4），146.5 （C-3）， 138.9 （C-1′）， 137.8 （C-5）， 132.4（C-1）， 121.6 （C-6′）， 118.6 （C-6）， 118.4 （C-5′）， 115.9 （C-2）， 112.8 （C-2′）， 106.8 （C-1″），88.4 （C-7′）， 79.8 （C-5″）， 79.2 （C-3″）， 76.3（C-2″）， 72.6 （C-4″）， 67.4 （C-9′）， 64.8 （C-6″）， 64.6 （C-9）， 58.4 （CH3O-）， 56.8 （C-8′），55.6 （CH3O-）， 38.4 （C-8）， 33.8 （C-7）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12］ 基本一致， 故鑒定為dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4′-O-β-D-glucoside。

化合物10： 白色粉末（甲醇）。 三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)為陽(yáng)性， 紫外燈254 nm 下顯示為藍(lán)色熒光。1H-NMR （DMSO-d6， 500 MHz） δ： 5.82（1H， brs， H-4）， 5.58 （1H， m， J=13.5 Hz， H-7）， 5.42 （1H， d， J=13.5 Hz， H-8）， 4.62 （1H，d， J=8.2 Hz， H-9）， 2.46 （1H， d， J=13.5 Hz，H-2a）， 2.28 （1H， d， J=13.5 Hz， H-2b）， 2.04（3H， d， J = 2.2 Hz， H-13）， 1.26 （3H， s， H-10）， 1.02 （3H， s， H-11）， 0.96 （3H， s， H-12）；13C-NMR （DMSO-d6， 150 MHz） δ： 198.4（C-3）， 162.8 （C-5）， 136.2 （C-7）， 128.4 （C-8）， 124.6 （C-4），78.4 （C-6），68.4 （C-9）， 50.2（C-2）， 42.6 （C-1）， 25.8 （C-10）， 25.4 （C-12），22.8 （C-11）， 20.6 （C-13）。 以 上 數(shù) 據(jù) 與 文 獻(xiàn)[13］ 基本一致， 故鑒定為bluemenol A。

化合物11： 黃色粉末（甲醇）。 ESI-MS m／z：199 [M ＋H］＋。1H-NMR （DMSO-d6， 500 MHz） δ：7.06 （2H， s， H-2， 6）， 4.37 （2H， q， J = 8.2 Hz， H-8）， 2.04 （3H， t， J=8.2 Hz， H-9）；13CNMR （DMSO-d6， 150 MHz） δ： 167.8 （C-7），148.6 （C-3， 5）， 139.2 （C-4）， 120.4 （C-1），112.6 （C-2， 6）， 61.8 （C-8）， 16.8 （C-9）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14］ 基本一致， 故鑒定為沒(méi)食子酸乙酯。

化合物12： 白色方晶（甲醇）。 三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)為陽(yáng)性， 紫外燈254 nm 下顯示為藍(lán) 色 熒 光。 EI-MS m／z： 192 [M ］＋。1H-NMR（DMSO-d6， 500 MHz） δ： 7.72 （1H， d， J= 8.2 Hz， H-4）， 7.24 （1H， d， J=8.2 Hz， H-5）， 6.86（1H， d， J=8.2 Hz， H-6）， 6.62 （1H， d， J=8.2 Hz， H-3）， 4.62 （ 3H， s， -OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6， 150 MHz） δ： 158.6 （C-2）， 150.6 （C-7）， 146.8 （C-8a）， 142.6 （C-4）， 132.7 （C-8），120.5 （ C-5）， 112.6 （ C-4a）， 110.8 （ C-3），108.6 （C-6）， 62.6 （-CH3O）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15］ 基本一致， 故鑒定為7-羥基-8-甲氧基香豆素。

4 討論

本研究從石草鞋中分離得到12 個(gè)化合物， 其中6 個(gè)為蘿藦科植物中已報(bào)道的香豆素類(lèi)、 有機(jī)酸類(lèi)等， 均是同屬植物中分布較廣的特征性成分。 國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)阿魏酸甲酯進(jìn)行了研究， 發(fā)現(xiàn)其具有抗血小板聚集、 抗炎、 抗腫瘤、 調(diào)節(jié)免疫能力；沒(méi)食子酸乙酯具有抗氧化、 抑制結(jié)腸癌Lo-Vo 細(xì)胞增殖的活性； diasyringaresinol 具有抗氧化、 抗衰老、 保護(hù)心血管的作用。 由此推測(cè)， 香豆素、 有機(jī)酸等成分可能是石草鞋藥效物質(zhì)基礎(chǔ)， 有助于揭示其發(fā)揮臨床療效的作用機(jī)制。