母豬初乳中豬圓環(huán)病毒3型的檢測與分析

黃二素，梁海英，曾智勇*(編譯)

（貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

豬圓環(huán)病毒3型(PCV3)是一種近年來被廣泛報道的新型豬圓環(huán)病毒。盡管PCV3的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但已有文獻(xiàn)報道表明，在臨床上表現(xiàn)為母豬繁殖障礙，如流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎，心肌炎，在豬皮炎腎病綜合征(PDNS)，呼吸道疾病及神經(jīng)系統(tǒng)疾病等病癥的豬體內(nèi)均可檢測到PCV3。同樣，PCV3在健康豬群中也能被檢測到。此外，在不同年齡段的豬體內(nèi)也能檢測到PCV3。然而，PCV3在感染豬群中的傳播方式尚未明了。通常而言，病毒的垂直傳播是病毒在豬群中持續(xù)存在和傳播的關(guān)鍵因素。有研究表明，PCV2經(jīng)初乳傳播在哺乳仔豬的垂直感染中起著重要作用，隨后通過水平傳播使得PCV2在斷奶仔豬中傳播。PCV3是否亦可通過初乳垂直傳播尚未見報道。Kedkovid R等首次對泰國已感染PCV3的母豬群的初乳進(jìn)行PCV3的檢測鑒定，并就血清及初乳中PCV3滴度的關(guān)系進(jìn)行了探討。

Kedkovid R等于2017年經(jīng)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)協(xié)議號：1731064），在泰國拉查布里省某農(nóng)場采集38頭1～6胎次母豬的血清和初乳(分娩后6h內(nèi))樣本，初乳樣本使用前經(jīng)900 g離心10 min去除脂肪層后，分別取150 μL初乳和血清樣品使用NucleoSpin病毒RNA核酸提取試劑盒提取病毒核酸，并運(yùn)用Wang等建立的基于TaqMan的 qPCR檢測方法對血清和初乳樣品進(jìn)行PCV3檢測；使用Palinski等先前公布的PCR測定法將PCV3陽性DNA片段（601～1 626 nt）進(jìn)行108～101的系列稀釋制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，該DNA片段也用作qPCR測定的靈敏對照。隨即使用儀器的內(nèi)部軟件完成目標(biāo)DNA的拷貝數(shù)計算，測定的檢測限為4 log基因組拷貝/mL；為了確認(rèn)初乳樣品中PCV3的存在，隨機(jī)選擇高PCV3滴度的初乳樣品，再進(jìn)行靶向PCV3部分ORF2區(qū)域(1～363 nt)的PCR檢測，將PCR產(chǎn)物送至First BASE Laboratories Sdn Bhd(馬來西亞)測序，并對獲得的基因組序列應(yīng)用BioEdit 7.0.9.0進(jìn)行序列分析；使用GraphPad Prism 5對獲得的PCV3數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

本次實驗結(jié)果表明，血清和初乳樣本中PCV3檢出率分別為47.37%和44.74%，初產(chǎn)母豬初乳中PCV3檢出率最高約為71%，經(jīng)產(chǎn)母豬初乳中PCV3檢出率為33%～43%。陽性動物血清和初乳中PCV3病毒滴度分別為5.06±0.44(n=18)和5.02±1.08(n=17)的對數(shù)基因組拷貝數(shù)/mL，其差別不明顯。根據(jù)血清中的病毒滴度將母豬分為3組，高病毒血癥母豬(9頭)、低病毒血癥母豬(9頭)和非病毒血癥母豬(20頭)，其中高病毒性母豬初乳樣品中PCV3的滴度(100%)顯著高于其他兩組，所以推測部分初乳中PCV3會受到病毒血癥的影響。盡管血清和初乳中PCV3的檢出率不同，但血清與初乳中PCV3的滴度呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)0.49%)。根據(jù)母豬的繁殖參數(shù)(TB、BA、SB、MF)發(fā)現(xiàn)，母豬PCV3病毒血癥的強(qiáng)弱和初乳中病毒含量的高低均未導(dǎo)致母豬生產(chǎn)性能發(fā)生明顯的不同。將PCV3的部分ORF2序列與此前報道的泰國PCV3、PCV2(GenBank登錄號：AF027217) 和PCV1（GU799575)進(jìn)行比對，同源性分別為97.80%、54.41%和52.92%。 遺傳系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，其與先前報道的PCV3a處于同一進(jìn)化分支，所以確定該P(yáng)CV3屬于PCV3a，并將其命名為PCV3/Thailand/RB01/17株（MH158731）。

Kedkovid R等研究發(fā)現(xiàn)該豬場母豬初乳中PCV3滴度與Dvorak 等研究的初乳中PCV2滴度差別不明顯；但與高病毒血癥母豬群相比，往往在低病毒血癥母豬群的血清和初乳中PCV3的陽性率更高。此外，有研究表明與經(jīng)產(chǎn)母豬相比，初產(chǎn)母豬的仔豬PCV2和PRRSV雙重感染的風(fēng)險更高。此次實驗雖從初乳樣本和19日齡仔豬中檢測到了PCV3，但是目前還未觀察到初乳中PCV3對母豬產(chǎn)生的臨床影響，推測可能與研究中使用的母豬數(shù)量不足以檢測到小的或不常見的影響有關(guān)。同時，該研究利用宏觀基因方法也檢測到了豬星狀病毒4型和肝炎病毒，因此尚不能確定PCV3是患病豬的主要病原體。

據(jù)相關(guān)研究報道，PCV2母源抗體的存在雖不能避免仔豬感染PCV2，但可使仔豬避免發(fā)生豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病（PCVAD），即推測初乳中也可能存在PCV3抗體。Kedkovid R等研究證明了PCV3與豬的呼吸道疾病復(fù)合體(PRDC)有關(guān)。有報道PCV3的感染最早發(fā)生在5周齡，并且本實驗中患病豬有亞臨床的感染，所以仔豬哺乳期感染PCV3對今后的生長發(fā)育可能會有影響。相關(guān)研究報道證明PCV3與其他病毒(尤其是PCV2)存在共同感染，但該實驗中并未檢測到PCV2，推測可能與該農(nóng)場接種PCV2疫苗有關(guān)。目前尚不清楚患病動物與其他病原體共同感染是否會對初乳中PCV3產(chǎn)生影響。為了進(jìn)一步了解母乳中PCV3對母豬和仔豬產(chǎn)生的影響，后續(xù)將開展更多關(guān)于初乳中PCV3病原檢測的深入性研究，為后期對母豬的有效管理和PCV3控制奠定基礎(chǔ)。