內(nèi)皮鈣黏蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥病變組織中的表達(dá)及其臨床意義

孫靜，張蕊，王榮毓

（北京市第一中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 婦產(chǎn)科，北京 100021）

子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生主要是長(zhǎng)期的子宮內(nèi)膜 腺體細(xì)胞侵襲能力改變有關(guān)。流行病學(xué)研究顯示，現(xiàn)階段臨床子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病率約為223～455/萬(wàn)[1]。子宮內(nèi)膜異位癥的病情進(jìn)展，能導(dǎo)致患者不孕及卵巢功能的破壞，增加不良臨床預(yù)后的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。探討子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，不同分子的表達(dá)濃度改變，影響子宮內(nèi)膜的變形能力，促進(jìn)子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞的增殖、抑制及凋亡，進(jìn)而促進(jìn)腺體細(xì)胞侵襲能力的改變。血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（vascular endothelial cadherin, VE-cad）是重要的細(xì)胞間連接蛋白，其主要表達(dá)于平滑肌、血管內(nèi)皮組織及肝腎上皮組織。VE-cad能通過(guò)干預(yù)細(xì)胞間的縫隙連接及緊密連接等，促進(jìn)細(xì)胞間纖維蛋白成分的降解，干預(yù)子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的改變[2-3]。近年來(lái)相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥或卵巢巧克力囊腫患者，VE-cad表達(dá)濃度可發(fā)生變化。為進(jìn)一步探討VE-cad與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系，本研究選取正常子宮，探討相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)及其與患者病程和其他臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月—2017年9月北京市第一中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科收集的40例正常子宮內(nèi)膜、平滑肌組織（正常組）和80例子宮內(nèi)膜異位癥組織的子宮內(nèi)膜、平滑肌組織（病例組）。正常組：年齡40～53歲，平均（47.0±5.2）歲；增殖期18例、分泌期22例。病例組：年齡40～54歲，平均（47.5±5.8）歲；增殖期38例、分泌期42例；根據(jù)不同內(nèi)膜的位置，將患者分為在位和異位內(nèi)膜組，各為40例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①子宮內(nèi)膜異位癥診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)；②正常子宮組織來(lái)源于因外傷等原因需要進(jìn)行子宮切除；③研究對(duì)象各項(xiàng)基礎(chǔ)資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等；②近3個(gè)月接受內(nèi)分泌治療；③伴有自身免疫性疾?。虎荛L(zhǎng)期應(yīng)用激素類(lèi)藥物治療。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬知情同意。兩組年齡、子宮內(nèi)膜所處分期比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

收集子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜病變組織（包括子宮內(nèi)膜和平滑肌組織），同時(shí)收集子宮內(nèi)膜良性病變組織作為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)分析VE-cad在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的異常表達(dá)情況，并比較異位或在位子宮內(nèi)膜組織中VE-cad表達(dá)差異情況。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法

所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4 mm，采用免疫組織化學(xué)鏈霉卵白素-生物素復(fù)合體法染色，二氨基聯(lián)苯胺（diamionben zidene, DAB）顯色。VE-cad抗體、PV6000通用型二抗及SP試劑盒和DAB顯色盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。以陽(yáng)性片及磷酸鹽緩沖液PBS代替一抗分別作為陽(yáng)性及陰性對(duì)照，高倍顯微鏡下觀(guān)察VE-cad的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

免疫組織化學(xué)結(jié)果判定，VE-cad陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞膜孔細(xì)胞質(zhì)，其呈黃色、棕黃色及褐色表達(dá)。根據(jù)著色強(qiáng)度，0分為無(wú)色；1分為淡黃色；2分為棕黃色；3分為褐色、黑色。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分；陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＞10%～50%為2分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%～75%為3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例＞75%為4分。兩種積分相乘，總分＜3分為陰性；≥3分為陽(yáng)性?？偡郑?分為（-）表達(dá)；總分3～5分為弱陽(yáng)性（+）表達(dá)；總分6～9分為陽(yáng)性（++）表達(dá)；總分＞9分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組子宮內(nèi)膜中VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率比較

3組子宮內(nèi)膜中VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；病例組異位內(nèi)膜組織中VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率高于病例組在位內(nèi)膜組織、正常組子宮內(nèi)膜組織，見(jiàn)表1和附圖。

2.2 兩組子宮平滑肌組織中VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率比較

兩組子宮平滑肌組織中VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 不同影響因素子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中VE-cad陽(yáng)性率比較

子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中VE-cad表達(dá)與患者年齡、病程有相關(guān)性（P＜0.05）。年齡越大、病程越長(zhǎng)的患者異位內(nèi)膜組織中VE-cad表達(dá)率越高；子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中VE-cad表達(dá)與患者是否應(yīng)用止痛藥無(wú)關(guān)（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表1 3組子宮內(nèi)膜中VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率比較

附圖 兩組異位內(nèi)膜組織中VE-cad陽(yáng)性表達(dá) （×400）

表2 兩組子宮平滑肌組織中VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率比較

表3 不同影響因素子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中VE-cad陽(yáng)性率比較

3 討論

現(xiàn)階段臨床對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的治療主要通過(guò)手術(shù)及圍手術(shù)期的藥物治療為主。但長(zhǎng)期的臨床隨訪(fǎng)研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥臨床治療總體有效率或治療后妊娠結(jié)局等均無(wú)改善[1]。生物學(xué)治療能在無(wú)創(chuàng)、精準(zhǔn)治療等方面發(fā)揮積極的臨床價(jià)值，而本研究通過(guò)對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病過(guò)程中相關(guān)因子分析，能為臨床疾病的診療提供理論參考。同時(shí)本研究對(duì)VE-cad表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥患者病程的關(guān)系研究，可為揭示臨床疾病持續(xù)性進(jìn)展、病情惡化的內(nèi)在原因提供參考。

VE-cad結(jié)構(gòu)包括多個(gè)含巰氨基酸，能在促進(jìn)局部纖維蛋白酶的末端磷酸化過(guò)程中發(fā)揮作用，促進(jìn)局部組織中金屬蛋白酶的上調(diào)，增加細(xì)胞間質(zhì)的分解。同時(shí)VE-cad能提高細(xì)胞的異型性，促進(jìn)腺體細(xì)胞膜穩(wěn)定性的下降，增加其對(duì)臨近正常組織細(xì)胞的黏附能力，并提高其通過(guò)淋巴或者組織液滲透轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[4-5]。相關(guān)基礎(chǔ)方面研究顯示，VE-cad能在提高癌細(xì)胞的擴(kuò)散、促進(jìn)癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)期器官轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮作用，并增加局部血管內(nèi)皮的通透性[6-7]。惡性腫瘤的發(fā)生或者臨床分期的進(jìn)展過(guò)程中，VE-cad高表達(dá)對(duì)患者的病情進(jìn)展具有重要的促進(jìn)作用[8-9]。而在子宮內(nèi)膜異位癥中的分析研究不足，本研究的創(chuàng)新性在于：探討子宮內(nèi)膜及平滑肌組織中VE-cad差異性表達(dá)；揭示VE-cad在子宮內(nèi)膜異位病灶組織中的表達(dá)。

子宮內(nèi)膜異位癥病灶組織中可發(fā)現(xiàn)相關(guān)指標(biāo)的異常表達(dá)，其中VE-cad表達(dá)濃度上升，高于子宮內(nèi)膜原位病灶組織，提示VE-cad能影響到異位癥病灶部位子宮內(nèi)膜組織的細(xì)胞病變，從機(jī)制上可能與VE-cad對(duì)細(xì)胞的生物學(xué)特征的改變有關(guān)[10-11]：①VE-cad表達(dá)能影響到子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞的持續(xù)性DNA擴(kuò)增風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)卵巢上皮或者輸卵管上皮細(xì)胞的黏附及浸潤(rùn)風(fēng)險(xiǎn)上升；②VE-cad表達(dá)能促進(jìn)異位癥病灶組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞的新生，促進(jìn)新生血管的形成，并提高異位癥病灶組織的局部血流灌注。部分研究者在分析不同累及部位子宮腺肌癥患者的蛋白譜的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率可平均上升≥25%，且患者異位癥病灶破壞越為明顯，手術(shù)治療后的復(fù)發(fā)率越高，VE-cad表達(dá)陽(yáng)性率上升越為明顯[12-13]。VE-cad表達(dá)主要定位于子宮內(nèi)膜腺體細(xì)胞的周邊及部分細(xì)胞質(zhì)中，染色強(qiáng)度越深，VE-cad表達(dá)濃度越高，這可能提示VE-cad蛋白能夠影響到細(xì)胞間質(zhì)的代謝或者細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的傳導(dǎo)等，進(jìn)而影響到子宮內(nèi)膜腺體的浸潤(rùn)及侵襲過(guò)程。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)VE-cad在異位癥病灶或者原位平滑肌組織中的表達(dá)差異：一方面考慮到VE-cad蛋白主要表達(dá)于內(nèi)膜組織中；另一方面考慮與VE-cad蛋白主要作用腺體細(xì)胞，而對(duì)平滑肌細(xì)胞的影響較小。長(zhǎng)期的VE-cad濃度蓄積能增加其對(duì)于腺體細(xì)胞病理改變的調(diào)控作用，而應(yīng)用鎮(zhèn)痛藥物如GNRH類(lèi)藥物或者米非司酮等，并不能影響到VE-cad表達(dá)水平，其濃度較為穩(wěn)定，提示臨床可通過(guò)隨訪(fǎng)VE-cad蛋白的表達(dá)，進(jìn)而評(píng)估子宮腺肌癥患者的病情變化。

綜上所述，子宮腺肌病異位內(nèi)膜組織中VE-cad呈高表達(dá)，而年齡越大、病程越長(zhǎng)，VE-cad蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率越高。但關(guān)于VE-cad表達(dá)與子宮腺肌癥患者的臨床分期、治療預(yù)后關(guān)系仍然需要進(jìn)一步探討。