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    茶葉茶多酚檢測(cè)方法研究進(jìn)展

    2019-01-06 11:59:51田玉鳳鄭美慧田曉靜
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2019年18期
    關(guān)鍵詞:福林兒茶素光度法

    田玉鳳,鄭美慧,田曉靜

    (西北民族大學(xué) 生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730030)

    茶葉是茶樹的芽和葉子,我國(guó)很多地方都種植,是一種理想的保健飲品。茶葉中含有豐富的茶多酚、生物堿、氨基酸、茶多糖等活性成分;微量元素(如硒、鉻、鐵、鋅等)在人體的新陳代謝和生長(zhǎng)發(fā)育中起重要作用,如抗氧化[1-3]、提高綜合免疫力[4]、抑菌[5-6],抗癌[7-8]、降血脂[9]、抗衰老、抗輻射等作用[10]?,F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)療保健等領(lǐng)域[11]。

    茶多酚(Tea Phlyphenols,TP)又名茶鞣質(zhì),是一類多羥基類化合物,是茶中酚類化合物的總稱。茶多酚不僅是茶葉中的主要生物活性成分[12],而且是茶中苦味、澀味和色澤的重要來(lái)源,也是評(píng)價(jià)茶葉品質(zhì)的重要指標(biāo)之一[3]。茶多酚的含量對(duì)茶葉質(zhì)量有很大影響,選用合適高效的檢測(cè)方法實(shí)現(xiàn)茶葉的品質(zhì)鑒定和分級(jí),將促進(jìn)其在工業(yè)、食品和醫(yī)療領(lǐng)域的開發(fā)和利用。

    1 檢測(cè)方法

    1.1 光譜分析法

    1.1.1 分光光度法

    分光光度法(Spectrophotometry)是利用被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)下的吸收度,再根據(jù)吸光度與被測(cè)物質(zhì)濃度之間的線性關(guān)系進(jìn)行檢測(cè)分析的方法[13]。主要有以下幾種方法。

    1.1.2 福林酚比色法

    福林酚比色法(Folin-ciocalteucolorimetry,F(xiàn)C)是通過(guò)福林酚試劑氧化茶多酚中的-OH而顯藍(lán)色進(jìn)行比色測(cè)定的。高海榮等人[14]對(duì)比福林酚比色法和重鉻酸鉀分光光度法分析信陽(yáng)毛尖、鐵觀音、大紅袍及普洱餅茶4種茶葉中茶多酚總量的差異,發(fā)現(xiàn)福林酚比色法比重鉻酸鉀分光光度法更為有效。趙春玲等人[15]以沒(méi)食子酸乙酯為標(biāo)準(zhǔn)品,建立了一種利用硝酸鋁光度法檢測(cè)茶葉中茶多酚含量的有效方法,平均回收率100.7%,RSD為1.07%。鐘育均等人[16]建立了硅鉬藍(lán)光度法測(cè)定紅茶和綠茶茶多酚的新方法,檢測(cè)限為0.000 097 mg/mL,精密度和加標(biāo)回收率是理想的。福林酚比色法快速、簡(jiǎn)單,并且減少人體接觸試劑的機(jī)會(huì)[17]。

    1.1.3 三維熒光光譜法

    三維熒光光譜(Three-dimensional Fluorescence Spectrometry,3D-EEM)是利用某些物質(zhì)分子受熒光照射時(shí),發(fā)射具有不同特征和強(qiáng)度的熒光光譜,并在不同的激發(fā)波長(zhǎng)上進(jìn)行定性定量分析[18]。張琪瑞[19]利用三維熒光光譜結(jié)合熒光體積積分技術(shù),分析鐵觀音和黃山毛峰兩種茶葉中的葉綠素α、茶多酚與黃酮類物質(zhì)的浸出情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在相同浸泡條件下,葉綠素α浸出量接近最大值,茶多酚與黃酮類物質(zhì)含量適中,浸泡溫度可顯著影響茶多酚的浸出量。

    1.1.4 近紅外光譜法

    近紅外光譜法(Near Infrared Spectrometry,NIR)利用分子的振動(dòng)頻譜,直接獲得與分子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)、官能團(tuán)和分子狀態(tài)有關(guān)的定量或定性信息[20]。趙雅等人[21]采用近紅外光法結(jié)合偏最小二乘法在1 872 nm建立了茶多酚含量預(yù)測(cè)模型,R2=0.937 8。劉輝軍等人[22]采用近紅外光譜分析技術(shù),結(jié)合非線性偏最小二乘法,在不同的光譜區(qū)間組合建立了最佳的分析模型,相關(guān)系數(shù)R2=0.967。馬健[23]采用近紅外光譜進(jìn)行采樣建模分析,建立偏最小二乘法模型,對(duì)信陽(yáng)毛尖進(jìn)行含量檢測(cè),預(yù)測(cè)集的相關(guān)系數(shù)R2=0.975 5。蘆永軍等人[24]采用近紅外光譜結(jié)合定標(biāo)過(guò)程檢測(cè)茶多酚中兒茶素含量,其相關(guān)系數(shù)R2=0.994 7。

    1.2 色譜分析法

    色譜分析法通常用于分離和測(cè)定茶湯中的茶多酚,可用于茶多酚單體的含量檢測(cè)。主要有液相色譜法、高效薄層色譜法、質(zhì)譜法等。

    基于ERP系統(tǒng)的水泥工程管理系統(tǒng),滿足了普通用戶和管理員的各種需求,有助于水泥企業(yè)提高產(chǎn)品質(zhì)量,提升服務(wù)質(zhì)量,進(jìn)一步提高企業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)力。對(duì)于采用ERP系統(tǒng)的水泥企業(yè)來(lái)講,需要對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行持續(xù)的研究,找出其中存在的缺陷和不足并加以改進(jìn),使其更加完善。

    1.2.1 高效液相色譜法

    高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是根據(jù)物質(zhì)在不同兩相中的分配系數(shù)不同,經(jīng)洗脫劑從而使混合物中各組分分離出來(lái)。采用HPLC法會(huì)涉及到樣品的前處理問(wèn)題,目前常采用溶劑萃取法對(duì)樣品進(jìn)行處理,有純水[25]、甲醇、乙腈[26]、乙醇[27]、乙酸乙酯[28]等。HPLC法可同時(shí)測(cè)定多組分,可對(duì)茶多酚中的各組分測(cè)定。王增明等人[29]建立了HPLC法測(cè)定茶多酚中表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)和表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG)含量的檢測(cè)方法,發(fā)現(xiàn)EGCG和ECG的線性范圍和相關(guān)系數(shù)分別為159.4~797.0 mg/L,R=0.999 6和40.16~120.18 mg/L,R=0.999 7,方法的精密度和重復(fù)性良好。郭佳莉等人[30]利用超聲波提取茶多酚,并采用高效液相色譜法分析測(cè)定相同產(chǎn)地不同級(jí)別茶葉的茶多酚,其線性范圍和相關(guān)系數(shù)分別為0.6~3.0 mg/L,R=0.999 6~0.999 9,方法的精密度和重復(fù)性較好。HPLC可以同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)定多組分,但操作要求高、費(fèi)用較高且費(fèi)時(shí)。

    1.2.2 柱色譜法

    柱色譜法(Column Chromatography,CC)主要基于樣品在兩相中各組分的分配系數(shù)差異,因而在流動(dòng)相中的遷移速度也不同,以實(shí)現(xiàn)組分的分離。袁華等人[31]以粗茶多酚為原料,以硅膠為吸附劑,發(fā)現(xiàn)茶多酚中兒茶素含量大于90%,其中酯型兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯含量超過(guò)60%。羅超華等人[32]優(yōu)化茶多酚中EGCG分離純化工藝路線,發(fā)現(xiàn)純品表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯含量超過(guò)90%。朱宇惠等人[33]利用沉淀法去除茶多酚粗品中的雜質(zhì),然后采用柱層析法純化精制茶多酚。提出了沉淀-柱層析法新方法,發(fā)現(xiàn)該方法對(duì)茶多酚的分離測(cè)定有一定的實(shí)用性和可行性。

    1.2.3 高效薄層色譜法

    高效薄層色譜法(High-Performance Thin Layer Chromatographic,HPTLC)則能較好地解決高效液相色譜法每次只能進(jìn)一個(gè)樣,待測(cè)樣品數(shù)量大、耗時(shí)較多,檢測(cè)費(fèi)用也高。王麗麗等人[34]以體積比12.5∶7.5∶2.2的三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑,可較好地分離茶葉中的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯、沒(méi)食子兒茶素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯、兒茶素單體。傅冬和等人[35]用乙醇-丙酮-冰醋酸(5∶5∶3)為層析展開劑在聚酞胺薄膜板上進(jìn)行層析分離,可有效地分離兒茶素單體,是一種較好的分離測(cè)定方法。

    1.3 電化學(xué)分析法

    電化學(xué)分析法(Electrochemical Analysis,EA)是基于茶葉中茶多酚的電化學(xué)性質(zhì)及其變化規(guī)律,通過(guò)電化學(xué)參數(shù)(如電位、電導(dǎo)、電流)與被測(cè)物質(zhì)濃度間的關(guān)系進(jìn)行定性定量的方法。丁亞平等人[36]結(jié)合示位法和電位分析法,根據(jù)KBrO3和KBr的歧化反應(yīng)與茶多酚的溴代反應(yīng)間的速度不同,提出了檢測(cè)分析痕量茶多酚的方法。朱丹等人[37]比較銀電極、碳糊電極和玻碳電極在循環(huán)伏安法的基礎(chǔ)上,測(cè)定茶多酚含量的有效性,發(fā)現(xiàn)玻碳電極具有最佳的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,可用于茶多酚的快速檢測(cè)。

    1.4 毛細(xì)管電泳法

    毛細(xì)管電泳(Electrophoresis,EC)是利用不同粒子的遷移速度,最終以不同的速度到達(dá)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),產(chǎn)生按時(shí)間分布的電泳圖譜[38]。夏文娟[39]利用250 mmol/LH3BO4,10 mmol/LKH2PO4、0.75 mmol/L SDS和20%乙腈組成的pH值為7.5的電泳介質(zhì),電壓、柱溫和波長(zhǎng)分別為25 kV,20℃,200 nm,發(fā)現(xiàn)標(biāo)樣中的4種主要茶黃素類單體可在10 min以內(nèi)快速分離,具有較高檢測(cè)靈敏度。馬曉年等人[40]在含有10 mmol/L Na2B4O7、5 mmol/Lβ-環(huán)糊精和8%乙腈的運(yùn)行緩沖溶液中,分離電壓、毛細(xì)管柱溫和波長(zhǎng)分別為20 kV,25℃和200 nm,兒茶素、表兒茶素、槲皮素、山奈酚和楊梅素的含量可在14 min有效分離和檢測(cè),說(shuō)明可用于分離測(cè)定茶葉中的多種成分。

    CE具有高效、快速、簡(jiǎn)便等特點(diǎn),在生命科學(xué)、藥物分析和環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用前景。但是也存在一些問(wèn)題,如線性范圍窄、重現(xiàn)性差、分析精確度不高。

    2 結(jié)語(yǔ)

    茶多酚是茶葉中主要的活性成分,具有抗癌、抗腫瘤、抗氧化、抑菌等功效,對(duì)人體的健康有重要作用,在測(cè)定茶葉中的茶多酚含量時(shí),可根據(jù)茶多酚的性質(zhì)采用多種方法測(cè)定分析,從而評(píng)價(jià)茶葉品質(zhì)和分級(jí)。色譜分析法精確度較和靈敏性高,可進(jìn)行多組分的檢測(cè);光譜分析法是近幾十年來(lái)發(fā)展最迅速的分析工具之一,操作相對(duì)簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、測(cè)定結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確,也是傳統(tǒng)化學(xué)分析方法的替代方法;電化學(xué)分析法重復(fù)性和準(zhǔn)確性好、時(shí)間短,可用于快速檢測(cè);毛細(xì)管電泳法重復(fù)性相對(duì)較差、分析精度不高、誤差大。選取高效合理準(zhǔn)確的檢測(cè)方法,可對(duì)茶葉進(jìn)行品質(zhì)鑒定和分級(jí),促進(jìn)其在食品、醫(yī)療和工業(yè)等領(lǐng)域的應(yīng)用。

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