一測多評法測定咽立爽口含滴丸中的4種成分

游正琴， 羅　奕， 吳琳琳， 茅向軍， 蘇　菊

（1.貴州醫(yī)科大學，貴州貴陽550004；2.貴州省食品藥品檢驗所，貴州貴陽550004）

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一測多評法測定咽立爽口含滴丸中的4種成分

游正琴1，2， 羅奕1， 吳琳琳1， 茅向軍2*， 蘇菊1

（1.貴州醫(yī)科大學，貴州貴陽550004；2.貴州省食品藥品檢驗所，貴州貴陽550004）

摘要：目的 建立一測多評法（QAMS）同時測定咽立爽口含滴丸中薄荷酮、樟腦、薄荷腦和龍腦的含有量。方法分析采用DB-WAX毛細管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；載氣為氮氣；FID檢測器；升溫程序為初始柱溫55℃，以1℃/min速率升至75℃，再以5℃/min速率升至105℃，維持10 min。以龍腦為內(nèi)參物，建立其與薄荷酮、樟腦、龍腦的相對校正因子，并將其應用于計算，同時內(nèi)標法對4種成分進行含有量測定。然后，比較兩種方法的結果。結果薄荷酮在0.056 8～0.511 1 mg/mL、樟腦在0.058 7～0.528 0 mg/mL、薄荷腦在0.399 2～1.995 8 mg/mL、龍腦在0.724 8～3.624 1 mg/mL范圍內(nèi)線性關系良好，平均回收率（n =3）分別為97.07％（RSD=1.23％）、96.68％ （RSD=1.38％）、98.57％（RSD=1.82％）、99.50％（RSD=1.20％）。龍腦與薄荷酮、樟腦、薄荷腦的相對校正因子分別為1.024 1、1.018 5、1.013 0，而且一測多評法的計算結果與內(nèi)標法無明顯差異。結論 該方法準確可靠，可控制咽立爽口含滴丸的質(zhì)量。

關鍵詞：咽立爽口含滴丸；薄荷酮；樟腦；薄荷腦；龍腦；一測多評法（QAMS）；內(nèi)標法

咽立爽口含滴丸是由艾片、艾納香油、薄荷素油、薄荷腦和甘草酸單銨鹽組成的苗藥復方制劑，用于急性咽炎、慢性咽炎急性發(fā)作、咽痛、咽黏膜紅腫、咽干、口臭等癥，其現(xiàn)行局頒標準在揮發(fā)性成分中僅測定了薄荷腦和龍腦的含有量［1］，不能全面控制該復方制劑的質(zhì)量。本實驗同時測定咽立爽口含滴丸中薄荷酮、樟腦、薄荷腦和龍腦的含有量，并且引入一測多評法［2-5］，以含有量相對較高、便宜易得的龍腦為內(nèi)參物。然后，將該方法和常規(guī)內(nèi)標法進行比較，以期更全面有效地控制該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 7890N氣相色譜儀、Ailgent 7693自動進樣裝置、氫火焰化檢測器（SPH-500氫氣發(fā)生器，A-10全自動空氣源）；DB-WAX毛細管柱（30 m×0.32 mm× 0.25 μm）；XS 205電子天平；KQ-300 DE超聲波數(shù)控清洗器。

1.2 材料 薄荷酮（批號11706-201205）、樟腦（批號110747-201008）、薄荷腦（批號110728-200506）和龍腦（批號110881-201107）對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。水楊酸甲酯和乙醇均為分析純。咽立爽口含滴丸樣品（批號20140630、20140701、20141203、20141204、20141205、20141208、20141209、20141221、20150310、20150311、20150413）和陰性樣品由貴州黃果樹立爽藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 DB-WAX毛細管柱（30 m×0.32 mm× 0.25 μm）；載氣為氮氣（14 mL/min）、氫氣（40 mL/min）、空氣（400 mL/min）；體積流量1.0 mL/min；進樣口溫度220℃；檢測器（FID）溫度250℃；分流比10∶1；進樣量1 μL；程序升溫（初始55℃，以1℃/min速率升至75℃，再以5℃/min速率升至105℃，保持10 min）。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品貯備液 精密稱取薄荷酮、樟腦、薄荷腦、龍腦對照品適量，置于10 mL量瓶中，乙醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度分別為薄荷酮2.840 mg/mL、樟腦2.934 mg/mL、薄荷腦9.979 mg/mL、龍腦18.120 mg/mL的對照品貯備液。

2.2.2 內(nèi)標溶液 精密稱取水楊酸甲酯適量，置于100 mL量瓶中，乙醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為11.738 2 mg/mL的內(nèi)標溶液。

2.2.3 混合對照品溶液 精密量取“2.2.2”項下內(nèi)標溶液和“2.2.1“項下對照品貯備液適量，置于5 mL量瓶中，乙醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度分別為薄荷酮0.284 0 mg/mL、樟腦0.293 4 mg/mL、薄荷腦0.798 3 mg/mL、龍腦1.449 6 mg/mL、水楊酸甲酯1.173 8 mg/mL的混合對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液 取樣品研細，精密稱取0.2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入“2.2.2”項下內(nèi)標溶液1 mL，再精密加入乙醇9 mL，密塞稱重，超聲處理（300 W、40 kHz）5 min，放冷，乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，即得。

2.2.5 陰性供試品溶液 按處方量制備缺艾片、艾納香油、薄荷腦和薄荷素油的陰性供試品，再按“2.2.4”項下方法制備陰性供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性 在“2.1”項色譜條件下，精密吸取“2.2”項下混合對照品、供試品、陰性供試品溶液各1 μL注入氣相色譜儀中分析，結果見圖1。由圖可知，各色譜峰均達到基線分離，而且各待測成分色譜峰的理論塔板數(shù)均大于15 000，而且陰性供試品溶液對待測成分無干擾。

1.薄荷酮 2.樟腦 3.薄荷腦 4.龍腦 5.水楊酸甲酯圖1　各成分色譜圖

2.4 方法學驗證

2.4.1 線性關系考察 分別精密量取“2.2.1”項下薄荷酮、樟腦對照品貯備液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 m L，薄荷腦、龍腦對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于5 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”項下水楊酸甲酯溶液0.5 mL，加乙醇溶液至刻度，搖勻，制得標準系列溶液，在“2.1”項色譜條件下進樣，測定峰面積。以對照品溶液與內(nèi)標溶液質(zhì)量濃度的比值為橫坐標（X），兩者峰面積的比值為縱坐標（Y）進行回歸，結果見表1，表明4種成分在各自范圍內(nèi)均呈現(xiàn)出良好的線性關系。

表1　4種成分的回歸方程及線性范圍

2.4.2 精密度試驗 取“2.2.3”項下混合對照品溶液適量，在“2.1”項色譜條件下連續(xù)進樣6次，測得薄荷酮、樟腦、薄荷腦和龍腦的峰面積RSD值分別為0.09％、0.06％、0.19％、0.30％，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液（批號20140701）適量，在“2.1”項色譜條件下分別于0、2、4、8、12、18、24 h測定，測得薄荷酮、樟腦、薄荷腦和龍腦與內(nèi)標物峰面積比值的RSD分別為0.84％、0.59％、0.60％、0.62％，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號20140701）0.2 g，平行6份，按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，測得薄荷酮、樟腦、薄荷腦和龍腦含有量分別為7.74、8.68、45.41、98.34 mg/g，RSD分別為0.97％、1.13％、0.78％、0.87％，表明該方法重復性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 取含有量已知的樣品（批號20140701）研細，精密稱定9份，每份0.1 g，置于10 mL量瓶中，分別按各成分質(zhì)量濃度的80％、100％、120％精密加入薄荷酮、樟腦、薄荷腦、龍腦的對照品貯備液，再加入內(nèi)標溶液1 mL，乙醇定容，按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下測定，結果見表2。

表2　加樣回收率試驗結果（n=3）

2.5 相對校正因子的計算及耐用性驗證

2.5.1 相對校正因子的計算 取“2.2.3”項下混合對照品溶液，在“2.1”項色譜條件下分別進樣0.5、0.8、1.0、1.5、2.0 μL，記錄各組分峰面積。按公式RCF =計算龍腦與薄荷酮、樟腦與薄荷腦之間的相對校正因子。其中，As為龍腦對照品的峰面積，Cs為龍腦對照品的質(zhì)量濃度，Ai為某待測成分（薄荷酮、樟腦和薄荷腦）的峰面積，Ci為某待測成分（薄荷酮、樟腦和薄荷腦）的質(zhì)量濃度。結果見表3。

表3　4種成分的相對校正因子（n=2）

2.5.2 耐用性驗證 按“2.5.1”項下方法考察了2種氣相色譜系統(tǒng)（Agilent 7980和島津GC-2014）和3種不同品牌色譜柱［DB-WAX、Rtx?-WAX、Elite-WAX毛細管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）］，以龍腦為內(nèi)標物，計算薄荷酮、樟腦和薄荷腦的RCF值及RSD值，結果見表4，表明不同氣相色譜系統(tǒng)和色譜柱對4種成分相對校正因子的影響均較小。

表4　不同氣相色譜系統(tǒng)和色譜柱測得的相對校正因子（f）

2.6 待測色譜峰的定位 通過計算在上述不同氣相色譜系統(tǒng)和色譜柱中各待測成分色譜峰與龍腦色譜峰的相對保留時間，對各成分進行定位，結果見表5，表明相對保留時間隨不同氣相色譜系統(tǒng)和色譜柱的變化較小，即可采用相對保留時間進行定位。

表5　不同儀器和色譜柱測得的相對保留時間（t i/s）

2.7 一測多評法和內(nèi)標法測定結果的比較 取咽立爽口含滴丸11批，按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進行測定，分別以內(nèi)標法和一測多評法計算供試品溶液中各待測成分的含有量，并采用準確度［6］來評價兩者的接近程度，結果見表6。由表可知，兩種方法無顯著性差異，即一測多評法可用于咽立爽口含滴丸的質(zhì)量控制。

表6　內(nèi)標法和一測多評法測定結果的比較（mg/g，n=2）

3 討論

原標準采用水飽和乙酸乙酯作為供試品溶液的溶劑，但在低溫（低于15℃）下溶劑中的水會和乙酸乙酯產(chǎn)生一定程度的分離，從而影響待測成分的溶解度［7］。本實驗在同一溫度下分別考察了甲醇、乙醇、無水乙醇和水飽和乙酸乙酯的提取率，發(fā)現(xiàn)四者無明顯差異。然而，無水乙醇和水飽和乙酸乙酯溶液在低溫儲存過程中會析出白色沉淀，而甲醇和乙醇穩(wěn)定性良好，故最終選擇毒性小、無污染的乙醇作為溶劑。

原標準在恒溫（140℃）下分離薄荷腦和龍腦，但無法將薄荷酮和樟腦完全分離。本實驗采用程序升溫（初始55℃，以1℃/min速率升至75℃，再以5℃/min速率升至105℃，保持10 min），發(fā)現(xiàn)在該條件下4種成分可完全分離，分離度均大于5.0。

薄荷酮來源于薄荷素油，而樟腦來源于艾片和艾納香油?，F(xiàn)代藥理研究表明［8-9］，薄荷酮和樟腦具有重要的藥理活性，故增加兩者作為該制劑質(zhì)量控制的指標成分。另外，龍腦作為處方中艾片和艾納香油的主要成分，含有量較高，價格便宜，容易獲取，故選擇其作為一測多評法的內(nèi)參物。

除采用準確度對兩種方進行相關性分析外，還以相關系數(shù)和夾角余弦來進行分析。結果，11批樣品中薄荷酮相關系數(shù)為0.998 995，夾角余弦為0.999 993；樟腦相關系數(shù)為0.999 777，夾角余弦為0.999 993；薄荷腦相關系數(shù)為0.999 802，夾角余弦為1.000 00，表明這兩種方法無顯著性差異。

本實驗根據(jù)《一測多評法建立的技術指南》［10］，建立了龍腦相對于薄荷酮、樟腦和龍腦的相對校正因子，并對其適應性進行考察。然后，通過比較一測多評法和內(nèi)標法的測定結果來驗證其準確性。結果表明，該方法能通過測定咽立爽口含滴丸中4種指標性成分的含有量，從而更有效地控制該制劑的質(zhì)量。

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*通信作者：茅向軍（1964—），男，博士，主任藥師，研究方向為藥品質(zhì)量標準。Tel：（0851）86808857，E-mail：1074459931@ qq.com

作者簡介：游正琴（1987—），女，碩士生，初級藥師，研究方向為藥品質(zhì)量標準。Tel：18275629973，E-mail：2640437537@qq.com

基金項目：貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)專項項目（黔科合中藥字20125030）；貴陽市科技計劃項目（筑科合同2012204-1）

收稿日期：2015-11-10

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.05.049

中圖分類號：R284.1

文獻標志碼：B

文章編號：1001-1528（2016）05-1180-04