超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在水產(chǎn)品硝基呋喃類代謝物檢測(cè)應(yīng)用的研究進(jìn)展

包永華，姜錦鵬

（浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州 310018）

硝基呋喃類藥物是一類是用來(lái)治療和控制大腸桿菌或沙門氏菌所引發(fā)疾病的抗生素。該藥價(jià)格低廉、抗菌療效好，曾被廣泛應(yīng)用于畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，治療由大腸桿菌或沙門氏菌所引發(fā)的疾病。研究表明，硝基呋喃類藥物及其代謝物對(duì)人體有致畸、致突變和可疑致癌作用[1]。世界各國(guó)普遍規(guī)定食源性動(dòng)物禁止使用硝基呋喃類藥物，并逐步健全和完善對(duì)該類藥物的管理和控制。在我國(guó)，2002年農(nóng)業(yè)部第193號(hào)公告禁止使用呋喃唑酮和呋喃他酮，2005年農(nóng)業(yè)部第560號(hào)公告將呋喃妥因和呋喃西林列入首批《獸藥地方標(biāo)準(zhǔn)廢止目錄》[2]。因此，加大對(duì)硝基呋喃類藥物殘留的檢測(cè)力度具有十分緊迫的現(xiàn)實(shí)意義。

硝基呋喃類藥物對(duì)光敏感、半衰期短，在動(dòng)物體內(nèi)代謝速度快，而代謝物以蛋白結(jié)合物的形式可以長(zhǎng)期保持穩(wěn)定狀態(tài)。因此，為了檢測(cè)硝基呋喃類藥物殘留量，通常以硝基呋喃類藥物代謝物為目標(biāo)分析物。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)水產(chǎn)品中硝基呋喃的檢測(cè)進(jìn)行了大量研究，推動(dòng)了硝基呋喃檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展。目前，硝基呋喃類代謝物的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法（ELISA）、高效液相色譜法（H PLC）、高效液相色譜-質(zhì)譜法（H PLC-M S）、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（H PLC-M S/M S）、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（U PLC-M S/M S） 等[3]。

隨著研究的深入，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法能夠充分發(fā)揮超高效液相色譜的高速、高分離度與串聯(lián)質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度的優(yōu)勢(shì)，成為檢測(cè)水產(chǎn)品硝基呋喃類代謝物的主要手段。在分析超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù)優(yōu)勢(shì)的基礎(chǔ)上，結(jié)合硝基呋喃類代謝物的性質(zhì)特點(diǎn)，對(duì)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在水產(chǎn)品硝基呋喃類代謝物分析中的應(yīng)用進(jìn)行了簡(jiǎn)要綜述。

1 硝基呋喃類藥物的特點(diǎn)及危害

1.1 硝基呋喃類藥物的特點(diǎn)

硝基呋喃類藥物包括呋喃唑酮、呋喃他酮、呋喃西林和呋喃妥因[2]，它的基本結(jié)構(gòu)是呋喃核的第5位引入硝基和第2位引入其他基團(tuán)。這類藥物都具有相似的理化性質(zhì)，性狀方面一般無(wú)臭、味微苦，外觀均呈黃色結(jié)晶性粉末。

硝基呋喃類藥物主要通過干擾細(xì)菌的氧化還原酶系統(tǒng)影響D NA合成，使細(xì)菌代謝紊亂而死亡。呋喃唑酮對(duì)常見的革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌有抑制作用，用于治療原蟲和細(xì)菌引起的痢疾、腸炎等腸道性疾??；呋喃西林臨床僅用作消毒防腐藥，用于治療創(chuàng)傷、化膿性皮炎等；呋喃妥因適用于腸桿菌屬等細(xì)菌所引起的尿路感染治療；呋喃他酮對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌均有抗菌作用[2]。

1.2 硝基呋喃類藥物的危害

硝基呋喃類藥物的危害主要表現(xiàn)如下[4]:

（1）毒性。硝基呋喃類藥物本身具有極強(qiáng)的毒性，大劑量或長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用硝基呋喃類藥物可以直接對(duì)水產(chǎn)品造成中毒危害。

（2） 三致（致癌、致畸、致突變）。高劑量或連續(xù)性使用可導(dǎo)致水產(chǎn)品發(fā)生癌變。其中，呋喃他酮為強(qiáng)致癌藥物，呋喃唑酮具有中等強(qiáng)度致癌性，并可引起細(xì)菌突變。

（3）代謝物對(duì)人體危害。雖然硝基呋喃類原形藥物在機(jī)體內(nèi)代謝迅速，但代謝產(chǎn)物能與蛋白質(zhì)結(jié)合且相當(dāng)穩(wěn)定，特別是水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留會(huì)通過食物鏈進(jìn)行富集，最終對(duì)人體健康產(chǎn)生胃腸反應(yīng)和超敏反應(yīng)等危害。

2 U PL C-MS/MS方法的優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用

2.1 U PLC-M S/M S分析在硝基呋喃類代謝物分析中的優(yōu)勢(shì)

LC-M S/M S法具有靈敏度高、檢測(cè)限低、抗干擾能力強(qiáng)、定性定量準(zhǔn)等特點(diǎn)，所以廣泛應(yīng)用于硝基呋喃代謝物的檢測(cè)和確證[5]。隨著超高效液相色譜（U PLC）的普及應(yīng)用，加上內(nèi)標(biāo)物可降低基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量結(jié)果的影響，特別是U PLC-M S/M S具有多種離子源（ESI，AC PI）、多種質(zhì)量分析器（四極桿分析器、飛行時(shí)間質(zhì)量分析器和離子肼）和各種數(shù)據(jù)分析軟件可供選擇，其在水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物檢測(cè)中具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)可實(shí)現(xiàn)各組分快速、高效的定性和定量分析，提高檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度，節(jié)省測(cè)定時(shí)間[6-7]。

2.2 U PLC-M S/M S技術(shù)在硝基呋喃類代謝物分析中的應(yīng)用

王躍等人[8]建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定水產(chǎn)品中4種硝基呋喃代謝物的方法，4種代謝物的質(zhì)量濃度在0.1～10.0 ng/mL的范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)在0.999 6～0.999 9，檢出限均為0.05μg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%～4.2%，回收率為87.3%～94.5%。楊惠宇等人[9]采用固相萃取柱凈化-超高效液相色譜-同位素稀釋串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留，4種硝基呋喃類代謝物的檢測(cè)限為0.01μg/kg，在0.05～10.00 ng/mL范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r＞0.999，平均回收率為88.5%～115.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于8%。該方法與傳統(tǒng)方法比較，操作簡(jiǎn)單快速，并有效縮短了檢測(cè)時(shí)間。高月明等人[10]應(yīng)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)法測(cè)定淡水魚中硝基呋喃代謝物，4種硝基呋喃代謝物的檢出限為0.07～0.25 μg/kg，在 0.1～10.0 ng/mL內(nèi)線性相關(guān)系數(shù) r＞0.996，4種硝基呋喃代謝衍生物的加標(biāo)回收率在75.4%～99.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%～9.2%。王狄等人[11]利用同位素內(nèi)標(biāo)法定量，使用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)水產(chǎn)品中4種硝基呋喃代謝物。通過對(duì)提取過程的簡(jiǎn)化，并加入了固相萃取凈化步驟，4種代謝物的檢出限均低于0.25μg/kg，回收率在75.2%～23.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于9.4%。劉柏林等人[12]開發(fā)了動(dòng)物源性食品中4種硝基呋喃代謝物的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測(cè)方法，4種代謝物在0.1～10.0μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到了0.995以上，平均回收率在91.8%～107.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%。孫濤等人[13]針對(duì)水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物殘留建立的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)法，4種硝基呋喃代謝物在1.0～10.0μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系r≥0.995 9，定量限在0.1～0.7μg/kg，該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏，能滿足水產(chǎn)品硝基呋喃代謝物殘留的檢測(cè)要求。楊奕等人[14]采取超高壓液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜方法，對(duì)蝦中4種硝基呋喃代謝物進(jìn)行分析，4種硝基呋喃代謝物的定量限均為1.0μg/kg，平均回收率在81.6%～95.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于13.6%，檢測(cè)方法適用于蝦中污染物殘留檢測(cè)。

3 結(jié)語(yǔ)

監(jiān)控水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物的污染情況，提高硝基呋喃代謝物的分析檢測(cè)水平，對(duì)水產(chǎn)品質(zhì)量安全管理意義十分重大。隨著U PLC-M S/M S技術(shù)的應(yīng)用發(fā)展，為硝基呋喃代謝物的檢測(cè)分析提供了一個(gè)很有潛力的發(fā)展方向。如何建立分析速度快、檢測(cè)靈敏度高、樣品前處理效率高、操作簡(jiǎn)單的U PLC-M S/M S分析方法是下一步研究的重點(diǎn)。