天麻炮制及其標(biāo)準(zhǔn)飲片的均勻化工藝研究*

高笑笑 ，李 霞 ，苗 靜，宋 嬿 ，張玉蓮 ，呂婷婷，高文遠(yuǎn)

（1.天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津 300072；2.上海上藥華宇藥業(yè)有限公司科研管理部，上海 200002）

天麻飲片一般是由蘭科植物天麻（Gastrodia elata Bl.）的干燥塊莖經(jīng)潤(rùn)切或蒸切兩種炮制工藝得到[1-2]。其主要成分有天麻素，對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛和腺苷等[3-5]。目前已有學(xué)者對(duì)何首烏、制何首烏、檳榔、厚樸、姜厚樸、白附子、丹參、酒丹參等多種飲片進(jìn)行了均勻化研究，為中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定了基礎(chǔ)[6-12]。筆者對(duì)潤(rùn)切和蒸切兩種炮制工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到了最佳炮制工藝參數(shù)。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)合綜合評(píng)分優(yōu)選出天麻標(biāo)準(zhǔn)飲片的最佳均勻化工藝。為天麻飲片的質(zhì)量控制的提升以及天麻標(biāo)準(zhǔn)飲片的進(jìn)一步研究提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2030高效液相色譜儀，KH-250B型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市禾創(chuàng)超聲儀器有限公司），CP225D型Sartorius分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），LG-04型四兩裝高速中藥粉碎機(jī)（瑞安市百信藥機(jī)器械廠），RE-200A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），SHZ-D（III）循環(huán)水式真空泵（鞏義市英峪儀器廠），Milli-Q超純水系統(tǒng)（Millipore，Bedford，MA，USA），各種規(guī)格篩子。

1.2 試藥 天麻藥材由上海上藥華宇藥業(yè)有限公司提供，均勻化用天麻飲片由天津市中藥飲片廠有限公司提供（產(chǎn)地：安徽，批號(hào)：G1707152-01），經(jīng)過(guò)天津大學(xué)藥學(xué)院高文遠(yuǎn)教授鑒定為蘭科植物天麻（Gastrodia elata B1.）的干燥塊莖。D-無(wú)水葡萄糖（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110833-201205，99.5%），天麻素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110807-201306，96.8%），對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品（天津士蘭科技有限公司，PCM-DQJ-001，98%）。乙腈為色譜純，磷酸、乙醇、苯酚及濃硫酸均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 天麻飲片蒸切工藝

2.1.1 生產(chǎn)工藝流程 原藥材→除雜洗凈→蒸透→切薄片→干燥。以天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、總多糖含量為指標(biāo)，考察浸泡時(shí)間、蒸制時(shí)間、干燥溫度對(duì)天麻的影響，優(yōu)選出最佳炮制工藝。見(jiàn)表1。

表1 炮制工藝考察因素

2.1.2 天麻蒸切飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.1.2.1 天麻素、對(duì)羥基苯甲醇含量測(cè)定 參照2015版《中國(guó)藥典》天麻項(xiàng)下天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量測(cè)定方法。

2.1.2.2 總多糖含量測(cè)定 對(duì)照品的制備：精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的D-無(wú)水葡萄糖103.0 mg，置50 mL容量瓶中加蒸餾水至刻度，濃度2.06 mg/mL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液20，30，40，50，60 μL分別置于具塞試管中各加蒸餾水使體積為1.0 mL，再分別加入5%苯酚試液1.5 mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0 mL，搖勻后放置10 min，置沸水浴中15 min，取出，流水冷卻至室溫，另以蒸餾水1 mL，加苯酚和濃硫酸同上操作為空白試液，于490 nm處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

天麻多糖的提取：分別精密稱(chēng)取天麻飲片粉末0.3 g，置于燒瓶中加95%乙醇100 mL，回流1 h，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)?5%熱乙醇洗滌3次，殘?jiān)B同濾紙置于燒瓶中，加蒸餾水100 mL，加熱提取2 h，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)脽崴礈?次，洗滌液并入濾液中，放冷后移入500 mL量瓶，加水至刻度作為天麻多糖提取液，備用。

天麻多糖含量測(cè)定：分別精密吸取上述天麻多糖的提取液0.2mL，置具塞試管中加蒸餾水至1.0mL，搖勻，分別加入苯酚溶液1.5 mL，搖勻后迅速滴加濃硫酸5.0 mL，搖勻后放置10 min，置沸水浴中加熱15 min，取出，每種方法提取液平行3次顯色，分光光度法于490 nm處測(cè)定吸光度，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總多糖含量。

2.1.2.3 測(cè)定結(jié)果 以天麻素、對(duì)羥基苯甲醇總含量為指標(biāo)，各因素對(duì)其影響大小為：干燥溫度>蒸制時(shí)間>浸泡時(shí)間，最佳炮制工藝為A1B2C2，即浸泡0 h，蒸制2.5 h，切片后于60℃烘干；以總多糖含量為指標(biāo)，各因素對(duì)其影響大小為：浸泡時(shí)間>蒸制時(shí)間>干燥溫度，最佳炮制工藝為A2B3C1，即浸泡3 h，蒸制3 h，切片后于40℃烘干；以綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)（0.5×天麻素對(duì)羥基苯甲醇總含量+0.5×總多糖含量）為指標(biāo)，各因素對(duì)其影響大小為：浸泡時(shí)間>蒸制時(shí)間>干燥溫度，最佳炮制工藝為A2B3C1，即浸泡3 h，蒸制3 h，切片后于40℃烘干。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.1.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 按照最佳炮制工藝，制備3批天麻飲片，測(cè)定天麻素、對(duì)羥基苯甲醇總含量和總多糖含量。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)選的炮制工藝穩(wěn)定、可行。因此，天麻蒸切工藝的最佳炮制工藝為：取天麻藥材，浸泡3 h，蒸制3 h，切片后于40℃烘干。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.2 天麻飲片潤(rùn)切工藝

2.2.1 生產(chǎn)工藝流程 原藥材→除雜洗凈→浸泡→潤(rùn)透→切薄片→干燥。以天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、總多糖含量為指標(biāo)，考察浸泡時(shí)間、悶潤(rùn)時(shí)間、干燥溫度對(duì)天麻的影響，優(yōu)選出最佳炮制工藝。見(jiàn)表4。

2.2.2 天麻潤(rùn)切飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.2.2.1 天麻素、對(duì)羥基苯甲醇含量測(cè)定 同“2.1.2.1”部分。

2.2.2.2 總多糖含量測(cè)定 同“2.1.2.2”部分。

表2 天麻飲片蒸切工藝考察

表3 最佳炮制工藝驗(yàn)證結(jié)果%

表4 炮制工藝考察因素

2.2.2.3 測(cè)定結(jié)果 以天麻素、對(duì)羥基苯甲醇總含量為指標(biāo)，各因素對(duì)其影響大小為：浸泡時(shí)間>悶潤(rùn)時(shí)間>干燥溫度，最佳炮制工藝為A3B1C2，即浸泡60h，悶潤(rùn)10 h，切片后于60℃烘干；以總多糖含量為指標(biāo)，各因素對(duì)其影響大小為：干燥溫度>浸泡時(shí)間>悶潤(rùn)時(shí)間，最佳炮制工藝為A2B3C2，即浸泡54 h，悶潤(rùn)22 h，切片后于60℃烘干；以綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)（0.5×天麻素對(duì)羥基苯甲醇總含量+0.5×總多糖含量）為指標(biāo)，各因素對(duì)其影響大小為：干燥溫度>浸泡時(shí)間>悶潤(rùn)時(shí)間，最佳炮制工藝為A2B3C2，即浸泡54 h，悶潤(rùn)22 h，切片后于60℃烘干。結(jié)果見(jiàn)表5。

2.2.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果 按照最佳炮制工藝，制備3批天麻飲片，測(cè)定天麻素、對(duì)羥基苯甲醇總含量和總多糖含量。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)選的炮制工藝穩(wěn)定、可行。因此，天麻潤(rùn)切工藝的最佳炮制工藝為：取天麻藥材，浸泡54 h，悶潤(rùn)22 h，切片后于60℃烘干。結(jié)果見(jiàn)表6。

2.3 均勻化工藝研究

2.3.1 最佳粒度篩選 稱(chēng)取均勻化用天麻飲片適量，粉碎，制備不同粒度的標(biāo)準(zhǔn)飲片，采用2015版《中國(guó)藥典》中天麻項(xiàng)下含量測(cè)定方法測(cè)定其中的天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量。結(jié)果顯示，能通過(guò)24目篩的粉末所含的天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量相差不大，故篩選出的可作為最佳粒度的天麻標(biāo)準(zhǔn)飲片即為能通過(guò)2號(hào)篩（24目）的粉末。結(jié)果見(jiàn)表7。2.3.2 因素與水平的確定 稱(chēng)取天麻飲片適量，用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，根據(jù)最佳粒度篩選結(jié)果，以粉碎時(shí)間（A）、粉碎次數(shù)（B）和投料量（C）為考察因素，選用L9（34）正交設(shè)計(jì)表。見(jiàn)表8。

2.3.3 正交試驗(yàn)及結(jié)果

2.3.3.1 天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量測(cè)定 參照2015版《中國(guó)藥典》天麻項(xiàng)下天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量測(cè)定方法，分別對(duì)制得的9個(gè)粉末進(jìn)行含量測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表9。

2.3.3.2 出粉率計(jì)算 稱(chēng)取相應(yīng)質(zhì)量的天麻飲片，按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行粉碎，將所得粉末過(guò)2號(hào)篩（24目），可通過(guò)的粉末置于一邊，未能通過(guò)篩網(wǎng)的粉末則返回粉碎機(jī)內(nèi)再次粉碎，試驗(yàn)結(jié)束后合并，稱(chēng)量通過(guò)2號(hào)篩粉末的總重量，記為出粉量，計(jì)算出粉率。出粉率＝出粉量/天麻飲片量×100%。結(jié)果見(jiàn)表9。

表5 天麻飲片潤(rùn)切工藝考察

表6 最佳炮制工藝驗(yàn)證結(jié)果

表7 不同粒度天麻標(biāo)準(zhǔn)飲片中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量測(cè)定

表8 均勻化工藝的因素水平表

2.3.3.3 綜合指標(biāo)評(píng)價(jià) 由結(jié)果可知，各因素對(duì)出粉率的影響為B＞A＞C，即粉碎次數(shù)＞投料量＞單次粉碎時(shí)間；各因素對(duì)天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量的影響為C＞A＞B，即投料量＞單次粉碎時(shí)間＞粉碎次數(shù)。以綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，各因素對(duì)其影響為B＞A＞C，即粉碎次數(shù)＞投料量＞單次粉碎時(shí)間，故最佳均勻化制備工藝為A3B3C3，即單次粉碎時(shí)間15 s，粉碎3次，投料量為粉碎機(jī)總體積的3/4。結(jié)果見(jiàn)表9。

2.3.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 按上述最佳均勻化制備工藝進(jìn)行驗(yàn)證，平行實(shí)驗(yàn)3次，分別測(cè)定出粉率、天麻素和對(duì)羥基苯甲醇總含量。驗(yàn)證結(jié)果顯示，由最佳均勻化制備工藝制備的天麻標(biāo)準(zhǔn)飲片，各指標(biāo)測(cè)定值穩(wěn)定，RSD值均小于2%，驗(yàn)證了正交試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性及所選工藝參數(shù)的合理性，表明該均勻化制備工藝穩(wěn)定可行。見(jiàn)表10。

3 討論

2015年版《中國(guó)藥典》中雖記載了各種中藥飲片的炮制方法，卻沒(méi)有明確的工藝參數(shù)，例如溫度，時(shí)間等均會(huì)影響到飲片的外觀和內(nèi)在品質(zhì)。殷放宙等[13]研究了不同炮制溫度及時(shí)間對(duì)梔子和山楂顏色值的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)梔子中火及武火炒制的時(shí)間為7 min，炒山楂需文火炒制5 min，焦山楂需中火炒制6 min，山楂炭需武火炒制8 min可達(dá)到炮制所需的顏色要求。張影月等[14]考察了研究不同炮制時(shí)間對(duì)杜仲中4個(gè)指標(biāo)成分在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)行為的影響，結(jié)果顯示炮制2 h杜仲中的主要成分相對(duì)于其他炮制時(shí)間杜仲在大鼠體內(nèi)的吸收量有所提高，故杜仲炮制時(shí)間宜控制在2 h較為合理。本文考察了浸泡時(shí)間，悶潤(rùn)/蒸制時(shí)間以及干燥溫度對(duì)天麻飲片的影響，優(yōu)化了炮制工藝，明確了兩種炮制工藝的參數(shù)。兩種炮制方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩種工藝的總多糖含量相差不大，蒸切工藝中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的總含量明顯高于潤(rùn)切工藝，可能與悶潤(rùn)過(guò)程中有效成分在水中流失有關(guān)。

表9 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表10 最佳粉碎工藝驗(yàn)證結(jié)果

粉碎粒度對(duì)有效成分的溶出具有一定的影響。丁苗苗等[15]人對(duì)西洋參的超微粉和粗粉中人參皂苷Re、Rb1的溶出度進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超微粉中人參皂苷Rb1的累積溶出度高于粗粉，人參皂苷Re的累積溶出度無(wú)顯著性差異。筆者考察了不同粒度的天麻標(biāo)準(zhǔn)飲片，通過(guò)測(cè)定天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的總含量，篩選出了最佳粒度的天麻標(biāo)準(zhǔn)飲片，保證了有效成分的含量。

出粉率反映了均勻化方法的粉碎效率，正交設(shè)計(jì)中的3個(gè)考察因素均會(huì)對(duì)其產(chǎn)生影響。中藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不能工業(yè)化批量生產(chǎn)，存在供應(yīng)不足的問(wèn)題[16-17]。出粉率可作為均勻化制備工藝的一個(gè)重要指標(biāo)，以避免中藥標(biāo)準(zhǔn)飲片此后作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可能出現(xiàn)的供應(yīng)不足問(wèn)題。本研究采用正交設(shè)計(jì)結(jié)合綜合評(píng)分法優(yōu)選出最佳均勻化工藝，與單一指標(biāo)評(píng)定飲片質(zhì)量相比，優(yōu)選出的天麻標(biāo)準(zhǔn)飲片均勻化方法更為合理和全面。

中藥飲片的成分復(fù)雜，無(wú)規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)，大多數(shù)飲片多參考其藥材標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制質(zhì)量，中藥標(biāo)準(zhǔn)飲片是衡量中藥飲片質(zhì)量最合適的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[18-20]。本研究為天麻飲片的質(zhì)量控制提供一種新的更具專(zhuān)屬性、科學(xué)性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可為中藥標(biāo)準(zhǔn)飲片的均勻化研究提供參考，進(jìn)一步提高中藥飲片質(zhì)量控制技術(shù)水平。