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    金艷獼猴桃組織培養(yǎng)適宜條件篩選

    2019-01-03 02:05:58吳燕燕章辰飛吳志勇吳月燕
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年21期
    關(guān)鍵詞:愈傷組織嫩葉莖段

    吳燕燕 章辰飛 吳志勇 吳月燕

    摘要:以金艷獼猴桃嫩葉、莖段作為外植體材料,研究不同消毒體系滅菌效果及不同激素組合對(duì)愈傷組織、不定芽、生根等誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明,葉片消毒相對(duì)最優(yōu)方法為70%乙醇30 s+0.1% HgCl2 3 min,莖段消毒相對(duì)最優(yōu)方法為70%乙醇30 s+0.1% HgCl2 4 min;莖段比葉片更容易染菌,而葉片比莖段更容易褐化;愈傷組織誘導(dǎo)時(shí),葉片最優(yōu)激素組合為6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L,莖段為6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L;不定芽誘導(dǎo)最優(yōu)激素組合為6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,在此條件下不定芽長勢較快,含單芽或多芽,有少量愈傷組織;最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.8 mg/L,生根率達(dá)到87.78%,植株生長健壯,根密、多。

    關(guān)鍵詞:金艷;獼猴桃;組織培養(yǎng);激素;愈傷組織;嫩葉;莖段

    中圖分類號(hào): S663.404+.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號(hào):1002-1302(2019)21-0111-04

    收稿日期:2018-08-22

    基金項(xiàng)目:浙江省一流學(xué)科(A)生物工程創(chuàng)新(編號(hào):CX2017013)。

    作者簡介:吳燕燕(1993—),女,浙江杭州人,碩士,從事植物生理生化研究。E-mail:935986197@qq.com。

    通信作者:吳月燕,碩士,從事遺傳育種研究。E-mail:wyynb2009@163.com。

    在獼猴桃快繁技術(shù)體系建立中,通常是以葉片、葉柄、莖尖、莖段、種子等作為外植體進(jìn)行研究的[1-6],而不同外植體材料對(duì)愈傷組織、不定芽的誘導(dǎo)能力有很大差別,如甘麗萍等研究指出,嫩莖是誘導(dǎo)愈傷組織最好的外植體[7]。對(duì)同一種外植體而言,不同放置方式也會(huì)影響快繁效果,有研究表明,葉片上表面朝下的愈傷組織誘導(dǎo)率較高,莖段橫放比豎放誘導(dǎo)效果好[8]。同時(shí),在組織培養(yǎng)過程中,不同生長調(diào)節(jié)劑(激素)會(huì)發(fā)揮不同的作用,生長素、細(xì)胞分裂素在組織培養(yǎng)中對(duì)組織生長起著非常關(guān)鍵的作用。另外,碳源種類、濃度等也會(huì)影響組織培養(yǎng)快繁效果,有研究表明,低濃度碳源不能很好誘導(dǎo)芽的分化形成,而過高濃度碳源雖可促進(jìn)芽分化,但抑制苗的生長[9]。

    金艷是中國科學(xué)院武漢植物園以“毛花”獼猴桃為母本,“中華”獼猴桃為父本雜交培育出的獼猴桃新品種[10],具有豐產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、可溶性固形物含量高、果實(shí)極耐貯藏、糖酸比高等優(yōu)良特性[10-11],目前鮮見對(duì)金艷獼猴桃組織培養(yǎng)快繁的研究報(bào)道。本試驗(yàn)以金艷獼猴桃莖段、葉片為外植體,設(shè)計(jì)不同激素濃度及配比,以篩選出適宜金艷獼猴桃組織培養(yǎng)快繁的條件,為金艷獼猴桃的快速推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1材料與方法

    1.1材料選擇

    2017年4—5月,于浙江省寧波市北侖區(qū)北侖芳野瓜果有限公司獼猴桃基地采取金艷獼猴桃?guī)в心廴~的新梢莖段,冰箱中4 ℃冷藏。

    1.2不同消毒劑及消毒時(shí)間對(duì)金艷獼猴桃外植體的滅菌效果

    將采集的金艷獼猴桃?guī)~莖段,去爛葉爛頭,用洗潔精清洗1次,再用流水沖洗30 min;分別取3~6 cm的莖段、5~30 cm2 的嫩葉,分別以70%乙醇、0.1%氯化汞(HgCl2)處理不同時(shí)間進(jìn)行滅菌消毒;無菌水清洗4~5次,濾干,用無菌紙吸干莖段或嫩葉表面水分;切取莖段長約1 cm、葉片約0.5 cm2,并接種到培養(yǎng)基上,定期觀察外植體污染、褐化數(shù)量及生長情況,統(tǒng)計(jì)污染率、褐化率,計(jì)算消毒效果[7]。

    1.3不同激素組合對(duì)愈傷組織、不定芽、生根的誘導(dǎo)情況

    1.3.1愈傷組織誘導(dǎo)無菌環(huán)境條件下,將經(jīng)預(yù)處理的葉片及莖段分別接種到以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,分別添加有6-芐氨基嘌呤(6-BA)0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L和萘乙酸(NAA)0.1、0.5 mg/L為組合激素的培養(yǎng)基上,共設(shè)置10個(gè)處理;接種后20 d調(diào)查各處理愈傷組織誘導(dǎo)情況,統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率。

    1.3.2不定芽誘導(dǎo)無菌環(huán)境條件下,將愈傷組織轉(zhuǎn)接到以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,分別添加有6-BA 0.5、1.0、1.5 mg/L和NAA 0.1、0.3、0.5 mg/L為組合激素的培養(yǎng)基上,共設(shè)置9個(gè)處理;接種后20 d調(diào)查各處理愈傷組織不定芽誘導(dǎo)情況。

    1.3.3生根誘導(dǎo)無菌環(huán)境條件下,將誘導(dǎo)形成帶有4~5張葉片的不定芽轉(zhuǎn)接到以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,分別添加吲哚丁酸(IBA)0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mg/L的生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng),接種后30 d調(diào)查統(tǒng)計(jì)生根情況。

    1.4培養(yǎng)條件

    誘導(dǎo)培養(yǎng)基中須同時(shí)添加蔗糖30 g/L、瓊脂7 g/L,pH值調(diào)控到在5.7~5.8之間。培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)溫度為23~26 ℃,光照度為1 000~1 500 lx,光照時(shí)間為16 h/d。

    1.5統(tǒng)計(jì)分析

    采用Excel 2010軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    2結(jié)果與分析

    2.1不同消毒劑及消毒時(shí)間對(duì)金艷獼猴桃外植體的滅菌效果

    消毒不僅是將外植體表面的微生物去除,同時(shí)也是對(duì)外植體自生菌的消減,會(huì)對(duì)外植體本身造成一定影響,而消毒劑種類和消毒時(shí)間的不同會(huì)影響其對(duì)外植體的消毒效果。由表1可知,葉片消毒效果相對(duì)最好的方法為70%乙醇30 s+0.1% HgCl2 3 min,此時(shí)污染率為12.50%,褐化率為12.50%,消毒效果達(dá)到87.50%,莖段消毒效果相對(duì)最好的方法為70%乙醇30 s+0.1% HgCl2 4 min,此時(shí)污染率為7.50%,褐化率為10.00%,消毒效果達(dá)到91.25%;同種消毒劑消毒不同時(shí)間,對(duì)金艷獼猴桃外植體的效果差異較大,消毒劑為70%乙醇時(shí),不同消毒時(shí)間葉片污染率高低為10 s>20 s>30 s,莖段為10 s>20 s=30 s,消毒劑為0.1% HgCl2時(shí),不同消毒時(shí)間葉片污染率高低依次為3 min>4 min>5 min,莖段為3 min>4 min=5 min,說明消毒時(shí)間越長,外植體滅菌效果相對(duì)越好;同一消毒劑消毒相同時(shí)間,莖段污染率多高于葉片,說明莖段比葉片更容易染菌,這可能是由于莖段采集時(shí)會(huì)產(chǎn)生傷口,進(jìn)而導(dǎo)致莖段更易遭受外生菌和內(nèi)生菌侵染;消毒劑為70%乙醇時(shí),不同消毒時(shí)間葉片褐化率高低依次為20 s=30 s>10 s,莖段為30 s>20 s>10 s,消毒劑為0.1% HgCl2時(shí),不同消毒時(shí)間葉片、莖段褐化率高低均依次為5 min>4 min>3 min,說明消毒時(shí)間越長,消毒劑對(duì)葉片、莖段傷害越大,并主要表現(xiàn)在外植體的切面上;同一消毒劑消毒相同時(shí)間,葉片的褐化率多高于莖段,其褐化程度相對(duì)更為嚴(yán)重,這一方面可能是由于切取葉片時(shí)受到的機(jī)械傷害大于莖段,另一方面可能是消毒劑對(duì)葉片的毒害作用高于莖段。

    2.2不同激素組合對(duì)愈傷組織、不定芽、生根誘導(dǎo)的影響

    2.2.1對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響葉片、莖段誘導(dǎo)形成的愈傷組織分別見圖1、圖2,影響結(jié)果見表2。由表2可知,誘導(dǎo)產(chǎn)生葉片愈傷組織的相對(duì)最適激素組合為6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L,其誘導(dǎo)率為90.0%,而激素組合6-BA1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L 的誘導(dǎo)率相對(duì)最低,僅為48.5%;誘導(dǎo)產(chǎn)生莖段愈傷組織的相對(duì)最適激素組合為6-BA0.1 mg/L+NAA0.1 mg/L,其誘導(dǎo)率為97.5%,而激素組合6-BA1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L的誘導(dǎo)率相對(duì)最低,僅為43.0%;NAA質(zhì)量濃度一定時(shí),隨6-BA質(zhì)量濃度的增加,葉

    片愈傷組織誘導(dǎo)率總體呈先增后降趨勢,說明適度低質(zhì)量濃度6-BA有利于葉片愈傷組織的產(chǎn)生,而高質(zhì)量濃度6-BA不利于葉片愈傷組織的產(chǎn)生;對(duì)莖段而言,NAA質(zhì)量濃度為0.1 mg/L時(shí),隨6-BA質(zhì)量濃度的增加,莖段愈傷組織誘導(dǎo)率呈逐漸下降趨勢,而在NAA質(zhì)量濃度為0.5 mg/L 時(shí),莖段愈傷組織誘導(dǎo)率呈先下降后上升趨勢,NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L更不利于莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。

    2.2.2對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響由表3可知,激素組合6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L時(shí),不定芽分化率相對(duì)最高,達(dá)到65.00%,不定芽長勢較快,含有單芽或多芽,有少量愈傷組織產(chǎn)生; 當(dāng)NAA質(zhì)量濃度為0.1 mg/L時(shí),隨6-BA質(zhì)量濃度的增加?愈傷組織不定芽分化率呈先增后降趨勢?當(dāng)NAA質(zhì)量濃度分別為0.3、0.5 mg/L時(shí),隨6-BA質(zhì)量濃度的增加,愈傷組織不定芽分化率呈增加趨勢,說明高質(zhì)量濃度6-BA有利于不定芽的分化,而NAA為0.1 mg/L時(shí)出現(xiàn)的下降可能是由于6-BA與NAA用量比值過高,抑制了不定芽的產(chǎn)生;6-BA質(zhì)量濃度一定時(shí),隨NAA質(zhì)量濃度的增加,不定芽分化率呈逐漸下降趨勢,高質(zhì)量濃度NAA抑制愈傷組織分化成不定芽,還對(duì)不定芽的生長產(chǎn)生抑制作用。

    2.2.3對(duì)生根培養(yǎng)的影響圖3為不定芽誘導(dǎo)形成的苗,圖4為生根的無菌苗,對(duì)生根培養(yǎng)的影響結(jié)果見表4,由表4可知?隨IBA濃度的增加?不定芽生根率呈先升后降趨勢,IBA質(zhì)量濃度為0.8 mg/L時(shí)生根率相對(duì)最高,達(dá)到87.78%,此時(shí)植株生長健壯,根密、多;IBA質(zhì)量濃度分別為0.5、0.9 mg/L 時(shí),不定芽生根率都低于25.0%,說明IBA質(zhì)量濃度過低或過高都不利于根的生長。

    3結(jié)論與討論

    外植體滅菌是植物組織培養(yǎng)中至關(guān)重要且必不可少的環(huán)節(jié),而消毒劑的選擇與使用十分關(guān)鍵。消毒劑種類很多,找到適宜的消毒劑和消毒時(shí)間對(duì)組織培養(yǎng)可起到事半功倍的作用。于紅梅等研究認(rèn)為,0.1% HgCl2作為消毒劑,其消毒效果明顯好于NaClO、H2O2[7]。 本試驗(yàn)結(jié)果表明??葉片最適消毒組合為70%乙醇30 s+0.1% HgCl2 3 min,消毒效果達(dá)到87.50%;莖段消毒最適組合為70%乙醇30 s+0.1% HgCl24 min,消毒效果達(dá)到91.25%;莖段比葉片更容易染菌,這可能是由于莖段采集時(shí)會(huì)產(chǎn)生傷口,進(jìn)而導(dǎo)致莖段更易遭受外生菌和內(nèi)生菌侵染;葉片比莖段更容易褐化,這可能是由于切取葉片時(shí)受到的機(jī)械傷害大于莖段?或是消毒劑對(duì)葉片的毒害作用高于莖段。

    生長素是植物愈傷組織誘導(dǎo)中必須使用的物質(zhì)[12-13]。杜希華等研究指出,培養(yǎng)基中只添加6-BA是無法誘導(dǎo)出愈傷組織的,生長素和細(xì)胞分裂素的配合使用有利于愈傷組織的誘導(dǎo)[14]。本試驗(yàn)結(jié)果表明,在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi),低質(zhì)量濃度6-BA有利于葉片愈傷組織的產(chǎn)生,而高質(zhì)量濃度6-BA 不利于葉片愈傷組織的產(chǎn)生;NAA質(zhì)量濃度為0.1 mg/L 時(shí),隨6-BA質(zhì)量濃度的增加,莖段愈傷組織誘導(dǎo)率呈逐漸下降趨勢,而在NAA質(zhì)量濃度為0.5 mg/L時(shí),莖段愈傷組織誘導(dǎo)率呈先下降后上升趨勢,NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L更不利于莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織,這與吳興海的研究結(jié)果[15]較為吻合。

    細(xì)胞分裂素對(duì)獼猴桃愈傷組織分化和芽分化誘導(dǎo)起關(guān)鍵作用[16]。朱寶成等認(rèn)為,NAA除能誘導(dǎo)愈傷組織分化外,還能跟6-BA配合使愈傷組織分化出芽和根[17]。楊成行等研究表明,金線蓮再生培養(yǎng)體系中,細(xì)胞分裂素和生長素配合使用能促進(jìn)叢生芽的誘導(dǎo)[18]。本試驗(yàn)結(jié)果表明,6-BA質(zhì)量濃度一定時(shí),隨NAA質(zhì)量濃度的增加,不定芽分化率呈逐漸下降趨勢,高質(zhì)量濃度NAA抑制愈傷組織分化成不定芽,還對(duì)不定芽的生長產(chǎn)生抑制作用,這可能是由于NAA作為生長素誘導(dǎo)形成愈傷組織的效果要明顯優(yōu)于不定芽,同時(shí)也符合生長素與細(xì)胞分裂素比值越小則越有利于芽分化,而比值越大則有利于根分化的試驗(yàn)規(guī)律;NAA質(zhì)量濃度為0.1 mg/L時(shí),隨6-BA質(zhì)量濃度的增加,愈傷組織不定芽分化率呈先增后降趨勢,這種下降的出現(xiàn)可能與6-BA、NAA比值過高而存在毒副作用,從而抑制不定芽的產(chǎn)生[15]有關(guān)。

    吳興海研究指出,使用IBA 0.6 mg/L誘導(dǎo)獼猴桃生根時(shí)會(huì)產(chǎn)生少量愈傷組織,生根率低,且芽的生長受到抑制[15]。隆前進(jìn)認(rèn)為,高質(zhì)量濃度IBA處理獼猴桃扦插苗可能會(huì)有毒害作用而降低其生根率[19]。本試驗(yàn)結(jié)果表明,金艷獼猴桃最適生根的IBA質(zhì)量濃度為0.8 mg/L,其生根誘導(dǎo)率相對(duì)最高,達(dá)87.78%,而不論是低質(zhì)量濃度IBA還是更高質(zhì)量濃度IBA都不利于根的生長;IBA質(zhì)量濃度為0.9 mg/L時(shí)獼猴桃生根率出現(xiàn)驟降,可能與高質(zhì)量濃度IBA對(duì)不定芽產(chǎn)生毒害作用有關(guān)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]劉小剛,焦晉,趙宇,等. 野生軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)及褐變處理[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2013,29(19):113-119.

    [2]劉永立,蘭大偉,畢靜華,等. 葛棗獼猴桃組織培養(yǎng)中的器官形成與植株再生[J]. 果樹學(xué)報(bào),2005,22(3):220-223.

    [3]張海平,周建峰,任目瑾. 海沃德獼猴桃組織培養(yǎng)快速繁育技術(shù)研究[J]. 陜西林業(yè)科技,2011(2):8-11.

    [4]謝志兵,魯旭東. 獼猴桃組織培養(yǎng)中適宜激素組合的篩選[J]. 北方果樹,2003(3):7-8.

    [5]于紅梅,趙密珍,錢亞明,等. 海沃德獼猴桃?guī)а壳o段的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(11):78-79.

    [6]朱道圩,王靜毅,呂宗強(qiáng). 獼猴桃實(shí)生苗組織培養(yǎng)體系建立的研究[J]. 落葉果樹,2005(2):5-7.

    [7]甘麗萍,阮神清,曾曉琳. “三峽虹”紅陽獼猴桃組織培養(yǎng)體系的篩選[J]. 北方園藝,2016,9:114-117.

    [8]陳明霞. 懷山藥葉片和莖段的離體培養(yǎng)及形態(tài)發(fā)生中組織細(xì)胞學(xué)和生理學(xué)的研究[D]. 新鄉(xiāng):河南師范大學(xué),2001:2-15.

    [9]謝志兵. 水解酪蛋白和不同碳源在獼猴桃組織培養(yǎng)的作用[J]. 農(nóng)業(yè)與技術(shù),2003(4):56-59.

    [10]鐘彩虹,張鵬,韓飛,等. 獼猴桃種間雜交新品種‘金艷的果實(shí)發(fā)育特征[J]. 果樹學(xué)報(bào),2015,32(6):1152-1160.

    [11]李紀(jì)華,楊紀(jì)紅,李光華,等. 金艷獼猴桃在河南西峽引種表現(xiàn)與栽培技術(shù)要點(diǎn)[J]. 果樹實(shí)用技術(shù)與信息,2017(9):10-12.

    [12]譚彬,郭水歡,韓亞萍,等. 毛桃葉片愈傷組織誘導(dǎo)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,45(5):37-40.

    [13]劉義存,黃天啟,林順權(quán). 枇杷屬若干野生種葉片愈傷組織誘導(dǎo)和再分化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2018,46(5):32-35.

    [14]杜希華,孫秀玲,郝崗平,等. 不同外植體和激素對(duì)銀杏愈傷組織誘導(dǎo)和生長的影響[J]. 山東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,23(1):129-133.

    [15]吳興海. 虎掌和獼猴桃組織培養(yǎng)的研究[D]. 西安:陜西師范大學(xué),2003:28-31.

    [16]牛曉林. 長白山軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)和快繁技術(shù)研究[D]. 南京:南京林業(yè)大學(xué),2012:9-12.

    [17]朱寶成,吳愛民,成亞利,等. 藥用作物掌葉半夏組織培養(yǎng)及藥物成分分析[J]. 作物學(xué)報(bào),1995(4):475-478.

    [18]楊成行,李曉婷,袁建振,等. 金線蓮組織培養(yǎng)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 草業(yè)科學(xué),2018,35(5):1047-1056.

    [19]隆前進(jìn). 獼猴桃組織培養(yǎng)和快繁技術(shù)研究[D]. 金華:浙江師范大學(xué),2010:22-27.

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