紅豆樹莖枝中黃酮類成分及其抑菌活性研究

邱亞鐵，石 妍，徐會有，倪 林,*，陳啟建，何碧珠，盧海嘯

1福建農(nóng)林大學植物保護學院，福州 350002；2玉林師范學院 廣西農(nóng)產(chǎn)資源化學與生物技術重點實驗室，玉林 537000； 3福建農(nóng)林大學 自然生物資源保育利用福建省高校工程研究中心，福州 350002

紅豆樹(Ormosiahosiei)隸屬于豆科(Leguminosae)紅豆屬(Ormosia)，又稱鄂西紅豆樹[1]，主要分布在福建、浙江、江蘇等地區(qū)，是國家Ⅱ級重點保護樹種，具有較高的藥用價值。其根、枝、葉和種子均可入藥，具有理氣、通經(jīng)等功效，可用于治療疝氣、腹痛、血滯經(jīng)閉等癥狀[2]。文獻研究發(fā)現(xiàn)，紅豆樹的藥用價值開發(fā)與利用幾乎未見報道，化學成分研究方面僅報道了4個生物堿類成分[3]。

本課題組前期發(fā)現(xiàn)，紅豆樹枝條提取物對禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)、西瓜尖鐮孢菌(Fusariumoxysporumf)、茄病鐮刀菌(Fusariumsolani)3種植物病原真菌有較好的抑制活性。為深入研究抑菌活性物質(zhì)，我們對紅豆樹枝條提取物進行了系統(tǒng)的化學成分研究，并從中分離得到了16個黃酮類化合物，分別鑒定為圓莢草雙糖苷(Sphaerobioside，1)、5,7-二羥基-4′-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(sissotrin，2)、4′,8-二甲氧基-7-O-β-D-葡萄糖基異黃酮(4′,8-dimethoxyl-7-O-β-D-glucopyranosyl isoflavone，3)、芒柄花苷(ononin，4)、異櫻黃素-7-O-β-D-葡萄糖苷(isoprunetin-7-O-β-D-glucoside，5)、蘆丁(rutin，6)、山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷(kaempferol-3-O-β-D-rutinoside，7)、4′-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-木糖(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Kushenol O，8)、4′-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-芹糖(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7-hydroxy-4′-methoxylisoflavone-7-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranoside，9)、染料木素(genistein，10)、異櫻黃素(isoprunetin，11)、2′,4′,5,7-四羥基異黃酮(2′,4′,5,7-tetrahydroxyisoflavone，12)、大豆素(daidzein，13)、柚皮素(naringenin，14)、二氫染料木素(dihydrogenistein，15)、去甲基化美迪紫檀素(demethylmedicarpin，16)，并對部分含量較大的化合物采用生長速率法進行抑菌活性評價?；衔?～16均為首次從該植物中分離得到，其中化合物1、3、4、6～9、12、15、16為首次從紅豆屬中分離得到。抑菌活性測試顯示，化合物2、5和14對F.graminearum、F.oxysporumf、F.solani有較好的抑制作用。這將為紅豆樹后續(xù)的植物資源的開發(fā)與利用提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

ZF-5手提式紫外分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)；TQ-400Y高速多功能粉碎機(永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司)；BS-100A自動部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司)；BS-214D電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司)；LC-20AP制備型高效液相色譜儀(日本島津有限公司)；waters-2695-QDA高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國沃特世科技有限公司)；Buchi Rotavapor Essential旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀系列(瑞士步琦公司)；HX-1050恒溫循環(huán)器(北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司)；Bruker AV-400III型核磁共振儀(德國布魯克公司)。

1.2 材料

GF254薄層層析硅膠及柱色譜用硅膠(青島海洋化工有限公司)；D101大孔吸附樹脂、Sephadex LH-20凝膠(美國通用電氣公司)；YMC-Pack ODS-A反相色譜柱(250 mm×20 mm，5 μm)，日本YMC公司；Diamonsil C18分析型反相色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，北京迪馬科技有限公司；SilGreen ODS制備型色譜柱(250 mm×10 mm，5μm)，北京綠百草科技發(fā)展有限公司；常用有機試劑甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯等均為分析純(國藥集團化學試劑有限公司)；HPLC用色譜純甲醇、乙腈(默克公司)。

紅豆樹枝條采自福建省福州市晉安區(qū)北峰村，經(jīng)福建農(nóng)林大學林學院鄒小興副教授鑒定為紅豆樹Ormosiahosiei枝條。

2 提取與分離

取干燥紅豆樹枝條12.5 kg，經(jīng)粉碎機粉碎至粗粉，用125 L的70%乙醇加熱回流提取2次，每次3 h，濾過，合并提取液，減壓濃縮，得粗提取物浸膏1.2 kg。加入48 L水溶解浸膏，將水溶物過D101大孔吸附樹脂，以水-乙醇系統(tǒng)(100∶0、70∶30、40∶60、5∶95)梯度洗脫得到4個組分(A1-A4)；A-4(160 g)經(jīng)硅膠柱色譜，用二氯甲烷-乙醇系統(tǒng)(1∶0 ～ 0∶1)梯度洗脫，經(jīng)合并后得到17個組分(B1-B17)。B-5(4.4 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以[二氯甲烷-甲醇(1∶1)]洗脫分離，得到5個組分(C1-C5)；C-3(291.8 mg)經(jīng)硅膠柱色譜分離，用二氯甲烷-甲醇-水(5∶2∶0.2)等度洗脫，得到化合物6(45 mg)和7(16 mg)；C-4(3.5 g)經(jīng)制備HPLC(C18,28%乙腈,3.0 mL/min,檢測波長290 nm)純化得到化合物16(tR=29.241 min,6.4 mg)和15(tR=35.789 min,3.3 mg)；C-5(133 mg)經(jīng)制備HPLC(C18,55%甲醇,8.0 mL/min,檢測波長210 nm)純化得到化合物10(tR=24.917 min,49.9 mg)和14(tR=21.399 min,13.4 mg)。B-9(3.9 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇洗脫分離，得到12個組分(D1-D12)；D-3(450 mg)經(jīng)制備HPLC(C18,45%甲醇,8.0 mL/min,檢測波長210 nm)純化得到化合物8(tR=21.648 min,56 mg)和9(tR=23.957 min,33.8 mg)；D-5(120 mg)經(jīng)制備HPLC(C18,34%甲醇,8.0 mL/min,檢測波長210 nm)純化得到化合物5(tR=27.451 min,10.5 mg)；D-6(149.5 mg)經(jīng)制備HPLC(C18,53%甲醇,3.0 mL/min,檢測波長254 nm)純化得到化合物2(tR=22.928 min,15 mg)；D-10(62.5 mg)經(jīng)制備HPLC(C18,53%甲醇,8.0 mL/min,檢測波長210 nm)純化得到化合物1(tR=16.048 min,13 mg)。B-10(2.2 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇洗脫分離，得到10個組分(E1-E10)；E-4(85.9 mg)經(jīng)制備HPLC(C18,45%甲醇,8.0 mL/min,檢測波長210 nm)純化得到化合物4(tR=34.469 min,3.3 mg)和3(tR=46.983 min,12.8 mg)；E-6(102.7 mg)經(jīng)制備HPLC(C18,50%甲醇,3.0 mL/min,檢測波長254 nm)純化得到化合物11(tR=20.272 min,40.9 mg)；E-7(42.8 mg)經(jīng)制備HPLC (C18,46%甲醇,8.0 mL/min,檢測波長210 nm)純化得到化合物12(tR=21.520 min,7.6 mg)和13(tR=29.396 min,3.5 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末(甲醇)，分子式為C27H30O14，mp.216～218 ℃，ESI-MS:m/z577.3 [M-H]-，UV λmax(MeOH-H2O):259.2,327.0 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:12.88 (1H,s,5-OH),9.63 (1H,s,4′-OH),8.40 (1H,s,H-2),7.40 (2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,6′),6.83 (2H,d,J=8.4 Hz,H-3′,5′),6.73 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.44 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.02 (1H,d,J=7.2 Hz,H-1′′),4.52 (1H,br s,H-1′′′),1.10 (3H,d,J=6.0 Hz,H-6′′′)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:180.5 (C-4),162.8 (C-4′),161.5 (C-7),157.5 (C-5),157.3 (C-9),154.8 (C-2),130.2 (C-2′,6′),122.5 (C-1′),121.1 (C-3),115.1 (C-3′,5′),106.2 (C-10),100.7 (C-1′′),100.0 (C-1′′′),99.7 (C-6),94.6 (C-8),76.5 (C-3′′),75.6 (C-5′′),73.1 (C-2′′),72.2 (C-4′′′),70.7 (C-3′′′),70.3 (C-2′′′),70.0 (C-4′′),68.4 (C-5′′′),66.4 (C-6′′),17.9 (C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道一致，故鑒定化合物1為圓莢草雙糖苷。

化合物2白色粉末(甲醇)，分子式為C22H22O10，mp.212～214 ℃，ESI-MS:m/z447.2 [M+H]+，UV λmax(MeOH-H2O):259.2,325.8 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:12.92 (1H,s,5-OH),8.48 (1H,s,H-2),7.53 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),7.02 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),6.73 (1H,d,J=2.4 Hz,H-8),6.48 (1H,d,J=2.4 Hz,H-6),5.07 (1H,d,J=7.2 Hz,H-1′′),3.16～3.70 (6H,m,H-2′′,3′′,4′′,5′′,6′′),3.79 (3H,s,4′-OCH3)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:180.4 (C-4),163.1 (C-7),161.6 (C-5),159.2 (C-4′),157.2 (C-10),155.0 (C-2),130.2 (C-2′,6′),122.7 (C-1′),122.3 (C-3),113.8 (C-3′,5′),106.2 (C-9),99.8 (C-1′′),99.6 (C-6),77.2 (C-5′′),76.4 (C-3′′),73.1 (C-2′′),69.6 (C-4′′),60.6 (C-6′′)，55.2 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道一致，故鑒定化合物2為5,7-二羥基-4′-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3白色無定型粉末(甲醇)，分子式為C23H24O10，mp.216～218 ℃，ESI-MS:m/z461.1 [M+H]+，UV λmax(MeOH-H2O):253.3 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:8.49 (1H,s,H-2),7.80 (1H,d,J=8.8 Hz,H-5),7.53 (1H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),7.36 (1H,d,J=8.8 Hz,H-6),7.00 (1H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),5.10 (1H,d,J=7.2 Hz,H-1′′),3.94 (3H,s,8-OCH3),3.79 (3H,s,4′-OCH3),3.70～3.20 (6H,m,Glc-2′′,3′′,4′′,5′′,6′′H)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:174.8 (C-4),159.1 (C-4′),154.1 (C-7),153.7 (C-2),150.0 (C-9),136.8 (C-8),130.1 (C-2′,6′),124.0 (C-1′),123.1 (C-3),120.3 (C-5),119.3 (C-10),114.0 (C-6),113.7 (C-3′,5′),100.4 (C-1′′),77.3 (C-5′′),76.7 (C-3′′),73.3 (C-2′′),69.6 (C-4′′),61.3 (8-OCH3),60.6 (C-6′′),55.2 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道一致，故鑒定化合物3為4′,8-二甲氧基-7-O-β-D-葡萄糖基異黃酮。

化合物4白色粉末(甲醇)，分子式為C22H22O9，mp.216 ℃，ESI-MS:m/z431.2 [M+H]+，UV λmax(MeOH-H2O):249.7 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:8.45 (1H,s,H-2),8.05 (1H,d,J=8.8 Hz,H-5),7.53 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),7.25 (1H,d,J=2.4 Hz,H-8),7.15 (1H,dd,J=2.4,8.8 Hz,H-6),7.00 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),5.11 (1H,d,J=7.6 Hz,H-1′′),3.79 (3H,s,4′-OCH3)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:174.7 (C-4),161.5 (C-7),159.0 (C-4′),157.1 (C-9),153.7 (C-2),130.1 (C-2′,6′),127.0 (C-5),124.0 (C-1′),123.4 (C-3),118.5 (C-10),115.7 (C-6),113.6 (C-3′,5′),103.4 (C-8),100.0 (C-1′′),77.2 (C-5′′),76.5 (C-3′′),73.1 (C-2′′),69.6 (C-4′′),60.6 (C-6′′),55.2 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道一致，故鑒定化合物4為芒柄花苷。

化合物5白色固體(甲醇)，分子式為C22H22O10，ESI-MS:m/z445.1 [M-H]-，UV λmax(MeOH-H2O):255.7 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:8.16 (1H,s,H-2),7.31 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),6.78 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),6.73 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.59 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.08 (1H,d,J=7.2 Hz,H-1′′),3.83 (3H,s,5-OCH3),3.72 (1H,m,H-6′′a),3.45 (2H,m,H-5′′,6′′b),3.30 (1H,m,H-3′′),3.28 (1H,m,H-2′′),3.16 (1H,m,H-4′′)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:173.9 (C-4),161.4 (C-7),160.8 (C-5),158.8 (C-9),157.1 (C-4′),150.9 (C-2),130.2 (C-2′,6′),124.9 (C-3),122.6 (C-1′),114.8 (C-3′,5′),109.6 (C-10),99.9 (C-1′′),97.1 (C-6),95.6 (C-8),77.3 (C-5′′),76.6 (C-3′′),73.1 (C-2′′),69.8 (C-4′′),60.7 (C-6′′),56.1 (5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道一致，故鑒定化合物5為異櫻黃素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物6黃色粉末(甲醇)，分子式為C27H30O16，mp.177～178 ℃，ESI-MS:m/z609.2 [M-H]-，UV λmax(MeOH-H2O):255.7,354.6 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:12.59 (1H,s,5-OH),7.55 (1H,d,J=2.4 Hz,H-2′),7.53 (1H,dd,J=8.4,2.4 Hz,H-6′),6.83 (1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.38 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.18 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.34 (1H,d,J=7.2 Hz,H-1′′),4.38 (1H,br s,H-1′′′),0.98 (3H,d,J=6.4 Hz,H-6′′′)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:177.4 (C-4),164.3 (C-7),161.2 (C-5),156.6 (C-9),156.5 (C-2),148.5 (C-4′),144.8 (C-3′),133.3 (C-3),121.6 (C-1′),121.2 (C-6′),116.3 (C-5′),115.3 (C-2′),103.9 (C-10),101.2 (C-1′′),100.8 (C-1′′′),98.8 (C-6),93.7 (C-8),76.5 (C-3′′),75.9 (C-5′′),74.1 (C-2′′),71.9 (C-4′′′),70.6 (C-3′′′),70.4 (C-4′′),70.0 (C-2′′′),68.3 (C-5′′′),67.0 (C-6′′),17.8 (C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道一致，故鑒定化合物6為蘆丁。

化合物7黃色粉末(甲醇)，分子式為C27H30O15，mp.223～225 ℃，ESI-MS:m/z617.3 [M+Na]+，UV λmax(MeCN-H2O):265.1,347.4 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:12.56 (1H,s,5-OH),10.18 (1H,s,7-OH),7.98 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),6.87 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),6.41 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.20 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.31 (1H,d,J=7.2 Hz,H-1′′),4.37 (1H,br s,H-1′′′),0.98 (1H,d,J=6.4 Hz,H-6′′′)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:177.4 (C-4),164.3 (C-7),161.2 (C-5),159.9 (C-4′),156.9 (C-2),156.5 (C-9),133.2 (C-3),130.9 (C-2′,6′),120.9 (C-1′),115.1 (C-3′,5′),104.0 (C-10),101.4 (C-1′′),100.8 (C-1′′′),98.8 (C-6),93.8 (C-8),76.4 (C-3′′),75.8 (C-5′′),74.2 (C-2′′),71.8 (C-4′′′),70.6 (C-3′′′),70.4 (C-2′′′),69.9 (C-4′′),68.3 (C-5′′′),66.9 (C-6′′),17.8 (C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道一致，故鑒定化合物7為山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷。

化合物8白色無定型粉末(甲醇)，分子式為C27H30O13，ESI-MS:m/z563.3 [M+H]+，UV λmax(MeOH-H2O):249.7 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:8.40 (1H,s,H-2),8.07 (1H,d,J=8.8 Hz,H-5),7.53 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),7.28 (1H,d,J=2.4 Hz,H-8),7.19 (1H,dd,J=8.8,2.4 Hz,H-6),7.00 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),5.04 (1H,d,J=6.8 Hz,H-1′′),4.18 (1H,d,J=7.2 Hz,H-1′′′),3.79 (3H,s,4′-OCH3);13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:174.7 (C-4),161.4 (C-7),159.0 (C-4′),157.0 (C-9),153.7 (C-2),130.1 (C-2′,6′),127.1 (C-5),124.1 (C-3),123.4 (C-1′),118.5 (C-10),115.5 (C-6),113.7 (C-3′,5′),104.1 (C-1′′′),103.7 (C-8),100.1 (C-1′′),76.5 (C-5′′),76.4 (C-3′′′),75.8 (C-3′′),73.5 (C-2′′′),73.1 (C-2′′),69.7 (C-4′′),69.5 (C-4′′′),68.6 (C-6′′),65.7 (C-5′′′),55.2 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道一致，故鑒定化合物8為4′-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-木糖(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9白色無定型粉末(甲醇)，分子式為C27H30O13，ESI-MS:m/z563.1 [M+H]+，UV λmax(MeOH-H2O):249.7 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:8.39 (1H,s,H-2),8.07 (1H,d,J=8.8 Hz,H-5),7.53 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),7.25 (1H,d,J=2.4 Hz,H-8),7.16 (1H,dd,J=8.8,2.4 Hz,H-6),7.00 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),5.07 (1H,d,J=7.6 Hz,H-1′′),4.82 (1H,d,J=3.2 Hz,H-1′′′),3.79 (3H,s,4′-OCH3)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:174.7 (C-4),161.4 (C-7),159.0 (C-4′),157.1 (C-9),153.7 (C-2),130.1 (C-2′,6′),127.1 (C-5),124.1 (C-3),123.4 (C-1′),118.5 (C-10),115.5 (C-6),113.7 (C-3′,5′),109.4 (C-1′′′),103.7 (C-8),100.0 (C-1′′),78.7 (C-3′′′),76.5 (C-5′′),75.9 (C-2′′′),75.7 (C-3′′),73.3 (C-4′′′),73.1 (C-2′′),70.0 (C-4′′),67.8 (C-6′′),63.1 (C-5′′′),55.2 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道一致，故鑒定化合物9為4′-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-芹糖(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10淺黃色粉末(甲醇)，分子式為C15H10O5，mp.303～304 ℃，ESI-MS:m/z269.2 [M-H]-，UV λmax(MeOH-H2O):260.4 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:12.96 (1H,s,5-OH),10.88 (1H,s,7-OH),9.59 (1H,s,4′-OH),8.32 (1H,s,H-2),7.37 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),6.82 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),6.38 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.22 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:180.2 (C-4),164.3 (C-7),162.0 (C-5),157.6 (C-4′),157.4 (C-9),154.0 (C-2),130.2 (C-2′,6′),122.3 (C-1′),121.2 (C-3),115.1 (C-3′,5′),104.5 (C-10),99.0 (C-6),93.7 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道一致，故鑒定化合物10為染料木素。

化合物11白色粉末(甲醇)，分子式為C16H12O5，mp.287 ℃，ESI-MS:m/z285.1 [M+H]+，UV λmax(MeOH-H2O):255.7 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:10.74 (1H,s,7-OH),9.51 (1H,s,4′-OH),8.06 (1H,s,H-2),7.29 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),6.77 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),6.39 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.37 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),3.79 (3H,s,5-OCH3);13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:173.8 (C-4),162.4 (C-7),161.2 (C-5),159.1 (C-4′),157.0 (C-9),150.4 (C-2),130.2 (C-2′,6′),124.7 (C-3),122.8 (C-1′),114.8 (C-3′,5′),107.9 (C-10),96.5 (C-6),94.8 (C-8),55.9 (5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道一致，故鑒定化合物11為異櫻黃素。

化合物12淺黃色固體(甲醇)，分子式為C15H10O6，mp.271～273 ℃，ESI-MS:m/z285.1 [M-H]-，UV λmax(MeOH-H2O):258 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:12.97 (1H,s,5-OH),9.35 (2H,br s,2′,4′-OH),8.13 (1H,s,H-2),6.96 (1H,d,J=8.0 Hz,H-6′),6.35 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.34 (1H,d,J=2.4 Hz,H-3′),6.26 (1H,dd,J=8.4,2.4 Hz,H-5′),6.19 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:180.4 (C-4),164.5 (C-7),161.9 (C-5),158.6 (C-4′),157.7 (C-9),156.5 (C-2′),155.3 (C-2),132.2 (C-6′),120.5 (C-3),108.7 (C-1′),106.2 (C-5′),104.4 (C-10),102.6 (C-3′),99.0 (C-6),93.7 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道一致，故鑒定化合物12為2′,4′,5,7-四羥基異黃酮。

化合物13淺黃色粉末(甲醇)，分子式為C15H10O4，mp.170～172 ℃，ESI-MS:m/z253.4 [M-H]-，UV λmax(MeOH-H2O):248.6,302.0 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:10.80 (1H,s,7-OH),9.55 (1H,s,4′-OH),8.29 (1H,s,H-2),7.96(1H,d,J=8.8 Hz,H-5),7.38 (2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,6′),6.93 (1H,dd,J=2.0,8.8 Hz,H-6),6.86 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.80 (2H,d,J=8.4 Hz,H-3′,5′)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:174.7 (C-4),162.6 (C-7),157.4 (C-9),157.2 (C-4′),152.9 (C-2),130.1 (C-2′,6′),127.3 (C-5),123.5 (C-3),122.6 (C-1′),116.6 (C-10),115.2 (C-6),115.0 (C-3′,5′),102.1 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道一致，故鑒定化合物13為大豆素。

化合物14無色針狀結(jié)晶(甲醇)，分子式為C15H12O5，mp.247～249 ℃，ESI-MS:m/z271.1 [M-H]-，UV λmax(MeOH-H2O):212.0,291.3,324.7 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:12.15 (1H,s,5-OH),9.63 (1H,s,4′-OH),7.31 (2H,d,J=8.8 Hz,H-2′,6′),6.79 (2H,d,J=8.8 Hz,H-3′,5′),5.87 (2H,s,H-6,8),5.43 (1H,dd,J=12.8,3.2 Hz,H-2),3.26 (1H,dd,J=17.0,12.8 Hz,H-3a),2.67 (1H,dd,J=17.0,3.2 Hz,H-3b)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:196.3 (C-4),166.8 (C-7),163.5 (C-5),162.9 (C-9),157.7 (C-4′),128.9 (C-1′),128.4 (C-2′,6′),115.2 (C-3′,5′),101.7 (C-10),95.8 (C-6),95.0 (C-8),78.4 (C-2),42.0 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[16]報道一致，故鑒定化合物14為柚皮素。

化合物15黃色粉末(甲醇)，分子式為C15H12O5，mp.216～218 ℃，ESI-MS:m/z273.1 [M+H]+，UV λmax(MeOH-H2O):213.2,291.3 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:12.19 (1H,s,5-OH),9.43 (1H,s,4′-OH),7.07 (2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,6′),6.72 (2H,d,J=8.4 Hz,H-3′,5′),5.89 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),5.87 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),4.53 (2H,d,J=6.4 Hz,H-2),4.00 (1H,t,J=6.4 Hz,H-3)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:196.9 (C-4),166.9 (C-7),163.9 (C-5),162.9 (C-9),156.7 (C-4′),129.7 (C-2′,6′),125.7 (C-1′),115.3 (C-3′,5′),101.7 (C-10),96.0 (C-6),94.8 (C-8).70.8 (C-2),49.3 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[17]報道一致，故鑒定化合物15為二氫染料木素。

化合物16白色粉末(甲醇)，分子式為C15H12O4，ESI-MS:m/z257.2 [M+H]+，UV λmax(MeOH-H2O):285.3 nm;1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ:9.63 (1H,s,3-OH),9.36 (1H,s,9-OH),7.25 (1H,d,J=8.4 Hz,H-1),7.09 (1H,d,J=8.0 Hz,H-7),6.46 (1H,dd,J=8.4,2.4 Hz,H-2),6.28 (1H,dd,J=8.0,2.0 Hz,H-8),6.25 (1H,d,J=2.4 Hz,H-4),6.20 (1H,d,J=2.0 Hz,H-10),5.47 (1H,d,J=6.0 Hz,H-11a),4.20 (1H,m,H-6),3.52(2H,m,H-6a,6)；13C NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ:160.2 (C-10a),158.7 (C-3),158.5 (C-9),156.3 (C-4a),132.1 (C-1),125.1 (C-7),117.6 (C-6b),111.3 (C-11b),109.6 (C-2),107.3 (C-8),102.8 (C-4),97.5 (C-10),77.8 (C-11a),66.0 (C-6),38.8 (C-6a)。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道一致，故鑒定化合物16為去甲基化美迪紫檀素。

4 活性測定

采用菌絲生長速率法測定化合物1～5、10～16對F.graminearum、F.oxysporumf、F.solani3種植物病原真菌的抑制活性。將上述化合物用V甲醇∶V水(50∶50)溶解，藥液最終濃度150 mg/L?；钚詼y定及計算方法參照文獻[19，20]?；衔?、5和14對3種植物病原真菌顯示中等抑制活性，實驗數(shù)據(jù)見表1，未列出的化合物其抑制率均低于30%。

表1 部分化合物對3種植物病原真菌的抑制活性Table 1 Inhibitory activity of some compounds on three plant pathogenic fungi

5 結(jié)論

本次研究從紅豆樹莖枝中分離并鑒定了16個黃酮類化合物，其中，化合物1、3、4、6～9、12、15、16為首次從紅豆屬中分離得到，化合物1～16為首次從紅豆樹中分離得到。抑菌活性研究提示化合物2,5和14對禾谷鐮刀菌、西瓜尖鐮孢菌、茄病鐮刀菌的菌絲生長顯示出了中等強度的抑制作用。