赤瓟果實(shí)提取物對(duì)多巴胺致胃輕癱小鼠MTL、5-HT 的影響

辛 宇，辛 國

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130021）

赤瓟（Thladiantha dubia Bunge，TDB）為葫蘆科多年蔓生草本植物[1]，又名氣包、赤包、山屎瓜、赤雹、屎包子、山土豆、赤包子。主要分布于華北、東北、內(nèi)蒙等地區(qū)，以果實(shí)及塊根入藥。果實(shí)具有理氣、活血、祛痰、利濕的作用，多在跌打損傷、噯氣吐酸、黃疸、腸炎、痢疾、肺結(jié)核咯血等疾病中使用。塊根多用于治療乳汁不下，乳房脹痛等臨床常見病癥?！端牟酷t(yī)典》對(duì)此藥有明確記載。目前，此藥僅被蒙醫(yī)、藏醫(yī)在臨床治療中應(yīng)用。蒙醫(yī)習(xí)慣稱其果實(shí)為赤瓟子。赤瓟雖有明確歷史記載和良好的臨床療效，但文獻(xiàn)調(diào)研中鮮有研究報(bào)道，以藥物成份研究為多。有報(bào)道表明，赤雹根中含有效成份為赤雹苷 A、B、C、D、E、F[2]。其藥理作用研究主要集中于總皂苷成分，具有廣泛的鎮(zhèn)痛作用[3]，未見其他方面藥理藥效作用的研究，也是赤瓟未能在臨床中被廣泛使用的一個(gè)原因。本研究以多巴胺致胃輕癱小鼠為研究對(duì)象，擬通過觀察赤瓟果實(shí)提取物對(duì)胃動(dòng)素（MTL）、5-羥色胺（5-HT）表達(dá)的影響，進(jìn)一步探索赤瓟恢復(fù)胃動(dòng)力、理氣止嘔的作用機(jī)制[4]。

1 實(shí)驗(yàn)材料

Multiskan FC型酶標(biāo)儀，廠家：賽默飛世爾儀器有限公司。Mouse 5-HT ELISA Kit (LOT:E20160301A)，MMTL ELSA Kit(批號(hào):E20160301A)，安迪生物(上海)有限公司生產(chǎn)。赤瓟果實(shí)提取物(自制)水煎液，每毫升含1 g生藥，用時(shí)按需要配制不同濃度。嗎丁啉(多潘立酮片)，西安揚(yáng)森制藥有限公司，批號(hào)：150709325。鹽酸多巴胺注射液，上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：33150404；

2 實(shí)驗(yàn)方法

選取體質(zhì)量范圍在20～22 g的ICR小鼠，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為6組，每組10只，雌雄各半。分別為空白組、模型組、嗎丁啉（嗎丁啉6 mg/kg）組、赤瓟提取物大（3 g/kg）、中（1.5 g/kg）、小劑量組（0.75 g/kg）?？瞻捉M、模型組給予蒸餾水，嗎丁啉組給予0.3%濃度的嗎丁啉溶液，赤瓟組根據(jù)大、中、小劑量的不同分別給予1.5%、0.75%、0.375%濃度的赤瓟果實(shí)提取物溶液，各組按照每10 g體質(zhì)量0.2 mL的標(biāo)準(zhǔn)，連續(xù)灌胃給藥1周[5]。末次給藥結(jié)束后1 h，除空白組外，各組均給予多巴胺，藥物劑量為0.5 mg/kg，20 min后每組灌胃阿拉伯膠體活性碳粉混合物0.8 mL/只。20 min后拉椎處死動(dòng)物。剖開小鼠腹腔，對(duì)胃賁門和幽門進(jìn)行結(jié)扎，取出胃體，用濾紙拭干后進(jìn)行稱重；接下來沿胃大彎剪開胃體，將胃內(nèi)容物洗去，同樣用濾紙拭干后再次稱重，胃內(nèi)殘留物重即為2次前后稱重得差值，胃內(nèi)殘留率即為胃內(nèi)殘留物占所給半固體糊的重量百分比。同時(shí)從幽門切跡至回盲部將整個(gè)小腸段完全取出，不加牽引鋪直于白紙上，為計(jì)算小腸推進(jìn)比，需測量幽門切跡至碳糊最前端的距離以及幽門切跡至回盲部的距離。

按下列公式分別計(jì)算胃內(nèi)容物殘留率和小腸推進(jìn)百分比：胃內(nèi)容物殘留率（%）= [（胃全重-胃凈重）/ 碳糊重]×100；小腸推進(jìn)比（%）=（碳糊移動(dòng)距離/幽盲全長）×100

取小鼠胃竇及上段空腸，做組織勻漿，取上清，取血液離心后，取上清，按酶聯(lián)免疫法測定其胃竇、空腸及血液中胃動(dòng)素（MTL）、5-羥色胺（5-HT）水平的變化[6]。使用Excel統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異比較。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，模型組、對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01），說明多巴胺可造成小鼠腸胃蠕動(dòng)減慢；小鼠MTL、5-HT水平明顯降低，說明藥物型胃輕癱模型復(fù)制成功。

在影響小鼠小腸推進(jìn)比方面，嗎丁啉和大劑量赤爮果實(shí)提取物具有明顯的促進(jìn)作用（P ＜0.05），通過促進(jìn)腸胃蠕動(dòng)，提高小腸推進(jìn)比，進(jìn)而降低了胃內(nèi)容物的殘留率；中、小劑量組有一定作用趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 赤瓟提取物對(duì)多巴胺所致胃輕癱小鼠胃排空的影響（ ，n = 10） %

表1 赤瓟提取物對(duì)多巴胺所致胃輕癱小鼠胃排空的影響（ ，n = 10） %

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.01；與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

組 別 小腸推進(jìn)比 胃內(nèi)容物殘留率對(duì)照組 91.44±6.29 23.78±8.84模型組 59.35±7.78# 37.25±11.78陽性對(duì)照組 84.58±12.42△△ 24.93±10.13△大劑量 71.78±10.14△ 26.09±9.88△中劑量 69.01±9.75 29.08±13.917小劑量 63.97±11.00 31.90±10.159

在MTL、5-HT的表達(dá)方面，嗎丁啉和大、中劑量赤爮果實(shí)提取物均具有較為明顯的升高作用，無論是胃竇、空腸還是血液中的MTL、5-HT，都顯示了明顯的升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；低劑量組有一定改善趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。見表2～4。

4 討論

胃輕癱（gastroparesis）是指胃泵功能衰竭，以胃排空明顯延緩導(dǎo)致胃潴留而無上消化道器質(zhì)性損害為特征，從而引起一系列胃腸道病理生理改變。以往將本病稱為胃麻痹、胃無力、胃潴留等。癥狀上可無明顯臨床表現(xiàn)，也可出現(xiàn)早飽、餐后腹脹、反復(fù)呃逆、慢性惡心、發(fā)作性嘔吐等癥狀。與胃排空延緩相關(guān)的組 別 MTL 5-HT

表2 赤瓟提取物對(duì)多巴胺致胃輕癱小鼠胃竇MTL、5-HT的影響（ ，n = 10）

表2 赤瓟提取物對(duì)多巴胺致胃輕癱小鼠胃竇MTL、5-HT的影響（ ，n = 10）

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.01；與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01，△△△P ＜0.001

組 別 MTL 5-HT對(duì)照組 1884.08±39.04 1252.50±108.49模型組 151.46±47.72# 702.08±37.39陽性對(duì)照組 265.13±20.96△△ 1015.63±84.39△△△大劑量 198.16±32.97△△ 940.63±205.52△△△中劑量 202.11±17.24△△ 855.63±126.23△△小劑量 193.95±13.39△ 701.86±26.44

表3 赤瓟提取物對(duì)多巴胺致胃輕癱小鼠空腸中MTL、5-HT的影響（ ，n = 10）

表3 赤瓟提取物對(duì)多巴胺致胃輕癱小鼠空腸中MTL、5-HT的影響（ ，n = 10）

注：與對(duì)照組比較:# P ＜0.01；與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01，△△△P ＜0.001

組 別 MTL 5-HT對(duì)照組 264.73±18.17 1205.21±23.73模型組 179.34±65.50# 588.96±12.16陽性對(duì)照組 1554.47±106.09△△△ 1169.17±18.08△△△大劑量 452.63±53.52△△△ 861.67±166.01△△中劑量 249.21±50.27△△ 813.96±248.25△△△小劑量 202.76±53.92 578.54±24.20

表4 赤瓟提取物對(duì)多巴胺致胃輕癱小鼠血液中MTL、5-HT的影響（ ，n = 10）

表4 赤瓟提取物對(duì)多巴胺致胃輕癱小鼠血液中MTL、5-HT的影響（ ，n = 10）

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.01；與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01，△△△P ＜0.001

對(duì)照組 457.76±83.86 627.50±84.84模型組 194.74±67.22# 165.83±17.93陽性對(duì)照組 356.18±46.23△△ 578.96±143.39△△△高劑量 273.68±48.30△△ 557.92±154.87△△中劑量 270.39±69.89△ 315.01±210.48△低劑量 206.32±53.53 190.21±88.28

胃動(dòng)力異?；蛭浮拈T—十二指腸動(dòng)力異常將導(dǎo)致胃輕癱癥狀的出現(xiàn)，但其發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中觀察的MTL的主要作用是影響胃腸運(yùn)動(dòng)。MTL為消化道激素之一，分布全在小腸[7]，是激發(fā)消化期間肌電活動(dòng)的主要激素，可以促進(jìn)胃強(qiáng)力收縮和小腸分解運(yùn)動(dòng)。5-HT，又名血清素，是一種自體活性物質(zhì)，大多合成和分布于腸嗜鉻細(xì)胞，可通過其受體引起胃腸道平滑肌收縮，使胃腸道張力增加，腸蠕動(dòng)加快。本研究表明，赤瓟提取物對(duì)多巴胺致胃輕癱小鼠MTL、5-HT因子有顯著的升高作用。通過對(duì)多巴胺致胃輕癱模型小鼠小腸推進(jìn)比和胃內(nèi)容物殘留率的觀察來評(píng)價(jià)胃排空的效果，對(duì)MTL、5-HT的研究，反映赤爮果實(shí)提取物不同劑量對(duì)腸胃蠕動(dòng)具有一定的促進(jìn)作用。

《中國長白山藥用植物彩色圖志》收錄有赤瓟。赤瓟作為藏、蒙民族民間長期沿用的藥材，具有深厚的民間用藥基礎(chǔ)。但在我省未能得到廣泛的應(yīng)用。目前，赤瓟?shù)难芯恐饕猿煞址蛛x為主，在抗菌作用方面，有效成分為揮發(fā)油及多糖類成分[8-10]。赤雹在臨床應(yīng)用時(shí)，不同的藥用部位及水提物、醇提物等提純方法的不同，臨床效果也有一定的差異性[11]。赤瓟雖有良好的臨床療效，但文獻(xiàn)調(diào)研中鮮見其藥理研究的報(bào)道，至于其更深入的提高胃腸動(dòng)力的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

5 結(jié)論

多巴胺能夠使小鼠腸蠕動(dòng)減慢，降低胃竇、空腸和血液中MTL、5-HT水平，說明藥物型胃輕癱模型復(fù)制成功；嗎丁啉和大、中劑量赤爮果實(shí)提取物均具有較為明顯的升高M(jìn)TL、5-HT作用。赤爮果實(shí)提取物通過升高胃竇、空腸和血液中MTL、5-HT表達(dá)水平，促進(jìn)小鼠胃的排空，增加腸胃蠕動(dòng)，從而達(dá)到理氣止嘔的作用。