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    甘草酸二鉀護(hù)理液皮膚修復(fù)作用的研究

    2018-12-28 05:36:48施米麗金家瑞郭美仙田佳麗劉曉波
    關(guān)鍵詞:護(hù)理液衛(wèi)生巾甘草酸

    施米麗,金家瑞,郭美仙,田佳麗,劉曉波

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    甘草酸二鉀護(hù)理液皮膚修復(fù)作用的研究

    施米麗,金家瑞,郭美仙,田佳麗,*劉曉波

    (大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南,大理 671000)

    研究甘草酸二鉀護(hù)理液及含甘草酸二鉀衛(wèi)生巾對擦傷皮膚的修復(fù)作用。用SD大鼠,制造皮膚擦傷模型,將動物隨機(jī)分為陽性對照組、陰性對照組、甘草酸二鉀護(hù)理液高、中、低劑量組、甘草酸二鉀衛(wèi)生巾組,一定時間后,檢測創(chuàng)面愈合率,通過HE染色觀察損傷皮膚組織病理學(xué)變化。造模后第7 d和第14 d護(hù)理液高、中劑量組和衛(wèi)生巾組大鼠的皮膚愈合率和組織學(xué)評分與陰性組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(< 0.05)。甘草酸二鉀護(hù)理液及含甘草酸二鉀衛(wèi)生巾具有促進(jìn)皮膚修復(fù)的作用。

    皮膚修復(fù);護(hù)理液;HE染色

    女性月經(jīng)期由于子宮內(nèi)膜脫落而產(chǎn)生創(chuàng)面,生殖道處于損傷狀態(tài),抵抗力較差,由于行走摩擦等導(dǎo)致外陰道擦傷,如果衛(wèi)生巾選擇不當(dāng),很容易造成病菌感染而引起婦科炎癥[1]。因此設(shè)計符合人體功能,并具有抗菌功能、無耐藥性、無毒副作用的衛(wèi)生巾,尤其是開發(fā)具有外陰道修復(fù)功能的衛(wèi)生巾產(chǎn)品是非常有必要的。

    豆科植物甘草是最常用的中草藥之一,它是一種常用的中藥藥材,其主要活性成分是甘草酸和甘草次酸等。其中甘草酸具有一定的水溶性,其水溶液具有較好的光熱穩(wěn)定性,能修復(fù)皮膚炎癥,因此被添加到一些修復(fù)護(hù)膚產(chǎn)品中[2]。研究發(fā)現(xiàn)低濃度的甘草酸能保護(hù)人皮膚成纖維細(xì)胞損傷。研究證明甘草酸還具有抗氧化、清除自由基的功效[3]。甘草酸已被廣泛應(yīng)用于防曬、美白、養(yǎng)護(hù)型等護(hù)膚產(chǎn)品中。目前,臨床研究表明,甘草酸苷注射液具有治療皮膚修復(fù)的作用,但有關(guān)甘草酸二鉀治療皮膚修復(fù)作用的報道并不多。甘草酸二鉀為白色粉末,有高甜度、水溶性好、低熱能,起泡性、溶血作用較低,安全無毒等特點(diǎn)。同時,甘草酸二鉀具有消炎、抗?jié)?、抗氧化、抑菌、治療?chuàng)傷、有效清超氧離子和羥基自由基的作用[4]。

    根據(jù)甘草酸苷注射液皮膚修復(fù)的特性,甘草酸二鉀在皮膚修復(fù)方面有較大的潛在應(yīng)用價值[5]。本研究制造皮膚損傷模型,通過檢測創(chuàng)面愈合率,HE染色觀察損傷皮膚組織病理學(xué)變化,評價含有甘草酸二鉀護(hù)理液及其含甘草酸二鉀衛(wèi)生巾對皮膚修復(fù)作用,為其在具有修復(fù)作用的衛(wèi)生巾方面的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    1 材料

    1.1 實(shí)驗(yàn)動物

    SD 大鼠(200~250 g,150只雌雄各半),由昆明楚商科技有限公司提供。

    1.2 主要儀器

    CHK2-F-GS顯微鏡(日本 OLYMPUS公司);BX41圖像采集系統(tǒng)(日本OLYMPUS公司);HK610脫毛器(利潔時家化(中國)有限公司);HH-1508RIII石蠟切片機(jī)(杭州艾普儀器設(shè)備有限公司)。

    1.3 藥品和試劑

    重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子凝膠(珠海億勝制藥有限公司,批號:S20040001);甘草酸二鉀護(hù)理液、含甘草酸二鉀護(hù)理液衛(wèi)生巾(云南白藥清逸堂實(shí)業(yè)有限公司,批號:2015100801);生理鹽水(貴州天地藥業(yè)有限責(zé)任公司,批號:A15031602);蘇木精(美國Sigma公司,批號:041M0014V);伊紅(美國Sigma公司,批號:MKBS2614V);磷酸氫二鉀(成都化學(xué)試劑產(chǎn),批號:950608);磷酸氫二鈉(北京化工廠,批號:850619);水合氯醛(青島宇龍海藻有限公司,批號:20150412);甲醛溶液(天津市福晨化學(xué)試劑廠,批號:20131007)。

    2 方法

    2.1 造模

    用10 %的水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔注射麻醉,待大鼠麻醉后,用脫毛機(jī)背部脫毛4 cm×4 cm,常規(guī)消毒。在大鼠脫毛區(qū)造成皮膚損傷,各組大鼠均在背部相同位置處制造皮膚損傷模型,術(shù)后2 h正常飲食。

    2.2 分組

    動物隨機(jī)分成6組,陰性對照組(NS組);陽性對照組(表皮生長因子EGF);護(hù)理液高、中、低劑量組;護(hù)理液衛(wèi)生巾組,每組25只,雌性各半。

    2.3 給藥

    分組后給大鼠涂藥,陽性對照組(給予表皮生長因子,涂抹均勻?yàn)橹梗?;陰性對照組(給予0.9 mL的生理鹽水);護(hù)理液衛(wèi)生巾組(包扎4 cm×4 cm衛(wèi)生巾);護(hù)理液高劑量組(給予100%護(hù)理液1.8 mL);護(hù)理液中劑量組(給予100%護(hù)理液0.9 mL);護(hù)理液低劑量組(給予50%護(hù)理液0.9 mL)。給完藥之后用紗布包扎,5 h以后取下紗布,每天換一次藥。分別于1、5、7、14、35 d進(jìn)行指標(biāo)觀察取材。

    2.4 取材

    于造模后的1、5、7、14、35 d各組均處死5只大鼠,剪取4 cm×4 cm皮膚,投入到預(yù)先備好的10%福爾馬林中固定,供組織石蠟切片用。

    3 指標(biāo)檢測

    3.1 創(chuàng)面愈合率

    于造模后的(1、5、7、14、35 d)測量各組大鼠缺損處創(chuàng)面面積。根據(jù)公式計算:創(chuàng)面愈合率(%) = (最初創(chuàng)面面積-未愈創(chuàng)面面積) /最初創(chuàng)面面積 ×100%。

    3.2 組織病理學(xué)觀察

    常規(guī) HE 染色切片在放大 200 倍光鏡下通過觀察:表皮再生、成纖維細(xì)胞、新生毛細(xì)血管、粒細(xì)胞浸潤數(shù)量。

    3.3 組織病理學(xué)評分

    標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋切片,切片厚度4 μm,行常規(guī)蘇木精-伊紅染色,光鏡下觀察HE 染色切片組織病理學(xué)變化(HP × 200),并參照 Eldad 等[6-7]所采用的方法,制定皮膚創(chuàng)面愈合的組織病理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果見表1。

    表1 組織病理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)

    3.4 統(tǒng)計學(xué)方法

    4 結(jié)果

    4.1 創(chuàng)面愈合率

    由表2可知,造模給藥后第1 d,大鼠陽性對照組的創(chuàng)面愈合率與陰性對照組相比較,具有明顯提高(<0.05),其他各組較陰性對照組提高不明顯(>0.05)。造模后第5 d,陽性對照組的創(chuàng)面愈合率與陰性對照組比較顯著提高(<0.01),其他各組的愈合率比陰性對照組高但提高不明顯(>0.05)。造模后第7 d,陽性對照組的創(chuàng)面愈合率與陰性對照組比較顯著提高(<0.01),衛(wèi)生巾組和護(hù)理液高劑量組的創(chuàng)面愈合率與陰性對照組比較明顯增加(<0.05),護(hù)理液中、低劑量組的創(chuàng)面愈合率比陰性對照組低。造模后第14 d,陽性對照組、衛(wèi)生巾組、護(hù)理液高劑量組與陰性對照組的創(chuàng)面愈合率比較顯著增加(<0.01),護(hù)理液低劑量組與陰性對照組的創(chuàng)面愈合率比較明顯增加(<0.05),護(hù)理液中劑量組愈合率比陰性對照組高但增高不明顯(>0.05)。造模后第35 d,陽性對照組愈合率達(dá)到100%,各組創(chuàng)面愈合率差不多,沒有明顯差異。以上結(jié)果顯示,護(hù)理液高劑量組和衛(wèi)生巾組在給藥第7 d和第14 d后,具有很好的修復(fù)效果。

    表2 造模后1、5、7、14、35 d各組創(chuàng)面愈合率( ± s,n = 5)

    注:與陰性對照進(jìn)行比較,*<0.05**<0.01。

    4.2 組織病理學(xué)觀察

    由表3和圖1可知,大鼠造模后第1 d,表皮幾乎沒有修復(fù),無肉芽組織增生,各組病理學(xué)評分沒有差異性(>0.05);造模后第5 d,各組表皮薄,少量修復(fù),成纖維細(xì)胞很少,有少許的新生毛細(xì)血管,有少許的中性粒細(xì)胞侵潤,各組病理學(xué)評分沒有差異性(>0.05);造模后第7 d,各組表皮部分修復(fù),有較多的肉芽組織增生,有新生毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞,有中性粒細(xì)胞侵潤。陽性對照組,護(hù)理液高劑量組和中劑量組的組織病理學(xué)評分與陰性對照組比較明顯的增高且有顯著性差異(<0.05<0.01)。造模后第14 d,各組表皮大部分修復(fù),有許多的新生毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞,中性粒細(xì)胞侵潤較少。陽性對照組,護(hù)理液高劑量組的組織病理學(xué)評分與陰性對照組比較明顯的增高且有顯著性差異(<0.05)。造模后第35 d,各組表皮已經(jīng)全部修復(fù),只有少許的肉芽組織,各組病理學(xué)評分沒有差異性(>0.05)。結(jié)果提示:造模1 d后,看不到皮膚修復(fù)征兆,藥物沒有效果。第5 d后,陽性藥、護(hù)理液衛(wèi)生巾、護(hù)理液中劑量組和低劑量都有修復(fù)效果,但修復(fù)效果一般。第7 d后,各組皮膚修復(fù)得較好,陽性藥、護(hù)理液高劑量和低劑量都有修復(fù)效果,且修復(fù)效果很好。第14 d后,各組皮膚修復(fù)得較好,陽性藥、護(hù)理液高劑量都有很好的修復(fù)效果。第35 d后,各組皮膚基本已經(jīng)全部修復(fù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,護(hù)理液高劑量組和衛(wèi)生巾組在給藥7 d和14 d后,有很好的修復(fù)效果。護(hù)理液低劑量組在給藥7 d,有很好的修復(fù)效果。

    表3 造模后1、5、7、14、35 d各組組織學(xué)評分 (±s,n=5)

    注:與陰性對照進(jìn)行比較,*<0.05**<0.01

    注:①—⑥為造模后第1 d的陰性對照組、陽性對照組、衛(wèi)生巾組、護(hù)理液高劑量組、護(hù)理液中劑量組、護(hù)理液低劑量組;⑦—?為造模后第5 d的陰性對照組、陽性對照組、衛(wèi)生巾組、護(hù)理液高劑量組、護(hù)理液中劑量組、護(hù)理液低劑量組;?—?為造模后第7 d的陰性對照組、陽性對照組、衛(wèi)生巾組、護(hù)理液高劑量組、護(hù)理液中劑量組、護(hù)理液低劑量組;?—為造模后第14 d的陰性對照組、陽性對照組、衛(wèi)生巾組、護(hù)理液高劑量組、護(hù)理液中劑量組、護(hù)理液低劑量組;—為造模后第35 d的陰性對照組、陽性對照組、衛(wèi)生巾組、護(hù)理液高劑量組、護(hù)理液中劑量組、護(hù)理液低劑量組。

    5 討論

    皮膚修復(fù)是一個復(fù)雜的過程,主要是細(xì)胞的增殖與分化過程,包括各種組織的再生、肉芽組織增生和瘢痕形成等復(fù)雜的組合,表現(xiàn)出各種修復(fù)過程的協(xié)同作用[8-9],其愈合的速度、質(zhì)量與多種因素有關(guān)[10-11]。皮膚修復(fù)通常包括表皮細(xì)胞的再生、成纖維細(xì)胞增殖、新生血管的形成、粒細(xì)胞浸潤等綜合作用的結(jié)果[12-13]。

    生物從受傷開始,即發(fā)生一系列的血管和細(xì)胞的變化,中性粒細(xì)胞是主要的炎性細(xì)胞,在創(chuàng)面愈合中最早出現(xiàn),是機(jī)體防御作用的主要成分之一,它具有強(qiáng)大的吞噬能力,能吞噬細(xì)菌及細(xì)小的異物顆粒。中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞可相互活化,中性粒細(xì)胞顆粒分子能夠增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用和抗菌能力,巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子和趨化因子可活化中性粒細(xì)胞使其獲得炎癥表型[14]。所以通過皮膚組織病理學(xué)觀察粒細(xì)胞數(shù)量可以初步評價皮膚的愈合程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,各組病理組織隨著時間的推移,粒細(xì)胞數(shù)量逐漸降低,這說明皮膚一直處于修復(fù)的過程,其中陽性對照組和護(hù)理液高、中劑量組的粒細(xì)胞數(shù)量降低得比較快。

    毛細(xì)血管的變化是組織創(chuàng)傷修復(fù)中重要評價指標(biāo)之一。組織在損傷后,毛細(xì)血管開始形成,內(nèi)皮細(xì)胞通過分裂增生、向無血管或者少血管區(qū)遷移,逐漸形成毛細(xì)血管芽,新形成的血管均為毛細(xì)血管。隨著愈合時間的推移,傷口逐漸成熟,毛細(xì)血管的密度下降。創(chuàng)傷發(fā)生后,缺損的創(chuàng)面需要消耗大量的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì),必須由新生的毛細(xì)血管來供應(yīng)。因此在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程中,血管新生的作用是必不可少的[15],所以通過皮膚組織病理學(xué)觀察新生毛細(xì)血管,可以初步評價皮膚的愈合程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,各組病理切片組織隨著時間的推移,毛細(xì)血管數(shù)量逐漸增加,這說明皮膚一直處于修復(fù)的過程,其中陽性對照組和護(hù)理液高、中劑量組的毛細(xì)血管數(shù)量增加得比較快。

    在血管新生的同時,臨近的成纖維細(xì)胞增生并移行至創(chuàng)面,新生的肉芽組織將創(chuàng)緣連接起來,同時創(chuàng)緣表皮細(xì)胞增生,逐漸覆蓋傷口。成纖維細(xì)胞是創(chuàng)傷愈合過程中主要的修復(fù)細(xì)胞,是肉芽組織的主要成分之一,且可通過自分泌和旁分泌機(jī)制產(chǎn)生多種細(xì)胞因子,作用于自身和其它細(xì)胞,調(diào)控修復(fù)過程,所以通過皮膚組織病理學(xué)觀察成纖維細(xì)胞可以初步評價皮膚的愈合程度[16]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,各組病理切片組織隨著時間的推移,成纖維細(xì)胞數(shù)量逐漸增加,這說明皮膚一直處于修復(fù)的過程,其中陽性對照組和護(hù)理液高劑量組的成纖維細(xì)胞數(shù)量增加得比較快。

    綜上所述,可以認(rèn)為甘草酸二鉀的促愈作用主要是通過減少粒細(xì)胞的數(shù)量來減輕創(chuàng)面炎癥反應(yīng)、促進(jìn)肉芽組織形成、成纖維細(xì)胞的快速增殖、使上皮爬行速度增快、新生的毛細(xì)血管增多,從而加速組織創(chuàng)面愈合的過程。

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    SKIN REPAIRING EFFECT OF NURSING LIQUID OF DIPOTASSIUM GLYCYRRHIZATE

    SHI Mi-li, JIN Jia-rui, GUO Mei-xian, TIAN Jia-li,*LIU Xiao-bo

    (College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China)

    Tostudy the repairing effect of dipotassium glycyrrhizinate care liquid and dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin on damaged skin.The model of skin injury was made of SD rats. The animals were randomly divided into positive control group, negative control group, high, medium and low dose group of dipotassium glycyrrhizinate care liquid, dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin group. After a certain time, the wound healing rate was detected, and the histopathological changes of damaged skin were observed by HE staining.The skin healing rate and histological score of the high, middle dose group and sanitary napkin group were statistically significant higher than those of the negative group (< 0.05) after the model 7 and 14 days.The dipotassium glycyrrhizinate care liquid and dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin can promote skin repair.

    skin repairing; nursing liquid; HE staining

    1674-8085(2018)05-0081-06

    R965.1

    A

    10.3969/j.issn.1674-8085.2018.05.016

    2018-07-06;

    2018-08-26

    施米麗(1993-),女,云南曲靖人,碩士生,主要從事中藥藥理研究(E-mail:1437759468@qq.com);

    金家瑞(1991-),女,云南曲靖人,碩士生,主要從事中藥藥理研究(E-mail:562640385@qq.com);

    郭美仙(1980-),女,云南臨滄人,講師,碩士,主要從事中藥藥理學(xué)研究(E-mail:Yndllyo@126.com);

    田佳麗(1993-),女,云南保山人,碩士生,主要從事中藥藥理研究(E-mail:471062815@qq.com);

    *劉曉波(1972-),男,貴州思南人,副教授,碩士生導(dǎo)師,碩士,主要從事中藥藥理學(xué)研究(E-mail:yndlxb@126.com).

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