形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)以及免疫組化在檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤患者中的應(yīng)用效果

多發(fā)性骨髓瘤是一種臨床上常見(jiàn)的B淋巴細(xì)胞起源的漿細(xì)胞克隆性血液系統(tǒng)惡性腫瘤，以骨髓中惡性漿細(xì)胞發(fā)生異常聚集及增生為主要特征，好發(fā)于中老年人，目前主要的治療方法為造血干細(xì)胞移植以及化療[1-2]。由于在多發(fā)性骨髓瘤早期的臨床表現(xiàn)無(wú)特異性，極易發(fā)生漏診以及誤診。臨床診斷多發(fā)性骨髓瘤主要根據(jù)骨髓的形態(tài)學(xué)改變情況，有無(wú)出現(xiàn)溶骨性骨質(zhì)破壞，血清有無(wú)表達(dá)單克隆免疫球蛋白。但部分分化情況良好的漿細(xì)胞與正常的細(xì)胞形態(tài)學(xué)難以區(qū)分，診斷較為困難[3]。本研究通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)以及免疫組化對(duì)傳統(tǒng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷的60例多發(fā)性骨髓瘤患者進(jìn)行細(xì)胞免疫表型分析，并比較3種檢測(cè)技術(shù)之間的差異，以期為多發(fā)性骨髓瘤的早期診斷和臨床治療效果的判斷提供更為有效且可靠的檢測(cè)方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1月至2017年12月在我院進(jìn)行診治的多發(fā)性骨髓瘤患者60例，均符合相關(guān)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，其中，男性39例，女性21例；年齡42～85歲，平均(61.85±6.73) 歲；臨床分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期34例，Ⅲ期4例；IgA型15例，IgG型36例，不分泌型5例，輕鏈型4例。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

本研究中的所有患者均按照常規(guī)方法進(jìn)行骨髓穿刺，抽取2 mL骨髓液放在肝素抗凝管中進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，并且抽取0.2 mL骨髓液涂片進(jìn)行免疫組化檢測(cè)以及形態(tài)學(xué)檢查。形態(tài)學(xué)檢查的方法如下：選擇涂片情況良好(染色清晰、制作良好、可以充分鑒定細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞核的形態(tài)特征)的骨髓涂片進(jìn)行瑞氏-吉姆薩染色，采用顯微鏡分類計(jì)數(shù)200個(gè)有核細(xì)胞，多發(fā)性骨髓瘤的判斷標(biāo)準(zhǔn)[4]為漿細(xì)胞≥20%且出現(xiàn)形態(tài)異常。

流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的方法如下：采用美國(guó) BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀，獲取20 000個(gè)細(xì)胞，標(biāo)記細(xì)胞表面抗原以及細(xì)胞內(nèi)抗原，對(duì)數(shù)取樣，通過(guò) CD45/CD138設(shè)門對(duì)待檢細(xì)胞群進(jìn)行設(shè)定，陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：目的細(xì)胞群的抗原表達(dá)>10%。

免疫組化檢測(cè)的方法如下：使用直接標(biāo)記法對(duì)骨髓細(xì)胞進(jìn)行染色，組化染色的試劑均購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：在低倍鏡下選擇薄厚適中、涂片均勻、抗原表達(dá)較為顯著的位置，在高倍鏡下細(xì)胞膜、細(xì)胞核或者細(xì)胞質(zhì)表現(xiàn)為棕黃色均勻細(xì)顆粒表示陽(yáng)性表達(dá)，Kappa陽(yáng)性位于胞漿，lambda陽(yáng)性以及CD138陽(yáng)性位于胞漿或胞膜，顯色較為淺淡或不顯色表示陰性表達(dá)。在顯微鏡鏡下計(jì)數(shù)有核細(xì)胞200個(gè)，各抗體陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比大于10%表示陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察形態(tài)學(xué)檢查、流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)以及免疫組化檢測(cè)的結(jié)果；觀察流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)以及免疫組化檢測(cè)在多發(fā)性骨髓瘤異常漿細(xì)胞抗原表達(dá)形式(Kappa、CD138、lambda、CD19、CD38、CD45)，比較二者的陽(yáng)性診斷符合率；比較形態(tài)學(xué)檢查、流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)以及免疫組化檢測(cè)到的異常細(xì)胞群所占比例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果

本研究中的60例多發(fā)性骨髓瘤患者均出現(xiàn)不同程度的免疫球蛋白增加和正色素性貧血，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)結(jié)果主要表現(xiàn)為異常漿細(xì)胞增生，且出現(xiàn)質(zhì)的改變。

2.2 流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果

本研究中的60例多發(fā)性骨髓瘤患者中，CD45表達(dá)異常(55例陰性、5例部分陽(yáng)性)；CD19的陰性表達(dá)率為100.00%；CD38以及CD138的陽(yáng)性表達(dá)率均為100.00%，見(jiàn)表1。

2.3 免疫組化檢測(cè)結(jié)果

本研究中的60例多發(fā)性骨髓瘤患者中，Kappa陽(yáng)性43例，CD138陽(yáng)性表達(dá)率為100.00%，lambda陽(yáng)性16例，見(jiàn)表1。

表1 流式細(xì)胞學(xué)以及免疫組化檢測(cè)在多發(fā)性骨髓瘤異常漿細(xì)胞抗原表達(dá)形式(例，%)

2.4 流式細(xì)胞學(xué)以及免疫組化檢測(cè)的陽(yáng)性診斷符合率對(duì)比

流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性者55例，陽(yáng)性診斷符合率為91.67%；免疫組化檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性者57例，陽(yáng)性診斷符合率為95.00%；流式細(xì)胞學(xué)以及免疫組化檢測(cè)的陽(yáng)性診斷符合率相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.5 3種檢查方法檢測(cè)到的異常細(xì)胞群所占比例對(duì)比

形態(tài)學(xué)檢查骨髓瘤細(xì)胞所占的中位數(shù)比例為59.00%(5.00%～96.00%)，流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)骨髓瘤細(xì)胞所占的中位數(shù)比例為36.12%(4.00%～85.00%)，免疫組化檢測(cè)骨髓瘤細(xì)胞所占的中位數(shù)比例為34.59%(8.00%～86.00%)。形態(tài)學(xué)檢查骨髓瘤細(xì)胞所占比例明顯高于流式細(xì)胞學(xué)以及免疫組化檢測(cè)(P<0.05)，流式細(xì)胞學(xué)以及免疫組化檢測(cè)相比無(wú)明顯差異(P>0.05)。

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤患者的臨床特征為骨髓內(nèi)漿細(xì)胞發(fā)生惡性增生，分泌單克隆輕鏈或免疫球蛋白，且伴有正常免疫球蛋白降低和骨質(zhì)疏松或(和)廣泛溶骨病變[5-6]。由于多發(fā)性骨髓瘤的臨床表現(xiàn)極具多樣化，在早期極易發(fā)生誤診。因而臨床上對(duì)于出現(xiàn)不能解釋的骨質(zhì)疏松、腰背疼痛，反復(fù)感染以及腎功能損害的老年貧血患者，應(yīng)給予高度的重視。骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是臨床診斷多發(fā)性骨髓瘤的重要參考依據(jù)，通過(guò)進(jìn)行骨髓穿刺涂片，對(duì)患者的骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變情況進(jìn)行觀察，可以有效鑒別以及診斷多發(fā)性骨髓瘤。由于骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查獲取骨髓液較為容易，細(xì)胞形態(tài)比較清楚，涂片操作簡(jiǎn)單，臨床使用較為廣泛[7-9]。

但是由于骨髓瘤細(xì)胞與正常的漿細(xì)胞具有一定程度的相似，特別是鑒別診斷巨球蛋白血癥以及反應(yīng)性漿細(xì)胞增多癥時(shí)，患者的骨髓形態(tài)表現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤極為相似，單純依靠骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征無(wú)法做出準(zhǔn)確的診斷。流式細(xì)胞分析儀通過(guò)對(duì)骨髓瘤相關(guān)抗原進(jìn)行檢測(cè)，能對(duì)骨髓瘤的髓外浸潤(rùn)以及復(fù)發(fā)等多個(gè)方面來(lái)對(duì)多發(fā)性骨髓瘤患者的預(yù)后進(jìn)行全面的評(píng)估。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)由于采用的為單細(xì)胞懸液，具有極佳的均一性，可以分析較多的細(xì)胞，臨床檢出率較高[10-11]。細(xì)胞免疫表型分析能為多發(fā)性骨髓瘤患者的臨床診斷提供重要的參考依據(jù)。歐洲骨髓瘤協(xié)作組推薦細(xì)胞免疫表型分型至少要使用CD38、CD45以及CD138中的一種抗體對(duì)漿細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別，CD45設(shè)門可以區(qū)分瘤細(xì)胞與有核紅細(xì)胞以及造血干細(xì)胞以外的其它骨髓有核細(xì)胞[12]。

本研究免疫組化選擇Kappa輕鏈，CD138以及l(fā)ambda輕鏈單克隆抗體作為識(shí)別異常漿細(xì)胞的標(biāo)志物。本研究中的60例多發(fā)性骨髓瘤患者中，Kappa陽(yáng)性43例，CD138陽(yáng)性表達(dá)率為100.00%，lambda陽(yáng)性16例，與血清免疫固定電泳結(jié)果一致。流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)CD45表達(dá)異常(55例陰性、5例部分陽(yáng)性)；CD19的陰性表達(dá)率為100.00%；CD38以及CD138的陽(yáng)性表達(dá)率均為100.00%。本研究結(jié)果與劉艷榮[13]的研究相一致。而流式細(xì)胞學(xué)檢查沒(méi)有檢測(cè)到骨髓瘤細(xì)胞，其原因可能是瘤細(xì)胞呈灶性分布，流式細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本不一定采集到骨髓瘤細(xì)胞而發(fā)生漏檢。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，形態(tài)學(xué)檢查骨髓瘤細(xì)胞所占比例明顯高于流式細(xì)胞學(xué)以及免疫組化檢測(cè)(P<0.05)，流式細(xì)胞學(xué)以及免疫組化檢測(cè)相比無(wú)明顯差異(P>0.05)。分析其原因?yàn)?，骨髓涂片?huì)受到各種因素的影響而造成細(xì)胞分布的不均勻，使得不同計(jì)數(shù)區(qū)域的骨髓瘤細(xì)胞的所占比例具有較大的不同；在進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的過(guò)程中，由于必須對(duì)成熟的紅細(xì)胞進(jìn)行破除，而漿細(xì)胞的胞漿量較為豐富，在破除成熟的紅細(xì)胞的過(guò)程中，會(huì)不可避免地破壞少量的漿細(xì)胞，導(dǎo)致流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的漿細(xì)胞所占比例降低。流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性者55例，陽(yáng)性診斷符合率為91.67%；免疫組化檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性者57例，陽(yáng)性診斷符合率為95.00%。提示流式細(xì)胞術(shù)以及免疫組化檢測(cè)對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的檢測(cè)陽(yáng)性率均較高，對(duì)其確診均具有檢測(cè)意義。

綜上所述，形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)以及免疫組化在檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤患者中均具有較高的應(yīng)用價(jià)值，可按照患者的具體情況，將三者聯(lián)合使用以提高臨床陽(yáng)性診斷率和療效監(jiān)測(cè)。