不同保存溫度和時間對血細胞分析結(jié)果的影響*

夏炳妍，周玉明，燕丕宏，譚宏偉，高 軍，王國艷,王美蓉，封建凱，宿振國，張玉強

(濱州醫(yī)學(xué)院煙臺附屬醫(yī)院檢驗科，山東煙臺 264003)

臨床上血細胞分析是最基礎(chǔ)的血液檢測方法，是很多臨床疾病診斷的依據(jù)之一[1-2]。血細胞分析會受多種因素的干擾，包括采集血液的手法、被檢測者的身體狀況和采集血液時的體位、標(biāo)本采集后的保存條件等[3-5]。如標(biāo)本獲得后不能即刻進行檢測，往往需要將血標(biāo)本進行保存，而標(biāo)本的保存溫度與保存時間對血常規(guī)檢測結(jié)果有何影響，需系統(tǒng)研究分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 共收集本院臨床科室送檢的120例患者標(biāo)本，男、女各60例，年齡20～40歲。120份血液標(biāo)本分為3組，每組各40份，第1組：置于-20 ℃冰柜冷凍，第2組：置于4 ℃冰箱保存，第3組：置于20 ℃室溫保存，分別檢測即刻、1 d、3 d和7 d的血細胞參數(shù)。

1.2儀器與試劑 采用Sysmex XN 1000全自動模塊式血液分析儀進行血常規(guī)檢測。儀器采用的所有試劑均為Sysmex設(shè)備專用試劑。

1.3檢測方法 血常規(guī)檢驗是一種對血液中的紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(Hb)進行計數(shù)，以及對WBC進行分類的一種檢驗方法。采集健康體檢人員2 mL靜脈血，置于乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝真空采血管中，搖勻6～8次。按照Sysmex XN 1000全自動模塊式血液分析儀使用說明書進行操作，在室內(nèi)質(zhì)量控制在控的情況下對血標(biāo)本進行檢測。采用液壓聚焦法、SLS-血紅蛋白法、WDF通道分別測定RBC、PLT、Hb及WBC分類。分別檢測即刻、1 d、3 d、7 d的血細胞參數(shù)。

1.4檢測指標(biāo) 除檢測WBC、RBC、Hb、PLT外，還對中性粒細胞(NEUT)、嗜酸性粒細胞(EO)、嗜堿性粒細胞(BASO)、淋巴細胞(LYMPH)及單核細胞(MONO)進行分類計數(shù)。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS18.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理，方差分析對數(shù)據(jù)進行分析處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1RBC在不同時間、不同溫度下保存的變化情況 見圖1。-20 ℃冷凍條件下，保存1、3、7 d時RBC數(shù)量逐漸降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4 ℃低溫保存條件下，保存1、3、7 d時RBC數(shù)量無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。20 ℃室溫保存條件下，保存1、3 d時RBC數(shù)量無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，保存7 d時RBC數(shù)量開始有所升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室溫

圖1 RBC在不同時間、不同溫度下保存的變化情況

2.2WBC在不同時間、不同溫度下保存的變化情況 見圖2。-20 ℃冷凍條件下，保存1 d時WBC數(shù)量逐漸降低，在1～7 d時WBC數(shù)量與即刻測定結(jié)果比較依然降低，但無持續(xù)降低趨勢，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4 ℃低溫保存條件下，保存1 d內(nèi)WBC數(shù)量無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，保存1～7 d時WBC數(shù)量稍微降低。20 ℃室溫保存條件下，保存1、3、7 d時WBC數(shù)量持續(xù)升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室溫

圖2 WBC在不同時間、不同溫度下保存的變化情況

2.3PLT在不同時間、不同溫度下保存的變化情況 見圖3。-20 ℃冷凍條件下，保存1、3 d時PLT數(shù)量無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，保存7 d時PLT大幅度升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4 ℃低溫和20 ℃室溫保存條件下，保存1、3、7 d時PLT數(shù)量無明顯變化，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室溫

圖3 PLT在不同時間、不同溫度下保存的變化情況

2.4Hb在不同時間、不同溫度下保存的變化情況 見圖4。-20 ℃冷凍條件下，保存1、3、7 d時Hb水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。4 ℃低溫保存條件下，保存1、3 d時Hb水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，保存3～7 d時Hb水平逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。20 ℃室溫保存條件下，保存1、3 d時Hb水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，在3～7 d時Hb水平開始有所升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室溫

圖4 Hb在不同時間、不同溫度下保存的變化情況

2.5-20 ℃冷凍條件下，不同保存時間WBC分類計數(shù)情況 見圖5。NEUT：保存1 d后，細胞數(shù)量逐漸降低，在1～7 d時細胞數(shù)量與即刻測定結(jié)果比較依然降低，但無持續(xù)降低趨勢，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。LYMPH：保存1 d后，細胞數(shù)量逐漸升高，在1～7 d時細胞數(shù)量與即刻測定結(jié)果比較依然升高，但無持續(xù)升高趨勢，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MONO:保存1 d后細胞數(shù)量逐漸降低，在1～7 d時細胞數(shù)量與即刻測定結(jié)果比較依然降低，但無持續(xù)降低趨勢，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。EO和BASO細胞數(shù)量均無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.64 ℃低溫條件下，不同保存時間WBC分類計數(shù)情況 見圖6。NEUT：保存1、3、7 d時細胞數(shù)量逐漸降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。LYMPH：保存1、3、7 d時細胞數(shù)量逐漸升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MONO：保存1、3 d后，細胞數(shù)量逐漸升高，在3～7 d時細胞數(shù)量與即刻測定結(jié)果比較依然升高，但無持續(xù)升高趨勢，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。EO和BASO細胞數(shù)量無明顯變化，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

圖5 -20 ℃冷凍條件下，不同保存時間WBC分類計數(shù)情況

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

圖6 4 ℃低溫條件下，不同保存時間WBC分類計數(shù)情況

2.720 ℃室溫條件下，不同保存時間WBC分類計數(shù)情況 見圖7。NEUT：保存1、3、7 d時細胞數(shù)量逐漸降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。LYMPH：保存1、3、7 d時細胞數(shù)量逐漸升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MONO：保存1 d后，細胞數(shù)量逐漸升高，在保存1～3 d時細胞數(shù)量與即刻測定結(jié)果比較依然升高，但無持續(xù)升高趨勢，在保存3～7 d時細胞數(shù)量逐漸降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。EO和BASO細胞數(shù)量無明顯變化，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

圖7 20 ℃室溫條件下，不同保存時間WBC分類計數(shù)情況

2.8標(biāo)本在不同時間、不同溫度條件下外周血圖片 見圖8。-20 ℃冷凍條件下保存，1、3、7 d后RBC大部分溶解破裂，因此外周血圖片基本看不到完整的RBC。4 ℃低溫條件下保存，3 d后鏡下可見分葉核，7 d內(nèi)RBC數(shù)量基本無變化。20 ℃室溫條件下保存，3 d后WBC多為單個核細胞。

圖8 不同時間、不同溫度下外周血涂片

3 討 論

血常規(guī)檢測是一種對全血標(biāo)本進行檢測的方法，主要包括血液中的RBC、WBC、PLT數(shù)量及Hb水平，以及對WBC進行分類計數(shù)。血常規(guī)檢測在臨床上是一種基本的輔助診斷手段，若要獲得較為準(zhǔn)確的血細胞分析結(jié)果，需要考慮多方面的因素，例如：靜脈血的采集過程和采集方法、采血管抗凝劑、血液保存環(huán)境等[6]。在實際工作中，標(biāo)本需要暫時保存的情況很多，例如：標(biāo)本檢測過程中，儀器出現(xiàn)故障；有時需要將標(biāo)本轉(zhuǎn)送到第三方實驗室檢驗，運送的過程中需要對標(biāo)本進行保存。

20 ℃室溫條件下，在真空管內(nèi)保存的標(biāo)本隨著保存時間延長，平均紅細胞體積會逐漸升高，紅細胞比容也會隨之升高，但紅細胞平均血紅蛋白濃度會逐漸降低。隨著標(biāo)本保存時間延長，細胞有自身的代謝，而且保存環(huán)境也有所改變，細胞體積、細胞核與胞漿比例、細胞活性都會隨之發(fā)生變化，此時WBC分類計數(shù)的準(zhǔn)確性會大大降低，有可能機器根本無法正常分類[7]。PLT很容易集合在一起形成大顆粒，而用來檢測的機器只能通過PLT大小來辨別出PLT，這樣就可能導(dǎo)致機器將集合在一起的PLT當(dāng)成小RBC來計數(shù)[8]。

可能導(dǎo)致標(biāo)本干擾的因素很多，如WBC凝集、冷凝蛋白、冷球蛋白、纖維蛋白、巨大PLT會影響WBC測定；RBC凝集、小紅細胞癥、WBC增多、巨大PLT會影響RBC計數(shù)；高脂血癥、異常蛋白會干擾Hb測定；RBC凝集、小RBC、WBC增多、嚴重糖尿病、尿毒癥、球形RBC會影響紅細胞比容測定；PLT凝集、假性PLT減少、巨型PLT、小紅細胞癥、分裂的RBC、WBC碎片、冷凝蛋白、冷球蛋白等會影響PLT測定。

在本試驗中隨機抽取了查體中心的120例健康體檢者的EDTA-K2抗凝靜脈血標(biāo)本120份，將120份標(biāo)本分為3組，每組各40份，第1組：置于-20 ℃冰柜冷凍，第2組：置于4 ℃冰箱保存，第3組：置于20 ℃室溫保存，分別檢測即刻、1 d、3 d和7 d時的血細胞參數(shù)。

本研究發(fā)現(xiàn)，血常規(guī)標(biāo)本最適合在4 ℃低溫條件下保存，標(biāo)本保存1 d時RBC、WBC、PLT和Hb檢測結(jié)果無明顯變化，但對WBC分類有影響,在20 ℃室溫條件下保存1 d時WBC數(shù)量逐漸升高，RBC基本無明顯變化，由此可得出，在血細胞分析中，RBC比WBC保持結(jié)果無明顯變化的時間長，WBC結(jié)果的穩(wěn)定性受環(huán)境的影響很大[9]。三磷酸腺苷會促使PLT集合在一起，大量二磷酸腺苷來自于臨床上三磷酸腺苷的分解，而二磷酸腺苷是一種PLT誘導(dǎo)劑，會促使PLT發(fā)生聚集，因此，PLT計數(shù)的準(zhǔn)確性會受到影響[10]。

因此，在臨床工作中采集標(biāo)本后應(yīng)該立即送檢，檢驗科從采集標(biāo)本到實驗室檢測標(biāo)本的時間不應(yīng)該超過1 d，如果要保存標(biāo)本應(yīng)該放在4 ℃條件下保存。血常規(guī)標(biāo)本最適合在4 ℃低溫條件下保存，標(biāo)本保存1 d時對RBC、WBC、PLT和Hb結(jié)果無明顯影響，但對WBC分類計數(shù)有影響。在-20 ℃和20 ℃室溫下，NEUT逐漸減少，LYMPH逐漸增多；在4 ℃下1 d內(nèi)NEUT、LYMPH無明顯變化，1 d后NEUT逐漸減少，LYMPH逐漸增多。

本文探討了血液標(biāo)本在不同保存時間與保存溫度條件下血細胞各項參數(shù)變化情況，研究結(jié)果提示，血常規(guī)標(biāo)本最適合在4 ℃低溫條件下保存，并且臨床上采集標(biāo)本后立即送檢結(jié)果最好。但臨床送檢的標(biāo)本不可能馬上得到檢測，即刻檢測雖在理論上可行，但缺乏操作性。臨床標(biāo)本均是在20 ℃室溫放置當(dāng)天檢測完畢，因此，研究20 ℃室溫下24 h內(nèi)不同時間點血細胞各項參數(shù)的變化更能貼近臨床現(xiàn)狀。下一步將對此進行詳細研究，為更適合臨床操作的保存條件提供理論基礎(chǔ)。