肺癌組織中細(xì)胞角蛋白7和細(xì)胞角蛋白20的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

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(1.南方醫(yī)科大學(xué)附屬南海醫(yī)院、佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院腫瘤科二區(qū)， 廣東 佛山 528200；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬南海醫(yī)院、佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 佛山 528200)

肺癌是一種臨床常見的惡性腫瘤，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已成為惡性腫瘤死亡的主要原因之一。肺癌組織存在細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK)不同程度的表達(dá)，CK主要分布于上皮細(xì)胞，是角質(zhì)細(xì)胞中的主要骨架蛋白，這種結(jié)構(gòu)蛋白的主要功能是維持上皮組織的完整性及連續(xù)性。目前，有超過20種亞型已經(jīng)確認(rèn)分布在不同器官的上皮細(xì)胞上。其中，CK7產(chǎn)生于器官的腺癌成分，包括肺部組織，主要表達(dá)部位是細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)[1-2]。CK20是一種Ⅰ型低相對分子質(zhì)量CK，具有嚴(yán)格的上皮組織特異性，只有在上皮組織和上皮來源的腫瘤組織中表達(dá)[3]。多數(shù)研究[2，4]表明CK7、CK20已用于原發(fā)性肺腺癌的鑒別診斷和轉(zhuǎn)移癌原發(fā)部位起源的檢測，以及起源于上皮組織惡性腫瘤的研究。我們分析探討CK7和CK20的表達(dá)與肺癌預(yù)后臨床指標(biāo)的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月至2014年1月在南方醫(yī)科大學(xué)附屬南海醫(yī)院住院的肺癌患者80例，其中男55例，女25例；年齡25～85(46.15±5.6)歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：1)年齡18～70 歲；2)PS評分0～1分；3)經(jīng)組織病理和免疫組化明確診斷；4)至少有1個(gè)可測量的病灶；5)無主要器官的功能障礙，血常規(guī)、肝功能、腎功能及心臟功能基本正常。白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥4.0×109·L-1、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)≥1.5×109·L-1、血小板計(jì)數(shù)≥80×109·L-1、血紅蛋白≥90 g·L-1，血清膽紅素≤1.5倍正常值的上限、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶≤2.5倍正常值的上限、血肌酐≤133μmol·L-1；6)預(yù)計(jì)生存時(shí)間超過3個(gè)月；7)能理解本治療情況并已簽署知情同意書者；8)進(jìn)行血清及尿妊娠實(shí)驗(yàn)檢查，排除懷孕可能。所有患者行規(guī)范的手術(shù)、化療、放療、靶向等綜合性治療。

1.2吸煙情況按吸煙指數(shù)0、<400和≥400年支分為3個(gè)級別[5]。

1.3隨訪所有患者組織病理學(xué)診斷明確為觀察起點(diǎn)，按照2013年美國NCCN指南進(jìn)行規(guī)范性治療，采用微信群、QQ群等新時(shí)代自媒體方式進(jìn)行追蹤觀察，觀察期暫為2 a。

1.4檢測方法所有組織標(biāo)本在手術(shù)過程或進(jìn)行肺部腫物穿刺活檢中獲得，固定于質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%中性多聚甲醛溶液中，并進(jìn)行常規(guī)脫水、石蠟包埋、備用于免疫組化。免疫組化染色：所有組織標(biāo)本均做HE染色及免疫組化染色。嚴(yán)格采用免疫組化EliVision兩步法對組織標(biāo)本進(jìn)行染色。標(biāo)本24 h固定于質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%中性多聚甲醛溶液中，然后嵌入在常規(guī)石蠟用于歸檔。標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切取4～5 片厚度為5 μm 的切片，與磷酸鹽緩沖液作為陰性對照。免疫組化染色方法按照試劑盒說明書操作，在染色過程中，用已知CK7、CK20陽性組織芯片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.5判定標(biāo)準(zhǔn)用病理圖像分析儀進(jìn)行檢測。由經(jīng)驗(yàn)豐富且不知情的同一病理科醫(yī)生在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察判定。陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)是CK7和CK20均位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，并發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核呈棕黃色或黃色。隨機(jī)選擇10個(gè)用400倍率顯微鏡下觀察切片。每個(gè)視野觀察50～100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算所有觀察細(xì)胞中陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，評分系統(tǒng)參考陽性細(xì)胞百分率：<1%為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。0分定義為陰性(-)，1～2分為陽性(+)，>2分為強(qiáng)陽性(++)，后兩者均計(jì)為陽性。評分后在雙盲模式下對結(jié)果進(jìn)行計(jì)算。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，生存分析用Kaplan-Meier 法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1肺癌組織中CK7和CK20的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系肺癌組織中CK7和CK20表達(dá)陽性率分別為70.00%、18.75%。肺癌組織中CK7表達(dá)陽性率與患者病理類型和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與否有關(guān)(P均<0.05)。見表1。

表1 肺癌組織中CK7和CK20的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

2.2CK7和CK20的表達(dá)與肺癌患者預(yù)后情況的關(guān)系CK7陽性肺癌患者2 a生存率與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)。CK20陽性肺癌患者2 a生存率與分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)。見表2。

表2 肺癌患者2 a生存率影響因素的單因素Kaplan-Meier分析結(jié)果

3 討論

CK具有極高的保守性和組織分化特異性，與上皮細(xì)胞的類型、增殖、分化密切相關(guān)，因而被用作腫瘤標(biāo)志[6]。我們的免疫組化檢查結(jié)果顯示，CK20和CK7均位于細(xì)胞質(zhì)，肺癌組織中CK7和CK20的表達(dá)具有一定的陽性率，CK7和CK20高表達(dá)于異常增生的上皮組織，這些異常增生的上皮組織細(xì)胞其功能有所增強(qiáng)，提示CK7和CK20陽性表達(dá)可能與肺癌的發(fā)生、發(fā)展等密切相關(guān)。我們還觀察到在肺癌組織中CK7表達(dá)陽性率高于CK20，且主要表達(dá)于腺癌，兩者在Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，與文獻(xiàn)[7]統(tǒng)計(jì)基本相同。本研究結(jié)果也顯示，肺癌組織中CK7表達(dá)陽性率與患者病理類型和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與否有關(guān)(P均<0.05)；CK7陽性肺癌患者2 a生存率與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)。CK20陽性肺癌患者2 a生存率與分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)。這些結(jié)果證實(shí)，CK7和CK20不但可以作為輔助診斷的標(biāo)志物，同時(shí)還可以成為了解病情預(yù)后情況、復(fù)查評估的標(biāo)志物。我們的跟蹤研究表明，CK7和CK20表達(dá)陽性患者其生存時(shí)間明顯短于表達(dá)陰性的患者。

經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，CK20的表達(dá)也可以預(yù)測腫瘤早期轉(zhuǎn)移和亞臨床轉(zhuǎn)移情況，在肺癌中的過度表達(dá)作為微轉(zhuǎn)移的指標(biāo)具有較高的敏感性[8-9]。我們探討CK20的表達(dá)在惡性腫瘤相關(guān)的臨床病理特征與預(yù)測臨床預(yù)后價(jià)值。CK20陽性表達(dá)可作為轉(zhuǎn)移性肺癌的一個(gè)重要標(biāo)志，是肺癌預(yù)后不良的預(yù)測因素之一。Tsouma等[10]研究報(bào)道CK20在外周血的檢出率高達(dá)78.4%，目前在國內(nèi)外對CK7和CK20的研究只見有對食管、胃、結(jié)直腸癌的研究報(bào)道，和只是針對黏液性肺癌單一病種的分析，以及單純CK7在肺癌、肺轉(zhuǎn)移癌中的臨床意義的研究[2]。國內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)全面評價(jià)CK7和CK20兩者在肺癌組織中的表達(dá)關(guān)系及治療反應(yīng)情況的報(bào)道。

總之，肺癌組織中CK7的表達(dá)陽性率高于CK20，且主要表達(dá)于腺癌，CK7和CK20兩者表達(dá)與患者的生存預(yù)后關(guān)系密切，表達(dá)陽性者預(yù)后較表達(dá)陰性者預(yù)后差。而且本研究有助于本地區(qū)臨床工作者更加全面了解治療情況，為患者制定更加優(yōu)化的個(gè)體化治療方案。