十味鵝黃顆粒的醇沉及干燥工藝研究

朱智德 羅宇東 肖明

[摘要]目的 優(yōu)化十味鵝黃顆粒的醇沉及干燥工藝。方法 以十味鵝黃顆粒沉醇液中的黃芪甲苷含量為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)，考查清膏的相對(duì)密度、加入乙醇濃度、醇沉液含醇量及醇沉后靜置時(shí)間4個(gè)因素對(duì)產(chǎn)品醇沉工藝的影響，確定十味鵝黃顆粒最佳醇沉工藝。研究不同干燥方式及溫度對(duì)干膏中黃芪甲苷含量的影響，確定產(chǎn)品的最佳干燥工藝。結(jié)果 十味鵝黃顆粒的最佳醇沉工藝為濃縮液相對(duì)密度1.10～1.15（80℃），加入95%乙醇使含醇量達(dá)70%，醇沉?xí)r間12 h；十味鵝黃顆粒的最優(yōu)干燥工藝為減壓干燥，干燥溫度85℃。按優(yōu)化的醇沉及干燥工藝生產(chǎn)3批產(chǎn)品，干膏中黃芪甲苷平均含量為5.48 mg/g，RSD為1.74%（n=3）。結(jié)論 按優(yōu)化的醇沉及干燥工藝生產(chǎn)十味鵝黃顆粒，產(chǎn)品含有與處方藥味相應(yīng)的有效成分，質(zhì)量穩(wěn)定，適合大生產(chǎn)，因此該工藝是合理可行的。

[關(guān)鍵詞]十味鵝黃顆粒；醇沉；干燥；黃芪甲苷

[中圖分類(lèi)號(hào)] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）9（a）-0011-05

[Abstract] Objective To optimize the alcohol precipitation and drying process of Shiwei Ehuang Granules. Methods Taken the content of Astragaloside A in Shiwei Ehuang Granules as the indexes， the orthogonal design was used to examine the effect of four factors （relative density of the ointment， added alcohol concentration， alcohol precipitation content and standing time after alcohol precipitation） on the alcohol precipitation process of the product， so as to determine the best process of alcohol precipitation for Shiwei Ehuang Granules. The effect of different drying methods and temperature on the content of Astragaloside A in dry ointment was studied to determine the best drying process for the product. Results The optimal alcohol precipitation process of Shiwei Ehuang Granules was as follows： 1.10-1.15 （80°C） relative density of ointment， adding 95% alcohol to make alcohol content 70%， and 12 h alcohol precipitation time. The optimal drying process of Shiwei Ehuang Granules was decompression drying， and the drying temperature was 85℃. The average content of Astragaloside A in three batches of products according to above optimized alcohol precipitation and drying process was 5.48 mg/g， and RSD was 1.74% （n=3）. Conclusion Shiwei Ehuang Granules produced according to the optimized alcohol precipitation and drying process contain the effective components corresponding to the prescription， whose quality is stable and suitable for mass production. Therefore， the process is reasonable and feasible.

[Key words] Shiwei Ehuang Granules； Alcohol precipitation； Drying； Astragaloside A

過(guò)敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）為鼻黏膜慢性炎癥反應(yīng)性疾病，隨著工業(yè)化水平的提高、居住生存環(huán)境的污染惡化，AR的發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重危害人類(lèi)的健康。AR屬于祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“鼻鼽”的范疇，壯瑤醫(yī)藥作為我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥的重要組成部分，在治療AR方面具有方簡(jiǎn)效明、功效顯著的特點(diǎn)，因此研發(fā)治療AR的中藥或民族藥產(chǎn)品，市場(chǎng)前景廣闊[1-9]。十味鵝黃顆粒為廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠(chǎng)擬開(kāi)發(fā)治療AR的復(fù)方壯藥制劑，該產(chǎn)品在篩選廣西壯瑤族民間治療AR驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，根據(jù)中醫(yī)對(duì)該病病因、病機(jī)的認(rèn)識(shí)和組方原則，由鵝不食草、黃芪、白術(shù)等藥材組方而成，臨床治療AR療效確切。

課題組前期開(kāi)展了十味鵝黃顆粒水提工藝的研究，產(chǎn)品水提后干膏得率約22%，得膏率偏高，單劑藥量偏大，患者服用不方便，因此有必要水提后采用醇沉工藝，進(jìn)一步除去雜質(zhì)，降低干膏得率，減少單劑藥量。十味鵝黃顆粒方中的黃芪為君藥，現(xiàn)代研究表明，黃芪對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)具有明顯的療效，黃芪甲苷為黃芪的主要功效成分[10-13]。本研究采用正交設(shè)計(jì)法，以十味鵝黃顆粒水提沉醇液中黃芪甲苷含量作為工藝考察指標(biāo)，優(yōu)化產(chǎn)品的水提沉醇工藝；采用單因素試驗(yàn)法，比較不同干燥方式（常溫干燥、減壓干燥、噴霧干燥）及干燥溫度對(duì)干膏中黃芪甲苷含量的影響，從而確定產(chǎn)品的最佳干燥工藝，以期為產(chǎn)品的注冊(cè)申報(bào)及規(guī)?；a(chǎn)提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

1.1儀器

1260型高效液相色譜儀（Agilent公司）；3300-ELSD型蒸發(fā)光散色檢測(cè)器（Alltech公司）；SQP型十萬(wàn)分之一電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；KQ5200型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；L600型和TGL-16G型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)）；25 ml附溫比重瓶（上海信誼儀器廠(chǎng)有限公司）；DT系列微型多能提取濃縮機(jī)組（武漢制藥機(jī)構(gòu)設(shè)備公司設(shè)備制造廠(chǎng)）；GDS-1型多功能干燥實(shí)驗(yàn)機(jī)（杭州錢(qián)江干燥設(shè)備有限公司）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)）；ZK-82型真空干燥機(jī)（上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠(chǎng)）；202-2-5型電熱恒溫干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠(chǎng)）。

1.2試藥

黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究所，110781-200613）；鵝不食草為菊科植物鵝不食草Centipeda minima（L.）A.Br.et Aschers.的干燥全草；白術(shù)為菊科植物白術(shù)Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根莖；白芷為傘形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch. Ex Hoffm.）Benth. et Hook. f.的干燥根；防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.的干燥根；廣藿香為唇形科植物廣藿香Pogostemon cablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分；丹皮為毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮；烏梅為薔薇科植物梅Prunus mume（Sieb.）Sieb. Et Zucc.的干燥近成熟果實(shí)。各藥材均購(gòu)自南寧市友和古城大藥房，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠(chǎng)質(zhì)量保證部檢驗(yàn)合格。乙腈（Fisher公司，色譜純）；超純水由密思博超純水機(jī)制備；氨水、正丁醇、甲醇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2方法與結(jié)果

2.1醇沉工藝的研究

2.1.1 L9（34）正交試驗(yàn)因素水平的確定 十味鵝黃顆粒處方藥材按水提工藝濃縮成清膏后，加入乙醇沉淀進(jìn)一步除去雜質(zhì)，影響醇沉效果的主要因素為：①醇沉前清膏相對(duì)密度A；②加入乙醇的濃度B；③醇沉液的含醇量C；④靜置時(shí)間D。以上因素在三個(gè)水平上，進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化，采用L9（34）正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)（表1）。

2.1.2考察指標(biāo)的確定及評(píng)價(jià)方法 醇沉工藝正交試驗(yàn)的評(píng)價(jià)：本品方中君藥黃芪中黃芪甲苷的含量高低，與本品的有效性密切相關(guān)。因此，確定用十味鵝黃顆粒醇沉液中的黃芪甲苷含量作為代表性指標(biāo)，評(píng)價(jià)醇沉工藝的優(yōu)劣。

2.1.3醇沉液樣品的制備 依據(jù)處方藥材量，按水提優(yōu)化的工藝煎煮，煎煮液過(guò)濾濃縮后定容至9000 ml，分成9份，每份取1000 ml，按正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)表安排試驗(yàn)，醇沉液過(guò)濾后，濃縮至500 ml，作為供試品溶液。

2.1.4醇沉液中黃芪甲苷含量的測(cè)定 根據(jù)課題組前期采用HPLC-ELSD法測(cè)定十味鵝黃顆粒中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。

2.1.4.1色譜條件 按2015年版《中國(guó)藥典》高效液相色譜法，色譜柱：美國(guó)安捷倫公司ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水，梯度洗脫（表2）；流速：1 ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μl；Alltech3300-ELSD型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)（漂移管溫度：80℃，氣體流量：2.50 L/min，增益值：4.0）。

2.1.4.2對(duì)照品溶液的制備 取黃芪甲苷適量，精密稱(chēng)定，用甲醇溶解配制成質(zhì)量濃度為2.20 mg/ml的對(duì)照品溶液。分別吸取上述溶液適量定容至同一容量瓶中，加甲醇稀釋制備成含黃芪甲苷為0.816 mg/ml的對(duì)照品溶液。對(duì)照品溶液按“2.1.4.1方法”測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1（A）。

2.1.4.3供試品溶液的制備及測(cè)定 稱(chēng)取“2.1.3方法”制備的十味鵝黃顆粒醇沉液25 ml，揮去乙醇，干燥，取1 g干膏，精密稱(chēng)定，精密加入25 ml 10%氨水，回流30 min，以6000 r/min離心10 min，取上清液，回流提取2次。殘?jiān)尤? ml 10%氨水洗滌2次，離心。合并上清液，用水飽和正丁醇萃取2次，第1次加100 ml，第2次加50 ml，合并正丁醇液，于水浴鍋上蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，移? ml容量瓶，定容，搖勻，以13 000 r/min離心10 min，上清液即為供試品溶液。供試品溶液按“2.1.4.1方法”測(cè)定黃芪甲苷的含量，色譜圖見(jiàn)圖1（B）。

2.1.4.4陰性供試品溶液的制備 原方去黃芪，按“2.1.4.3方法”制備陰性供試品溶液，按“2.1.4.1方法”測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1（C）。

2.1.5試驗(yàn)結(jié)果 分析正交試驗(yàn)結(jié)果表明，各因素對(duì)醇沉效果的影響依次為：濃縮液相對(duì)密度A>含醇量C>乙醇濃度B>靜置時(shí)間D，醇沉工藝的最佳水平組合為：A3B2C3D3，即濃縮液相對(duì)密度1.15～1.19，含醇量70%，加入90%乙醇，靜置48 h（表3）。方差分析結(jié)果可知，乙醇濃度及靜置時(shí)間為最小影響因素（表4）。因此，為提高效率，醇沉工藝定為濃縮液濃縮至相對(duì)密度1.15～1.19，加入95%乙醇調(diào)節(jié)醇沉液含醇量至70%，靜置12 h。

2.2干燥工藝的研究

2.2.1干燥方式的選擇 目前中藥浸膏常用的干燥方法有常溫干燥、減壓干燥、噴霧干燥、微波干燥、冷凍干燥等，不同干燥方法對(duì)中藥浸膏中有效成分的含量均產(chǎn)生不同的影響[14-21]。課題組前期進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)噴霧干燥浸膏“粘壁”現(xiàn)象嚴(yán)重，干燥損耗率較高（損耗達(dá)≥30%）；常溫干燥使用設(shè)備簡(jiǎn)單，但干燥時(shí)間較長(zhǎng)（≥48 h），效率低下；減壓干燥時(shí)間短，損耗率低，因此，選擇減壓干燥作為產(chǎn)品的干燥方式。

2.2.2干燥溫度的選擇 本產(chǎn)品按優(yōu)化的水提及醇沉工藝制備得稠膏后，分別稱(chēng)取稠膏5 g，于75℃、85℃、95℃下減壓干燥至恒重，取干膏1 g，精密稱(chēng)定，按“2.1.4.3的方法”測(cè)定干膏中黃芪甲苷的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，干燥溫度對(duì)本品黃芪甲苷含量有影響，以85℃減壓干燥最佳，能提高工效且不降低黃芪甲苷含量（表5）。因此，確定稠膏的干燥溫度條件為85℃減壓干燥。

2.3醇沉及干燥優(yōu)化工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

為驗(yàn)證醇沉及優(yōu)化工藝的可行性及穩(wěn)定性，按優(yōu)化的水提醇沉及干燥工藝重復(fù)3次，測(cè)定所得干膏中的黃芪甲苷含量，計(jì)算干膏得率。結(jié)果提示，按優(yōu)化的水提醇沉及干燥工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品含有與處方藥味相應(yīng)的有效成分，且重復(fù)性好，質(zhì)量穩(wěn)定，具有可操作性（表6）。

3討論

影響中藥醇沉工藝的因素主要有初膏濃度及溫度、乙醇用量及乙醇濃度、醇沉溫度及時(shí)間、加醇方式、攪拌速度及原材料影響等。國(guó)內(nèi)研究者多以中藥制劑中的某一成分含量作為優(yōu)化指標(biāo)，考察初膏濃度、乙醇用量及醇沉?xí)r間3個(gè)因素對(duì)醇沉工藝的影響。目前相關(guān)研究指出，由于中藥成份較為復(fù)雜，往往多指標(biāo)、多成份、多靶點(diǎn)發(fā)揮作用，單純用一種活性成分含量高低作為優(yōu)化工藝的指標(biāo)是欠妥的。美國(guó)FDA的作法是，其不求工藝為最優(yōu)的，但是追求一定要是穩(wěn)定的，具有生產(chǎn)可重復(fù)性的。借鑒此種觀(guān)點(diǎn)，本研究的醇沉工藝優(yōu)選，除以黃芪甲苷含量作為優(yōu)化指標(biāo)，考查清膏的相對(duì)密度、加入乙醇濃度、醇沉液含醇量、醇沉后靜置時(shí)間4個(gè)因素對(duì)產(chǎn)品醇沉工藝的影響之外，還對(duì)優(yōu)化工藝的穩(wěn)定性及可重復(fù)性進(jìn)行了考察。按優(yōu)化的醇沉及干燥工藝生產(chǎn)了3批中試產(chǎn)品，測(cè)定干膏中黃芪甲苷平均含量為5.48 mg/g（RSD為1.74%，n=3），干膏平均得率為12.09%（RDS為2.28%，n=3）。

不同干燥方式及溫度對(duì)中藥浸膏中黃芪甲苷含量均產(chǎn)生影響。目前常用的干燥方式有常溫干燥、真空干燥、噴霧干燥、微波干燥、遠(yuǎn)紅外干燥、真空帶式干燥等。本研究考察了常溫、減壓、噴霧干燥工藝對(duì)產(chǎn)品浸膏干燥時(shí)間、損耗率及主要成分黃芪甲苷含量的影響，其他干燥方式對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性及黃芪甲苷含量的影響，還有待進(jìn)一步的研究。

本研究采用正交設(shè)計(jì)，以制劑處方中君藥黃芪中的黃芪甲苷含量作為優(yōu)化指標(biāo)，考察產(chǎn)品的醇沉工藝，確定十味鵝黃顆粒最佳醇沉工藝為濃縮液相對(duì)密度1.10～1.15（80℃），加入95%乙醇使含醇量達(dá)70%，醇沉?xí)r間12 h。此外，本研究確定了產(chǎn)品的最佳干燥工藝為減壓干燥，干燥溫度85℃。按優(yōu)化工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品含有與處方藥味相應(yīng)的有效成分，且質(zhì)量穩(wěn)定，重復(fù)性好，適合工業(yè)大生產(chǎn)。另外，本產(chǎn)品經(jīng)水提工藝處理后，干膏得率約22%，經(jīng)過(guò)醇沉及干燥工藝后，干膏得率降至約12%，既減少了患者的服用劑量，也為后續(xù)制粒工藝提供了便利。

[參考文獻(xiàn)]

[1]孔喬，李安，呂萌，等.過(guò)敏性鼻炎的預(yù)防與中醫(yī)外治法研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2017，36（12）：142-143.

[2]于新怡.過(guò)敏性鼻炎的中醫(yī)治療[J].首都食品與醫(yī)藥，2017， 24（21）：62-63.

[3]樊佳，唐雪春.中醫(yī)藥治療成人過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征的研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22（12）：229-234.

[4]王放，姜之炎.中醫(yī)內(nèi)治小兒過(guò)敏性鼻炎綜述[J].中醫(yī)兒科雜志，2018，14（1）：78-81.

[5]閻曉琳，楊莎莎，高洪嬌，等.中醫(yī)外治法治療過(guò)敏性鼻炎概況[J].湖南中醫(yī)雜志，2018，34（1）：183-184.

[6]袁曉琳.金匱腎氣丸化裁治療變應(yīng)性鼻炎[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2016，23（5）：109-110.

[7]佟雷，劉金麗，王景欣，等.玉屏風(fēng)顆粒對(duì)過(guò)敏性鼻炎大鼠免疫因子的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2016，41（4）：728-730.

[8]王化龍，李振虎，徐現(xiàn)通.中藥治療過(guò)敏性疾病的藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2015，46（10）：1542-1555.

[9]提桂香，鐘潤(rùn)巧.過(guò)敏性鼻炎中醫(yī)研究進(jìn)展[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2012，28（10）：889-890.

[10]王玲麗，豐華玲，楊柯，等.黃芪生物學(xué)及化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2017，36（6）：2581-2585.

[11]劉洋，杜婧，沈顏紅.10種藥用黃芪屬植物化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（18）：222-234.

[12]汪海斌，石巖，李芳，等.中藥黃芪指紋圖譜的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2017，28（33）：4749-4752.

[13]孫政華，邵晶，郭玫.黃芪化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)臨床研究，2015，7（25）：22-25.

[14]馬茹，龔燚婷，劉璘，等.低真空度下冷凍干燥技術(shù)在中藥鮮藥保存方面的應(yīng)用分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（21）：30-34.

[15]何雁，謝茵，鄭龍金，等.空氣濕度對(duì)中藥浸膏噴霧干燥過(guò)程的影響及浸膏粉的穩(wěn)定性預(yù)測(cè)[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40（3）：424-429.

[16]閆芳，李君，郭金甲，等.冷凍干燥技術(shù)在中藥制劑應(yīng)用中關(guān)鍵因素的探討[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20（25）：128-129.

[17]徐惠芳，黃雨威，曾敏.微波干燥滅菌在中藥生產(chǎn)領(lǐng)域中的應(yīng)用[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2015，12（15）：50-53.

[18]劉苗苗，葉利春，陳立軍，等.真空冷凍干燥技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用[J].中藥材，2014，37（5）：909-911.

[19]桑迎迎，周?chē)?guó)燕，王愛(ài)民，等.中藥材干燥技術(shù)研究進(jìn)展[J].中成藥，2010，32（12）：2140-2144.

[20]詹娟娟，伍振峰，王雅琪，等.中藥材及制劑干燥工藝與裝備現(xiàn)狀及問(wèn)題分析[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40（23）：4715-4720.

[21]詹娟娟，伍振峰，尚悅，等.中藥浸膏干燥工藝現(xiàn)狀及存在的問(wèn)題分析[J].中草藥，2017，48（12）：2365-2370.

（收稿日期：2018-04-21 本文編輯：孟慶卿）