膠體金標(biāo)記技術(shù)在免疫檢測中的應(yīng)用探討

楊瓊

【摘要】目的：探討膠體金標(biāo)記技術(shù)在免疫檢測中的應(yīng)用探討。方法：選取200份不同的血清用于檢測，研究組應(yīng)用檸檬酸三鈉還原法制作膠體金顆粒，并制作成免疫檢測試條，用于檢測血清中肝炎病毒抗原；對照組應(yīng)用酶免疫法法檢測血清。結(jié)果：研究組檢測法靈敏度高于對照組（P<0.05）。結(jié)論：在用于免疫檢測中，膠體金標(biāo)記技術(shù)效果理想，臨床上應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】膠體金標(biāo)記技術(shù)；乙型肝炎病毒抗原；酶免疫法法；免疫檢測

【中圖分類號】R249 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】2095-6851（2018）10-050-01

膠體金標(biāo)記技術(shù)是一種新研發(fā)出來的的免疫標(biāo)記技術(shù)，與同位素、熒光素、膠乳、酶相比，具有避免產(chǎn)生放射性污染、沒有其他因素干擾、定位更準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)[1]。膠體金標(biāo)記技術(shù)的原理是利用還原法還原氯金酸，得到金顆粒，以膠體金顆粒作為顯色劑或標(biāo)志物，用于標(biāo)記血清內(nèi)抗原抗體反應(yīng)。膠體金標(biāo)記技術(shù)被廣泛的應(yīng)用在制造體外診斷試劑、蛋白染色、電鏡、免疫印跡等方面[2]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

準(zhǔn)備材料：氯酸金、檸檬酸三鈉、因肝炎住院患者的血清標(biāo)本、HBsAg酶免疫診斷試劑盒、HBsAg靈敏度標(biāo)準(zhǔn)參比品、單克隆抗HBs。

1.2 方法

1.2.1 對照組方法 取血清于試管中，將酶復(fù)合物稀釋后，加入取出來的血清里，組成酶標(biāo)抗體或抗原，再加入底物，底物被酶催化為有色底物，根據(jù)顏色來判斷陰性、陽性。

1.2.2 研究組方法 用純水將氯酸金溶解，煮沸后加入1.5ML的濃度為1%的檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)加熱將溶液煮沸。5分鐘后將溶液冷卻，再加入2ml的抗HBs IgG，并快速攪拌，后續(xù)加入牛血清蛋白，用氯化鈉溶液將其攪拌均勻，最后用離心法將上清液分離出來，獲取沉淀物。分離出來的沉淀物為金-抗HBs結(jié)合物，與吸水濾紙、硝酸纖維素和吸水纖維制作成免疫層析測試條。

1.3 觀察指標(biāo)

將免疫層析測試條插入準(zhǔn)備好的新鮮血清內(nèi)，20分鐘內(nèi)出現(xiàn)測試結(jié)果，測試條上若出現(xiàn)兩條紅色的線則說明測試結(jié)果為HBsAg陽性，若只有一條紅線則為陰性，沒有出現(xiàn)紅色線則為試劑無效，需重新配制。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)行分析，其中計(jì)數(shù)進(jìn)行X2（%）檢驗(yàn)，計(jì)量進(jìn)行t檢測（x±s）檢驗(yàn)， P<0.05提示有顯著差異。

2 結(jié)果

研究組的測試靈敏度高于對照組（P<0.05），具體見表1。

3 討論

在目前臨床醫(yī)學(xué)上檢測病毒表面抗原大多采用酶免疫法，但酶免疫法具有耗費(fèi)時間長，操作程序繁復(fù)的缺點(diǎn)[3]。為使檢測工作更簡化方便，使檢測的靈敏度更高，本文研究通過檢測血清中肝炎病毒，將膠體金標(biāo)記技術(shù)與傳統(tǒng)檢測肝炎病毒的酶免疫法作對比發(fā)現(xiàn)，膠體金標(biāo)記技術(shù)在免疫檢測中不僅操作簡單方便，縮短檢測時間，而且具有更高的靈敏度。膠體金是將還原劑例如抗壞血酸、白磷、枸櫞酸鈉等于氯酸金發(fā)生反應(yīng)，析出大小不同的金顆粒，形成帶有負(fù)電離子的膠體溶液，并通過靜電作用，形成穩(wěn)定狀態(tài)。膠體金在弱堿性液體環(huán)境中的帶有負(fù)電荷，由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合是根據(jù)近點(diǎn)作用，并不會改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)。與酶免疫法的分類法相同，簡體免疫金技術(shù)也分為固相和液相膠體金技術(shù)。最初的液相膠體金標(biāo)記技術(shù)被用作顯色劑，也被成為免疫膠體金染色法。免疫膠體金染色法由單標(biāo)記發(fā)展為用不同大小的金顆粒對物質(zhì)進(jìn)行多重標(biāo)記，使靈敏度更高。但此種免疫法有一缺點(diǎn)，需要的抗原或抗體濃度很高才能使靈敏度更高。而且液相膠體金的金顆粒并不穩(wěn)定，存放時間長后容易產(chǎn)生聚集現(xiàn)象[4]。為避免這些缺點(diǎn)，醫(yī)學(xué)專家研究出了免疫金銀染色法。免疫金銀染色法中的銀離子吸附在金顆粒周圍，將染色效果放大，就算檢測抗原或抗體被稀釋，檢測效果也和高濃度相同，如此便節(jié)省了很多膠體金。免疫金銀染色法中銀離子吸附大顆的膠體金顆粒，使大顆的金顆粒更穩(wěn)定，而小顆的金顆粒雖然吸附的銀離子少，但本身的穩(wěn)定性更高，保證了免疫檢測的靈敏度。固相免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)與液相的相同，區(qū)別僅在于膠體金顆粒的吸附物為固體支持物，而后進(jìn)行免疫檢測。在1986年，膠體金標(biāo)記技術(shù)被首次應(yīng)用在免疫學(xué)方面，并取得了一些成果，膠體金標(biāo)記技術(shù)得到了人們更多的重視。由還原法制備出的膠體金標(biāo)記不同的簇分化抗原單抗，可以檢測出血清中淋巴細(xì)胞上的簇分化的抗原，并根據(jù)淋巴細(xì)胞的不同進(jìn)行分類[5]。用膠體金免疫法檢測肝炎病毒的原理為用膠體金中的金顆粒標(biāo)記肝炎病毒抗體，與膠體金顆粒結(jié)合的金-抗肝炎病毒結(jié)合物與樣品血清中的肝炎病毒結(jié)合，隨著硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)移，形成抗HBs-HBsAg-金標(biāo)抗體的夾心物，使免疫檢測試紙中出現(xiàn)兩條紅色的線。膠體金免疫法不僅具備免疫反應(yīng)的特點(diǎn)，還具有色譜層析的的特點(diǎn)，通過吸水纖維結(jié)合抗肝炎病毒，層析作用將肝炎病毒-金標(biāo)抗體復(fù)合物與纖維素膜發(fā)生連續(xù)反應(yīng)，使免疫層析法更靈敏。而且這種方法不需要洗滌，也不需要使用儀器進(jìn)行操作，減少了試劑被污染的幾率，使操作更方便。

綜上所述，膠體金標(biāo)記技術(shù)在免疫檢測中具有準(zhǔn)確、靈敏、快速地特點(diǎn)，在臨床上診斷疾病中具有獨(dú)特、不可替代的作用，值得臨床上進(jìn)一步推廣。

參考文獻(xiàn)：

[1] 孫培培，張潔，鄭江偉，等.膠體金免疫層析試紙快速檢測甘草酸方法的建立[J].藥物分析雜志，2017（10）：1769-1775.

[2] 夏偉偉，姜國勝.膠體金免疫層析法復(fù)檢HBsAg陽性標(biāo)本的可行性分析[J].中國病原生物學(xué)雜志，2016（10）：897-899.

[3] 王夢露，王云龍，石曉衛(wèi)，等.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體膠體金定量檢測方法的建立[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2016，26（12）：25-29.

[4] 陳珍珍，趙越，王占黎，等.自制膠體金試劑盒對布魯氏菌病的診斷效果評價[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2016，43（15）：2802-2805.

[5] 周志杰，劉珠果，戴秋云.石頭魚毒素膠體金檢測試紙條的研制[J].軍事醫(yī)學(xué)，2016，40（11）：905-908.