妊娠期糖尿病患者血清Kisspeptin表達水平及其影響因素研究

王卓群，王 鵬，胡紅琳，牛 敏，章 秋

本文意義：目前Kisspeptin作為生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的研究熱點之一，在能量代謝及生殖過程中起橋梁及紐帶的作用，在中外各研究中大量報道了其與生殖及代謝的相關(guān)性，但關(guān)于其在糖尿病，特別是妊娠期糖尿病（GDM）中所發(fā)揮作用的研究目前尚不多見。本文對GDM患者Kisspeptin水平進行檢測，觀察其與代謝指標的相關(guān)性，結(jié)合多種臨床常用生化指標，可以指導臨床診斷治療。

妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）是一種嚴重危害孕婦及胎兒生長發(fā)育的代謝性疾病，多種激素參與其病情進展，由復雜的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)參與。Kisspeptin是由LEE等［1］于1996年在腫瘤轉(zhuǎn)移機制研究中發(fā)現(xiàn)的多肽類激素，又稱為人吻素-1（KISS-1），基因定位在染色體1q32-1q41，受體為G蛋白偶聯(lián)受體54（GPR54）。研究發(fā)現(xiàn)，Kisspeptin/GPR54在生殖系統(tǒng)通過參與多種代謝過程發(fā)揮作用，在受精卵著床及性腺功能發(fā)育階段有重要的作用［2］。關(guān)于Kisspeptin在GDM患者體內(nèi)表達水平及相關(guān)的影響因素研究較少。本文旨在研究Kisspeptin在GDM患者體內(nèi)表達水平、作用特點及影響因素，分析其與血糖代謝、胰島β細胞功能及胰島素抵抗指數(shù)之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入標準：（1）在妊娠24～28周期間就診于安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院產(chǎn)科門診初診，并于妊娠24～32周于安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌實驗室行75 g葡萄糖耐量試驗（oral glucose tolerance，OGTT）；（2）妊娠24～32周。排除標準：妊娠前糖耐量異常、嚴重脂代謝紊亂、妊娠期高血壓、多囊卵巢綜合征、甲狀腺疾病等內(nèi)分泌疾病及妊娠期急慢性心臟、肝腎等臟器疾病。選取2016年4—7月在安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌實驗室行75 g OGTT的孕婦120例。參照國際糖尿病與妊娠研究組（IADPSG）的GDM診斷標準［3］，即未被診斷為糖尿病的孕婦于妊娠期24～28周行75 g OGTT，若滿足以下1項則診斷為GDM：空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）≥5.1 mmol/L、1 h血糖（PG）≥10.0 mmol/L、2 hPG≥8.5 mmol/L。根據(jù)75 g OGTT結(jié)果將孕婦分為GDM組（61例）和正常糖耐量（normal glucosetolerance，NGT）組（59例）。根據(jù)體質(zhì)指數(shù)（body mass index，BMI）將GDM組和NGT組進行分組，BMI≤24 kg/m2作為GDM-A亞組（31例）和NGT-A亞組（30例），BMI＞24 kg/m2作為GDM-B亞組（30例）和NGT-B亞組（29例）。研究對象均知情同意，本研究經(jīng)安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學研究倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 觀察指標 收集受試者年齡、妊娠期體質(zhì)量、體質(zhì)量差（妊娠期體質(zhì)量與妊娠前體質(zhì)量之差）等資料。受試者行75 g OGTT，試驗前禁食8 h以上，連續(xù)3 d正常飲食，進食碳水化合物≥150 g/d，檢查前靜坐休息0.5 h以上，清晨留取空腹血標本4 ml，取全血標本2 ml，以1 000 r/min離心20 min，離心半徑為12.8 cm，留取血清1 ml，置于-80 ℃冰箱保存用于測定血清Kisspeptin水平；取全血標本2 ml，以4 200 r/min離心5 min，離心半徑為12.8 cm，留取血清1 ml，測定FBG、空腹胰島素（fasting plasma insulin，F(xiàn)INS）、空腹C肽；將75 g無水葡萄糖粉溶于300 ml水中，于5 min內(nèi)口服。以服第1口糖水時開始計時，1、2 h后分別抽取肘部靜脈血5 ml，以4 200 r/min離心5 min，離心半徑為12.8 cm，留取血清1 ml測定1 hPG、2 hPG、1 h胰島素（INS）、2 hINS、1 h C肽、2 h C肽。利用穩(wěn)態(tài)模型計算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、胰島β細胞功能指數(shù)（HOMA-β），HOMA-IR=FINS×FBG/22.5，HOMA-β=20×FINS/（FBG-3.5）［4］。

1.2.2 血清Kisspeptin水平測定 取出存放于-80 ℃冰箱中血清標本，4 ℃復融2 h，采用酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號：AK0017JUN07005）檢測血清Kisspeptin水平，嚴格按照說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以（s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，采用Bonferroni法校正P值；多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1 GDM組和NGT組一般資料比較（s）Table1 Comparison of general data between the GDM group and NGT group

表1 GDM組和NGT組一般資料比較（s）Table1 Comparison of general data between the GDM group and NGT group

注：GDM=妊娠期糖尿病，NGT=正常糖耐量

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表2 GDM組和NGT組生化指標比較（s）Table2 Comparison of biochemical indicators between the GDM group and NGT group

表2 GDM組和NGT組生化指標比較（s）Table2 Comparison of biochemical indicators between the GDM group and NGT group

注：FBG=空腹血糖，PG=血糖，F(xiàn)INS=空腹胰島素，INS=胰島素，HOMA-IR=胰島素抵抗指數(shù)，HOMA-β=胰島β細胞功能指數(shù)

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表3 NGT-A亞組和NGT-B亞組生化指標比較（s）Table3 Comparison of biochemical indicators between the NGT-A subgroup and NGT-B subgroup

表3 NGT-A亞組和NGT-B亞組生化指標比較（s）Table3 Comparison of biochemical indicators between the NGT-A subgroup and NGT-B subgroup

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表4 GDM-A亞組和GDM-B亞組生化指標比較（s）Table4 Comparison of biochemical indicators between the GDM-A subgroup and GDM-B subgroup

表4 GDM-A亞組和GDM-B亞組生化指標比較（s）Table4 Comparison of biochemical indicators between the GDM-A subgroup and GDM-B subgroup

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2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 GDM組和NGT組年齡、體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。GDM組體質(zhì)量差大于NGT組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表1）。

2.2 生化指標比較 GDM組FBG、1 hPG、2 hPG、FINS、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR均高于NGT組，HOMA-β低于NGT組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；兩組1 hINS、1 h C肽比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，見表2）。NGT-A亞組FBG、1 hPG、2 hPG、1 h C肽、2 h C肽與NGT-B亞組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；NGT-A 亞 組 FINS、1 hINS、2 hINS、 空腹C肽、HOMA-IR、HOMA-β均低于NGT-B亞組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表3）。GDM-A亞組FBG、1 hPG、2 hPG、FINS、1 hINS、2 hINS、空腹C肽、1 h C肽、2 h C肽、HOMA-β與GDM-B亞組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；GDM-A亞組HOMA-IR低于GDM-B亞組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表4）。

2.3 血清Kisspeptin水平比較 GDM組血清Kisspeptin水平為（66.5±40.9）ng/L，高于NGT組的（39.2±20.3）ng/L，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.60，P＜0.01）。NGT-A亞組、NGT-B亞組、GDM-A亞組、GDM-B亞組血清Kisspeptin水平分別為（37.4±17.9）ng/L、（41.1±22.8）ng/L、（59.1±49.0）ng/L、（72.5±29.6）ng/L，4個亞組的血清Kisspeptin水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=7.90，P＜0.01）。其中，GDM-A亞組血清Kisspeptin水平高于NGT-A亞組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；GDM-B亞組血清 Kisspeptin水平高于NGT-B亞組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.4 血清Kisspeptin水平與生化指標的相關(guān)性分析 所有受試者血清Kisspeptin水平與FBG、1 hPG、2 hPG、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR呈正相關(guān)（P＜0.05），與HOMA-β呈負相關(guān)（P＜0.05）。NGT組血清Kisspeptin水平與FBG、2 hPG呈正相關(guān)（P＜0.05，見表5）。

表5 血清Kisspeptin水平與生化指標的相關(guān)性分析（r值）Table5 Correlation analysis between serum Kisspeptin level and biochemical indicators

3 討論

GDM患者逐年增多，可導致多種不良妊娠結(jié)局，具體發(fā)病機制目前尚不明確，一般認為是多因素共同作用的結(jié)果。Kisspeptin是KISS-1基因編碼的多肽類產(chǎn)物，包含145個氨基酸，包括Kisspeptin-54、Kisspeptin-13、Kisspeptin-10等多種短肽［1］，在妊娠期Kisspeptin通過作用于下丘腦調(diào)節(jié)促性腺激素釋放激素（gonadotropin-releasing hormone，GnRH）的釋放，調(diào)節(jié)黃體生成素（luteinizing hormone，LH）和卵泡刺激素的釋放，從而調(diào)控生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)功能［2，5］。

目前關(guān)于Kisspeptin與能量代謝及生殖內(nèi)分泌相關(guān)研究已成熱門課題，但其與糖尿病特別是GDM相關(guān)性鮮有報道。本研究結(jié)果顯示，GDM組患者血清Kisspeptin水平較NGT組明顯升高。國外臨床研究顯示，Kisspeptin可作為輔助檢測GDM的良好指標，其特異度可達到90%以上［6］。研究表明，GDM患者的血清Kisspeptin水平是胎盤功能障礙和圍生期不良結(jié)局的潛在標志物［7］，因此關(guān)于妊娠期Kisspeptin水平的測定對預(yù)測GDM發(fā)生及圍生期不良結(jié)局有重要意義。研究表明，普通非糖尿病人群的血清Kisspeptin水平與2 hINS呈負相關(guān)［8］。本研究結(jié)果顯示，血清Kisspeptin水平與2 hINS水平呈正相關(guān)，考慮與妊娠期機體特異的激素水平有關(guān)。在妊娠期，血清Kisspeptin水平隨孕周的增加逐漸上升，直至妊娠后期甚至分娩，妊娠后期Kisspeptin水平可以升高到非妊娠期的數(shù)千倍以上［9］，因此Kisspeptin在妊娠期代謝調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，對GDM可能有一定的促進作用。研究顯示，Kisspeptin在妊娠晚期診斷GDM的特異度較妊娠早期高，因GDM多發(fā)生在妊娠中晚期，故Kisspeptin在妊娠早期不作為GDM的診斷指標，但在妊娠中晚期可以作為診斷GDM的敏感指標，并對病情評估起到良好的輔助作用［9］。

Kisspeptin在下丘腦、垂體、卵巢、睪丸、胰腺、小腸、肝臟等臟器均有表達，在糖尿病大鼠模型中胰高血糖素通過cAMP-PKA-CREB信號通路作用于肝臟產(chǎn)生Kisspeptin，其可作用于胰島β細胞導致胰島β細胞功能受損［10］。本研究結(jié)果顯示，血清Kisspeptin水平與FBG、1 hPG、2 hPG、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR呈正相關(guān)，與HOMA-β呈負相關(guān)，與目前已有動物實驗結(jié)果［11］相一致。GDM患者體內(nèi)Kisspeptin的表達水平與其遺傳、營養(yǎng)狀態(tài)、飲食、合并疾病等均有關(guān)系，BROWN等［11］發(fā)現(xiàn)對于高脂飲食的大鼠，其Kisspeptin-1 mRNA表達明顯提高，血糖水平上升。成年女性網(wǎng)膜脂肪Kisspeptin-1 mRNA表達與BMI呈正相關(guān)，而在皮下脂肪的表達則無相關(guān)性［12］。故Kisspeptin水平一定程度上受到BMI的影響。動物實驗表明，營養(yǎng)狀態(tài)及進食可影響Kisspeptin-1 mRNA及Kisspeptin的表達水平，在大鼠誘導糖尿病模型中，血糖水平及體質(zhì)量下降同時，Kisspeptin水平下降，下丘腦Kisspeptin-1 mRNA表達亦下降［13］。

綜上所述，Kisspeptin在GDM患者的代謝途徑發(fā)揮重要作用，有可能成為檢測GDM的良好輔助指標。本研究的局限為樣本量不足，僅對妊娠中晚期孕婦Kisspeptin水平與GDM相關(guān)性進行研究，在整個妊娠過程對能量代謝的影響尚不明確，且其對能量代謝具體影響機制及可能導致的妊娠結(jié)局還未完全明確，有待進一步收集數(shù)據(jù)進行補充研究。

作者貢獻：王卓群、胡紅琳進行文章的構(gòu)思與設(shè)計；王卓群、王鵬、胡紅琳、牛敏、章秋進行研究的實施與可行性分析；王卓群、王鵬進行數(shù)據(jù)收集與整理；王卓群進行統(tǒng)計學處理，撰寫論文；王卓群、王鵬、胡紅琳進行結(jié)果的分析與解釋；胡紅琳進行論文的修訂，對文章整體負責，監(jiān)督管理；王鵬、胡紅琳、牛敏、章秋負責文章的質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。