反相高效液相色譜法測(cè)定“K粉”檢材法及其應(yīng)用

龔 冶，黃泓杰，黃敘金，代 勇

（四川警察學(xué)院 四川瀘州 646000）

“K粉”是通過(guò)化學(xué)合成的新型毒品，是氯胺酮的俗稱。氯胺酮是苯環(huán)己哌啶(FCP)的衍生物，為白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭。在水中易溶，在熱乙醇中溶解，在乙醚或苯中不溶[1]。氯胺酮屬N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體拮抗劑，是一種非巴比妥類麻醉劑，作用于人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，會(huì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)造成損傷，吸毒者存在幻覺(jué)、躁動(dòng)不安、惡夢(mèng)及譫語(yǔ)等精神癥狀，起初作為冰毒和“搖頭丸”“伴侶”用品，用以緩和前者的“沖勁”和延長(zhǎng)作用時(shí)間，增強(qiáng)使用效果。其有導(dǎo)致中樞興奮、迷幻的作用和后果，因此成為許多人，尤其是年輕人增加精力、追求新奇、尋找刺激的手段，目前已成為吸食新型毒品的主流[2]。因此，本研究探索的是一種準(zhǔn)確、快速測(cè)定“K粉”純度方法及其在司法實(shí)踐中應(yīng)用。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑

高效液相色譜儀1200系列（安捷倫公司）：G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1311A四元泵；G1315D二極管陣列檢測(cè)器；XBridgeTMC18色譜柱，4.6×250mm，5μm；分析天平（Sartorius GPA224S）；超聲儀（KH3200E型）；PH計(jì)（雷磁PHS-25型）；移液槍（德國(guó)Eppendorf公司）。

鹽酸氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)品（為甲醇液，濃度為1.00mg.mL-1）由瀘州市公安局提供。甲醇、乙腈均為色譜純，乙酸銨等其余試劑均為分析純，水為純化水。

（二）色譜條件

色譜柱為XBridgeTMC18，流動(dòng)相為乙腈：0.03mol.L-1乙酸銨溶液（70：30，v/v），用磷酸調(diào)PH至3.0，流速0.8ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量5μL。

（三）溶液制備

1.對(duì)照品溶液制備精密量取1ml鹽酸氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)母液（1.00mg.mL-1），置于5ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到鹽酸氯胺酮儲(chǔ)備液，置4℃冰箱中保存。

2.供試品溶液制備精密稱取適量“K粉”，用甲醇溶解并稀釋制成每1ml含1mg“K粉”的溶液，搖勻，即得。

二、實(shí)驗(yàn)與結(jié)果

（一）系統(tǒng)適用性

在前文所述色譜條件下檢測(cè)，鹽酸氯胺酮的保留時(shí)間為6.34min，分離度為8.2，大于1.5，達(dá)到基線分離。鹽酸氯胺酮的理論塔板數(shù)大于10000。空白樣品（甲醇）和鹽酸氯胺酮的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 空白樣品和鹽酸氯胺酮的色譜圖

（二）線性關(guān)系和檢測(cè)限

取鹽酸氯胺酮母液和標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，配制成質(zhì)量濃度分別為0.04mg.mL-1、0.10mg.mL-1、0.20mg.mL-1、0.60mg.mL-1、0.80mg.mL-1的系列鹽酸氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)液，分別取不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液10μL進(jìn)樣，記錄相應(yīng)的峰面積，并對(duì)色譜峰面積作縱坐標(biāo)Y，質(zhì)量濃度X作橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸（見(jiàn)圖2），得鹽酸氯胺酮的回歸方程為：Y=9908X+42.62，R2=1，線性范圍為0.04～0.80mg.mL-1。

圖2 鹽酸氯胺酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線

以色譜峰高為噪聲高3倍（S/N≥3）相對(duì)應(yīng)的濃度為檢出限，鹽酸氯胺酮的檢出限為0.005mg.mL-1。

（三）精密度試驗(yàn)

分別取鹽酸氯胺酮母液和標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成0.8、0.38、0.04 mg.mL-1的鹽酸氯胺酮，每種濃度樣品各制備5份，在1d內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣5次和連續(xù)進(jìn)樣3d；計(jì)算鹽酸氯胺酮的日內(nèi)精密度RSD為1.88%，1.95%，1.81%，日間精密度RSD為2.61%，2.47%，2.53%。

（四）回收率試驗(yàn)

精確稱取“K粉”0.01g，置于25mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。準(zhǔn)確測(cè)定其含量后取9份各0.5mL，分別置于10mL容量瓶中，平均分為3組，每組各加入0.4mg.mL-1鹽酸氯胺酮對(duì)照品溶液0.4、0.5、0.6mL（相當(dāng)于測(cè)定值的80%、100%和120%），用溶劑定容后測(cè)定，計(jì)算回收率。低、中、高濃度水平的回收率（n=3）分別為99.3%、101.1%和99.7%，RSD分別為1.17%、1.42%和1.29%。

三、討論

（一）流動(dòng)相的優(yōu)化

查閱相關(guān)文獻(xiàn)[3-4]，對(duì)甲醇與水的多種比例、庚烷磺酸鈉與乙腈、乙腈與磷酸鹽緩沖液、乙腈/甲醇與乙酸銨等，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇與水的流動(dòng)相體系分析時(shí)間較長(zhǎng)且有干擾峰；庚烷磺酸鈉是離子對(duì)試劑，對(duì)色譜柱傷害較大，對(duì)于十八烷基硅膠鍵合的色譜柱來(lái)說(shuō)，離子對(duì)試劑會(huì)影響色譜柱鍵合，從而達(dá)到分析樣品的作用，但離子對(duì)試劑很難從色譜柱上沖洗干凈，對(duì)色譜柱造成不可逆的傷害，大大縮短色譜柱的使用壽命；用乙腈與磷酸鹽緩沖液對(duì)多種流動(dòng)相進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)峰形不好，拖尾嚴(yán)重。最后選擇乙腈與乙酸銨（70：30）作為流動(dòng)相，氯胺酮的分離度、峰型都較好。

（二）檢測(cè)波長(zhǎng)的篩選

對(duì)氯胺酮進(jìn)行DAD全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)其在276nm、269nm、264nm、220nm、215nm處均有吸收峰，比較其各個(gè)吸收值發(fā)現(xiàn)，276nm、269nm、264nm的吸收值較低，當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm和215nm時(shí)，氯胺酮的檢測(cè)靈敏度顯著提高，但215nm更接近末端吸收，為了降低溶劑末端吸收對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾，故最終選擇220nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

四、實(shí)際應(yīng)用

2018年某月，某公安局送檢一批收繳的可疑粉末，要求做“K粉”的定性與定量測(cè)定。準(zhǔn)確稱取該粉末0.0102g于25mL容量瓶，用甲醇定容至刻度線并混勻，按“1.2項(xiàng)下”進(jìn)樣，結(jié)果檢出氯胺酮，氯胺酮的含量為82.80%。