通絡(luò)寧心湯防治吡柔比星致大鼠心臟毒性的保護(hù)作用及機(jī)制探討

孔嘉欣　李濤　馮肖卿　蘇旭春　程玲　鄧粵敏

【摘要】 目的：探討通絡(luò)寧心湯防治蒽環(huán)類藥物心臟毒性的效果及機(jī)制。方法：將36只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為治療組、對照組和空白組，每組12只。三組均每周給予2 mg/kg吡柔比星靜脈注射給藥，連續(xù)給藥3周。在吡柔比星給藥的同時，治療組每天給予6 mL的通絡(luò)寧心湯胃內(nèi)灌注，對照組大鼠每天腹腔注射200 mg/（kg·d）磷酸肌酸鈉，空白組每天胃內(nèi)灌注6 mL的0.9%氯化鈉溶液。三組均在吡柔比星給藥開始第4周處死。對三組凝血功能指標(biāo)水平、血清肌鈣蛋白（cTnT）、N末端B型鈉尿肽前體（NT-proBNP）、一氧化氮（NO）、丙二醇（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）活性等氧化應(yīng)激指標(biāo)水平、血漿GMP-140水平進(jìn)行檢測比較。并通過Pearson線性相關(guān)法分析治療組血清cTnT、NT-proBNP水平與凝血功能指標(biāo)水平、氧化應(yīng)激指標(biāo)水平以及血漿GMP-140水平的關(guān)系。結(jié)果：與空白組比較，治療組血清SOD水平、纖維蛋白原水平、血漿抗凝血酶Ⅲ活性測定（AT-ⅢA）水平均升高，凝血酶時間（TT）縮短，而血清cTnT、NT-proBNP水平、血清NO和MDA水平以及血漿GMP-140水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與空白組比較，對照組血清SOD水平、纖維蛋白原水平、血漿AT-ⅢA水平均升高，凝血酶原時間（PT）和活化部分凝血活酶時間測定（APTT）均延長，而血清cTnT、NT-proBNP水平、國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（PT-INR）、血清NO和MDA水平以及血漿GMP-140水平則均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與對照組比較，治療組血清SOD水平、纖維蛋白原水平、血漿AT-ⅢA水平均升高，PT縮短，TT延長，而血清cTnT、NT-proBNP水平、PT-INR、血清NO和MDA水平以及血漿GMP-140水平則均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Pearson線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，治療組血清cTnT、NT-proBNP水平與其PT、PT-INR、血清NO和MDA水平以及血漿GMP-140水平均呈正相關(guān)（P<0.05），與其TT、血清SOD水平、纖維蛋白原水平、血漿AT-ⅢA水平則均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：通絡(luò)寧心湯可有效防治蒽環(huán)類藥物心臟毒性，其機(jī)制可能為通過減少氧自由基的產(chǎn)生和改善血流狀態(tài)而達(dá)到蒽環(huán)類藥物心臟毒性防治效果。

【關(guān)鍵詞】 通絡(luò)寧心湯； 防治； 蒽環(huán)類藥物； 心臟毒性

Protective Effect and Mechanism of Tongluo Ningxin Decoction on Cardiac Toxicity in Rats Induced by Piropiride/KONG Jiaxin，LI Tao，F(xiàn)ENG Xiaoqing，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（26）：00-005

【Abstract】 Objective：To explore the effect and mechanism of Tongluo Ningxin Decoction on the prevention and treatment of anthracycline induced cardiac toxicity.Method：36 rats were randomly divided into treatment group，control group and blank group，follow the random number table method，12 rats in each group.The three groups were all given 2 mg/kg pirarubicin intravenously every week for 3 weeks.At the same time，the treatment group was given Tongluo Ningxin Decoction 6 mL/d，the control group was injected with 200 mg/（kg·d）Phosphocreatine Sodium in the abdominal cavity every day，and the blank group was injected with 0.9% Sodium Chloride Solution of 6 mL in the stomach every day.The three groups were killed fourth weeks after the initiation of pirarubicin administration.The coagulation function indexes level，serum cTnT，NT-proBNP，nitric oxide（NO），propanediol（MDA） and superoxide dismutase（SOD） activity level and plasma GMP-140 level of three groups were measured and compared.The relationship between serum cTnT，NT-proBNP level of treatment group with the coagulation function level，the oxidative stress level and the plasma GMP-140 level were analyzed by Pearson linear correlation method.Result：Compared with those of the blank group，the serum SOD level，fibrinogen level，plasma antithrombin Ⅲ activity assay（AT-ⅢA） level of the treatment group increased，thrombin time（TT） of the treatment group decreased，and serum cTnT，NT-proBNP level，serum NO and MDA level and plasma GMP-140 level of the treatment group decreased，the differences were statistically significant（P<0.05）.Compared with those of the blank group，the serum SOD level，fibrinogen levels，plasma AT-ⅢA level of the control group increased， prothrombin time（PT） and activated partial thromboplastin time（APTT） of the control group were prolonged，while serum cTnT，NT-proBNP，PT-INR，serum NO and MDA level and plasma GMP-140 level of the control group were decreased，the differences were statistically significant（P<0.05）.Compared with those of the control group，the serum SOD level，fibrinogen level and plasma AT-ⅢA level in the treatment group increased，PT in the treatment group shortened，and TT in the treatment group prolonged，while the serum cTnT，NT-proBNP level，PT-INR，serum NO and MDA level and plasma GMP-140 level in the treatment group decreased，the differences were statistically significant（P<0.05）.Pearson linear correlation analysis showed that serum cTnT，NT-proBNP level in the treatment group were positively correlated with the PT level，PT-INR，serum NO and MDA level of plasma GMP-140 level（P<0.05），while were negatively correlated with TT，serum SOD level，fibrinogen level and plasma AT-ⅢA level（P<0.05）.Conclusion：Tongluo Ningxin Decoction can effectively prevent and control the cardiac toxicity of anthracycline.The mechanism may be by reducing the production of oxygen free radicals and improving the blood flow to prevent and control the cardiac toxicity of anthracycline.

【Key words】 Tongluo Ningxin Decoction； Prevention and treatment； Anthracycline drugs； Cardiotoxicity

First-authors address：Tumor Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510095，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.26.001

阿霉素、表阿霉素、吡喃阿霉素等均是常用蒽環(huán)類抗腫瘤藥物，其抗腫瘤作用效果已得到多項(xiàng)研究的認(rèn)可[1-2]。然而蒽環(huán)類抗腫瘤藥物在臨床應(yīng)用中副作用較大，其中心臟毒性是其臨床常見不良反應(yīng)，可導(dǎo)致心衰、心律失常等，嚴(yán)重者甚至導(dǎo)致死亡等不良預(yù)后的發(fā)生[3-4]。因此，對蒽環(huán)類抗腫瘤藥物心臟毒性的防治十分重要。近年來中醫(yī)藥在心臟疾病防治中的應(yīng)用較多[5]。本研究亦采用自制通絡(luò)寧心湯進(jìn)行蒽環(huán)類抗腫瘤藥物的心臟毒性防治，觀察了其對實(shí)驗(yàn)大鼠心功能指標(biāo)、血流狀況、氧化應(yīng)激狀況等的影響，旨在為蒽環(huán)類抗腫瘤藥物心臟毒性防治提供方案依據(jù)，具體研究方法以及結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 動物來源和飼養(yǎng) 36只大鼠裸鼠均購自廣東省動物實(shí)驗(yàn)中心，單籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境為22～25 ℃溫度，50%～75%空氣濕度，自由飲食，正常晝夜節(jié)律，每周更換清洗飼養(yǎng)墊等飼養(yǎng)物品，保持飼養(yǎng)環(huán)境的清潔干燥。所有大鼠均在購買后經(jīng)至少1周適應(yīng)性飼養(yǎng)再進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。研究符合倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)本院倫理學(xué)委員會審核批準(zhǔn)。將36只大鼠隨機(jī)均分為治療組、對照組和空白組，每組12只。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑 標(biāo)準(zhǔn)大鼠顆粒飼料（貴陽醫(yī)學(xué)院提供實(shí)驗(yàn)動物中心），大鼠喂養(yǎng)純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司），注射用吡柔比星（深圳萬樂藥業(yè)有限公司），通絡(luò)寧心湯藥材（北京同仁堂藥業(yè)股份有限公司），0.9%氯化鈉溶液（西安悅來醫(yī)藥科技有限公司），磷酸肌酸鈉（?？谄媪χ扑幑煞萦邢薰荆?，SF-8000全自動凝血測試儀血凝儀（江西亞力特科技發(fā)展有限公司），德國歐寶xl-600全自動生化分析儀（北京瑞博泰克生物科技有限公司），902-ULTS超低溫冰箱[美國Thermo（賽默飛）公司]，血清和血漿指標(biāo)檢測試劑盒（南京建成生物科技有限公司；bioswamp）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 36只大鼠的飼養(yǎng)籠子均貼標(biāo)簽并進(jìn)行排序編號，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為治療組、對照組和空白組，每組12只。三組均每周給予2 mg/kg吡柔比星尾靜脈注射給藥，連續(xù)給藥

3周。在吡柔比星給藥的同時，治療組每天給予通絡(luò)寧心湯6 mL（藥方：黃芪50 g、太子參15 g、麥冬15 g、五味子10 g、炙甘草10 g、白術(shù)10 g、丹參30 g、赤芍12 g、郁金12 g、葛根30 g、遠(yuǎn)志

10 g、瓜蔞15 g，常規(guī)加水煎制過濾，制成100 mL湯藥）胃內(nèi)灌注，對照組大鼠每天腹腔注射磷酸肌酸鈉200 mg/（kg·d），空白組每天胃內(nèi)灌注6 mL的0.9%氯化鈉注射液。三組均在吡柔比星給藥開始第4周處死。

1.4 觀察指標(biāo) 三組大鼠處死后進(jìn)行腹主動脈取血，根據(jù)血凝儀檢測說明書進(jìn)行凝血功能指標(biāo)測定，具體檢測操作由同一個相關(guān)經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)科醫(yī)師進(jìn)行。三組均取血5 mL放置在肝素抗凝管中，3 500 r/min，

3 cm半徑離心處理30 min，待分層后分離血清和血漿均放置在-80 ℃低溫冰箱中冷藏待測。血清肌鈣蛋白（cTnT）、N末端B型鈉尿肽前體（NT-proBNP）、一氧化氮（NO）、丙二醇（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）活性等氧化應(yīng)激指標(biāo)水平、血漿GMP-140水平等檢測均采用全自動生化分析儀，具體檢測操作嚴(yán)格按照儀器以及試劑盒說明書進(jìn)行，由同一相關(guān)獨(dú)立檢測經(jīng)驗(yàn)3年以上者進(jìn)行檢測操作和記錄。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件并進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用

t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，多組計量資料比較采用方差分析，并采用q檢驗(yàn)對差異有統(tǒng)計學(xué)意義者進(jìn)行進(jìn)一步分析，采用Pearson線性相關(guān)法分析治療組血清cTnT、NT-proBNP水平與凝血功能指標(biāo)水平、氧化應(yīng)激指標(biāo)水平以及血漿GMP-140水平的關(guān)系，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較 三組大鼠一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 三組凝血功能、心功能、氧化應(yīng)激指標(biāo)水平以及血漿GMP-140水平比較 與空白組比較，治療組血清SOD水平、纖維蛋白原水平、血漿抗凝血酶Ⅲ活性（AT-ⅢA）水平均升高，凝血酶時間（TT）縮短，而血清cTnT、NT-proBNP水平、血清NO和MDA水平以及血漿GMP-140水平則均降低（P<0.05）；與空白組比較，對照組血清SOD水平、纖維蛋白原水平、血漿AT-ⅢA水平均升高，PT和活化部分凝血活酶時間（APTT）均延長，而血清cTnT、NT-proBNP水平、PT-INR、血清NO和MDA水平以及血漿GMP-140水平則均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與對照組比較，治療組血清SOD水平、纖維蛋白原水平、血漿AT-ⅢA水平均升高，PT縮短，TT延長，而血清cTnT、NT-proBNP水平、PT-INR、血清NO和MDA水平以及血漿GMP-140水平則均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3 治療組心功能指標(biāo)與其凝血功能、氧化應(yīng)激指標(biāo)水平以及血漿GMP-140水平的關(guān)系分析 Pearson線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，治療組血清cTnT、NT-proBNP水平與其PT、PT-INR、血清NO和MDA水平以及血漿GMP-140水平均呈正相關(guān)（cTnT：r=0.715、0.782、0.773、0.796、0.845，P<0.05；NT-proBNP：r=0.833、0.872、0.886、0.815、0.897，P<0.05），與其TT、血清SOD水平、纖維蛋白原水平、血漿AT-ⅢA水平則均呈負(fù)相關(guān)（cTnT：r=-0.843、-0.839、-0.811、-0.874，P<0.05；NT-proBNP：r=0.822、-0.818、-0.875、-0.892，P<0.05）。

3 討論

近年來肥胖、飲食、生活節(jié)律等方面異常逐漸增加，各類腫瘤疾病的發(fā)病率亦呈現(xiàn)不斷升高的趨勢。對腫瘤疾病進(jìn)行及時有效的治療已是目前迫切需要解決的問題。在腫瘤疾病治療中，蒽環(huán)類抗腫瘤藥物的應(yīng)用效果良好[6]。蒽環(huán)類抗腫瘤藥物的抗腫瘤效果強(qiáng)但不良反應(yīng)較多，其中心臟毒性為其最為常見不良反應(yīng)之一，可分為急性、慢性和遲發(fā)性心臟毒性[7-8]。無論是哪種類型的心臟毒性，最終均可導(dǎo)致嚴(yán)重心臟疾病、心衰乃至死亡等的發(fā)生，嚴(yán)重影響患者預(yù)后[9]。因此，對蒽環(huán)類抗腫瘤藥物的心臟毒性進(jìn)行防治亦是其臨床應(yīng)用的重要環(huán)節(jié)之一。本研究亦關(guān)注了蒽環(huán)類抗腫瘤藥物對實(shí)驗(yàn)大鼠心臟功能的影響，研究結(jié)果顯示，經(jīng)蒽環(huán)類抗腫瘤藥物吡柔比星干預(yù)，實(shí)驗(yàn)大鼠血清cTnT、NT-proBNP水平均較高，提示大鼠心臟功能受損明顯，蒽環(huán)類抗腫瘤藥物心臟毒性較大，急需進(jìn)行有效防治。

近年來中醫(yī)藥技術(shù)不斷發(fā)展，其在心臟疾病中的應(yīng)用亦得到多項(xiàng)研究的認(rèn)可[10-11]。本研究亦關(guān)注了中藥在蒽環(huán)類抗腫瘤藥物心臟毒性防治中的應(yīng)用效果，研究結(jié)果顯示，相對于采用普通生理鹽水干預(yù)，通絡(luò)寧心湯和磷酸肌酸鈉干預(yù)均可更有效地降低實(shí)驗(yàn)大鼠血清cTnT、NT-proBNP水平，改善心功能，其中通絡(luò)寧心湯的臨床應(yīng)用效果更佳，這與申興勇等[12]研究認(rèn)可中藥可有效緩解抗腫瘤藥物心臟毒性和保護(hù)心功能的結(jié)論一致。因此，通絡(luò)寧心湯可能作為蒽環(huán)類抗腫瘤藥物心臟毒性防治有效藥物。

多數(shù)研究均認(rèn)可自由基的大量生成是蒽環(huán)類抗腫瘤藥物引發(fā)心肌損傷和心臟毒性的重要原因[13-15]。本研究亦關(guān)注了蒽環(huán)類抗腫瘤藥物對實(shí)驗(yàn)大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響，本研究結(jié)果顯示，蒽環(huán)類抗腫瘤藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)大鼠血清NO和MDA水平較高而血清SOD水平較低，提示氧化應(yīng)激可能為蒽環(huán)類抗腫瘤藥物干預(yù)的重要反應(yīng)之一，而通絡(luò)寧心湯可有效降低血清NO和MDA水平而提高血清SOD水平，改善氧化應(yīng)激狀況，本研究通絡(luò)寧心湯干預(yù)大鼠中心功能狀況良好大鼠的血清NO和MDA水平較低而血清SOD水平較高，提示其心功能指標(biāo)可能與氧化應(yīng)激狀況相關(guān)，進(jìn)一步的Pearson線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，通絡(luò)寧心湯干預(yù)大鼠心功能指標(biāo)血清cTnT、NT-proBNP水平與其血清NO和MDA水平均呈正相關(guān)，與其血清SOD水平則呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了大鼠心功能與氧化應(yīng)激相關(guān)的假設(shè)，而對氧化應(yīng)激進(jìn)行調(diào)控可能為通絡(luò)寧心湯防治蒽環(huán)類抗腫瘤藥物心臟毒性的重要原因。

心臟疾病和心功能異常常伴有血流水平的異常[16]。本研究亦關(guān)注了蒽環(huán)類抗腫瘤藥物干預(yù)大鼠的血液循環(huán)相關(guān)指標(biāo)水平，研究結(jié)果顯示，蒽環(huán)類抗腫瘤藥物干預(yù)大鼠的血漿GMP-140水平較高，而高水平的血漿GMP-140水平提示其血小板活化和血栓形成風(fēng)險較大[17-18]，而其余各凝血功能指標(biāo)均可出現(xiàn)一定程度的異常，進(jìn)一步證實(shí)了蒽環(huán)類抗腫瘤藥物干預(yù)可引發(fā)心臟血流改變，而通過通絡(luò)寧心湯干預(yù)，血漿GMP-140水平降低，各項(xiàng)凝血功能指標(biāo)相應(yīng)改善，而Pearson線性相關(guān)結(jié)果亦證實(shí)了其心臟功能與血漿GMP-140水平以及其他凝血功能指標(biāo)均密切相關(guān)，提示抑制血小板活化和改善血流狀況可能為通絡(luò)寧心湯防治蒽環(huán)類抗腫瘤藥物心臟毒性的機(jī)制之一。

綜上所述，通絡(luò)寧心湯可能通過減少自由基生成，改善氧化應(yīng)激狀態(tài)和血流狀態(tài)而有效防治蒽環(huán)類藥物心臟毒性，可作為蒽環(huán)類藥物心臟毒性防治有效方案。

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（收稿日期：2018-06-01） （本文編輯：張爽）