養(yǎng)陰通里方劑預(yù)防術(shù)后粘連性腸梗阻藥效學(xué)研究

鄒麗園，楊振，倪賽宏，傅水蓮，付萌，何麗明，劉玉梅※，洪鐵※

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，長春 130000；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，長春 130000；3.吉林大學(xué)藥學(xué)院，長春 130000）

術(shù)后粘連性腸梗阻是臨床非常常見的一種術(shù)后并發(fā)癥，是指因腹部或非腹部手術(shù)而引起的術(shù)后胃腸動(dòng)力障礙性疾病，發(fā)病率較高。因此，臨床急需研制一種能預(yù)防術(shù)后粘連性腸梗阻的藥物[1～3]。我國于20世紀(jì) 70年代起應(yīng)用葉舜賓教授研制的養(yǎng)陰通里方劑，大量臨床實(shí)踐證實(shí)，其對(duì)預(yù)防術(shù)后粘連性腸梗阻具有顯著療效。該方由大黃、萊菔子、赤芍、木香等4味中藥構(gòu)成，有破阻化瘀、消積、止痛的功效[4]。本研究采用擦拭法構(gòu)建大鼠粘連性腸梗阻模型及小鼠離體腸管培養(yǎng)，探討其作用機(jī)制。

1 動(dòng)物、材料及儀器

1.1 動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠69只，體重180g～220g，昆明小鼠20只，18g～20g，購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001。

1.2 材料與儀器

養(yǎng)陰通里藥液、硫酸阿托品注射液（上海浦津林州制藥有限公司）；BL-420E+生物技能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；肌張力換能器（JH-2，50g，北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所）；超級(jí)恒溫器（SHC-501，上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司）；平滑肌槽（ML110，ADInstruments公司）；全自動(dòng)血流變快測(cè)儀（FASCO-3010，重慶大學(xué)維多生物工程研究所）。

2 方法

2.1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

2.1.1 實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)分為正常組（Normal group，N）、假手術(shù)組（Sham operated group，SO）、模型組（Model group，M）、養(yǎng)陰通里高劑量組（Yangyintongli high does group，YHD）、養(yǎng)陰通里中劑量組（Yangyintongli medium does group，YMD）、養(yǎng)陰通里低劑量組（Yangyintongli low does group，YLD）、莫沙必利組（Mosapride group，MO）、地塞米松組（Dexamethasone group，D）。養(yǎng)陰通里各劑量組每組9只大鼠，其余各組每組8只。養(yǎng)陰通里高、中、低劑量組給藥劑量分別為 3.150 0g/kg、1.575 0g/kg、0.787 5g/kg（按成人處方日用量 17.500 0g/70kg計(jì)算），莫沙必利組1.35mg/kg，地塞米松組10mg/kg。各組大鼠每日灌胃給藥1次，于造模前連續(xù)給藥5d，造模后給藥2d。

2.1.2 造模 根據(jù)文獻(xiàn)[5]報(bào)道方法造模。大鼠術(shù)前禁食不禁水18h，除正常組外，其余各組大鼠均以10%水合氯醛（0.3mL/100g）腹腔注射麻醉，腹部備皮后碘伏消毒鋪巾。于下腹部正中線做一個(gè)長約3cm的切口，取出全部小腸外置于濕紗布上，用濕棉球由小腸末端自下而上反復(fù)擦拭腸管6次。然后將全部腸管放回，關(guān)腹。其中假手術(shù)組只打開腹腔，立即縫合關(guān)閉。全部大鼠于造模48h后行腹部立位X線檢查。

2.1.3 對(duì)胃腸動(dòng)力的影響 上述各組大鼠于造模后末次給藥2h后，灌胃給予0.04%酚紅溶液（含10%明膠）2mL，15min后，腹腔注射水合氯醛麻醉，開腹觀察腸管形態(tài)并對(duì)小腸粘連程度進(jìn)行評(píng)級(jí)。取出胃和小腸（幽門至回盲部），小腸平鋪于濕滑平面上，測(cè)量小腸全長及酚紅在小腸的推進(jìn)距離。將胃沿胃大彎剪開，于5%NaOH中充分洗凈，取5mL，3 000r/min離心10min，取上清液，于560nm測(cè)其吸光度值OD；另取2只正常大鼠，給予酚紅后立即處死，按照上述方法測(cè)其吸光度值，其均值作為胃排空速度的標(biāo)準(zhǔn)。胃排空率=（1-實(shí)驗(yàn)組OD/標(biāo)準(zhǔn)組OD）100%。

2.1.4 全血及血漿粘度 各組大鼠行腹主動(dòng)脈取血，取3.6mL全血置于含0.4mL肝素的真空管中，測(cè)定全血粘度，3 000r/min離心10min，取上層血漿測(cè)定血漿粘度。

2.1.5 腸管形態(tài)及粘連程度結(jié)果 觀察各組大鼠腸管形態(tài)，并參考Nair[6]制定的5級(jí)分類法進(jìn)行粘連程度分級(jí)，統(tǒng)計(jì)每組各級(jí)粘連程度大鼠數(shù)量。0級(jí)：完全無粘連；Ⅰ級(jí)：內(nèi)臟間或內(nèi)臟與腹壁間 1條粘連帶；Ⅱ級(jí)：內(nèi)臟間或內(nèi)臟與腹壁間二條粘連帶；Ⅲ級(jí)：多于2條粘連帶，而內(nèi)臟未直接粘連到腹壁；Ⅳ級(jí)：內(nèi)臟直接粘連到腹壁，而不管粘連多少。

2.2 體外實(shí)驗(yàn)

2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 考查不同濃度養(yǎng)陰通里藥液對(duì)離體腸管收縮能力的影響，實(shí)驗(yàn)分為臺(tái)氏液對(duì)照組、養(yǎng)陰通里高劑量組（1mg/mL）、養(yǎng)陰通里中劑量組（0.50mg/mL）、養(yǎng)陰通里低劑量組（0.25mg/mL）；考查不同濃度養(yǎng)陰通里藥液對(duì)阿托品抑制作用的影響，實(shí)驗(yàn)分為臺(tái)氏液對(duì)照組、阿托品組（A）（0.10mg/mL）、阿托品+養(yǎng)陰通里高劑量組（A+YHD）、阿托品+養(yǎng)陰通里中劑量組（A+YMD）、阿托品+養(yǎng)陰通里低劑量組（A+YLD）。

2.2.2 不同濃度養(yǎng)陰通里藥液對(duì)離體腸管收縮能力的影響 取小鼠幽門以下1cm～5cm處腸管，用臺(tái)氏液將內(nèi)容物沖洗干凈，剪成1cm～2cm數(shù)段，腸段上端接肌張力換能器，下端固定在金屬鉤上置于裝滿臺(tái)氏液的恒溫平滑肌浴槽內(nèi)，并通入 O2+CO2混合氧氣（95∶5），待腸管自發(fā)收縮活動(dòng)平穩(wěn)后，記錄腸管正常舒縮曲線，然后向浴槽中滴加0.25mL養(yǎng)陰通里各濃度藥液或臺(tái)氏液，繼續(xù)描記舒縮曲線。

2.2.3 不同濃度養(yǎng)陰通里藥液對(duì)阿托品抑制作用的影響 離體腸管平滑肌穩(wěn)定后，先向浴槽內(nèi)加入阿托品，描記舒縮曲線5min，然后用臺(tái)氏液沖洗3遍，待腸管收縮穩(wěn)定后先加入阿托品，待其作用明顯時(shí)再分別加入上述養(yǎng)陰通里各濃度藥液，繼續(xù)記錄腸管舒縮曲線。

計(jì)算給藥前后1min內(nèi)腸管收縮幅度、頻率及運(yùn)動(dòng)指數(shù)差值的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。腸的運(yùn)動(dòng)指數(shù)=腸的收縮頻率 收縮幅度。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果與分析

3.1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

3.1.1 腹部立位X線檢查結(jié)果 X線檢查結(jié)果顯示，正常組與假手術(shù)組大鼠腹腔未見異常；模型組大鼠出現(xiàn)明顯腸梗阻征象，腸管有大量積氣、積液，可見氣液平面；養(yǎng)陰通里各給藥組大鼠積氣、積液明顯減少，高劑量效果為最好，中劑量組次之；陽性藥莫沙必利與地塞米松組積氣、積液在一定程度上減少，但治療效果次于養(yǎng)陰通里給藥組。見圖1。

3.1.2 對(duì)各組大鼠胃腸動(dòng)力的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組胃排空率與小腸推進(jìn)率明顯降低（P＜0.01，P＜0.01）；與模型組相比，養(yǎng)陰通里高劑量組胃排空率與小腸推進(jìn)率顯著提高（P＜0.01，P＜0.01）；中劑量組胃排空率與小腸推進(jìn)率明顯提高（P＜0.05，P＜0.05）；低劑量組胃排空率明顯提高（P＜0.05），但對(duì)于小腸推進(jìn)率并無影響。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠胃排空率及小腸推進(jìn)率Table 1 The gastric emptying rate and small intestinal propulsive rate of rats in each group (%)

3.1.3 對(duì)各組大鼠血粘度的影響 各組大鼠全血及 血漿粘度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠全血及血漿粘度Table 2 Whole blood and plasma viscosity of rats in each group (mpas)

3.1.4 各組大鼠小腸粘連程度 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，假手術(shù)組并未形成腸梗阻；模型組大鼠小腸粘連程度較重，大部分處于Ⅲ級(jí)粘連程度，小部分處于Ⅳ級(jí)粘連程度；養(yǎng)陰通里各給藥組與模型組相比，粘連程度明顯降低，大部分處于Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)粘連程度，小部分處于Ⅲ級(jí)粘連程度。各級(jí)粘連程度示意圖見圖2，各組大鼠粘連程度統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。

圖2 各級(jí)粘連程度示意圖Fig.2 Schematic view of the degree of adhesion levels

表3 各組大鼠粘連程度統(tǒng)計(jì)表Table 3 Statistics of adhesion degree of rats in each group (a)

3.2 體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1mg/mL、0.5mg/mL的養(yǎng)陰通里給藥組能明顯增加體外腸管的收縮幅度，并降低振動(dòng)頻率，且能夠逆轉(zhuǎn)阿托品對(duì)腸道蠕動(dòng)的抑制作用。見圖3、圖4。

圖3 不同濃度養(yǎng)陰通里藥液對(duì)小鼠離體腸管收縮能力的影響Fig.3 Effects of different concentrations of Yangyintongli liquid on contractility of isolated intestine in mice

圖4 不同濃度養(yǎng)陰通里藥液對(duì)阿托品抑制作用的影響Fig.4 Effects of different concentrations of YangyinTongli liquid on atropine inhibition

4 討論

術(shù)后腸梗阻是一種因手術(shù)造成的一種胃腸功能障礙性并發(fā)癥，主要表現(xiàn)為術(shù)后腹痛、腹脹、肛門不排氣、不能進(jìn)食、甚至惡心嘔吐等癥狀。它不能單純地等同于機(jī)械性腸梗阻或術(shù)后麻痹性腸梗阻，而是指術(shù)后胃腸道所經(jīng)歷的一個(gè)功能障礙階段[7]。

養(yǎng)陰通里方劑由大黃、萊菔子、赤芍、木香等4味中藥構(gòu)成。其中大黃攻下為主藥，輔之以行氣通滯之木香，化積行滯之萊菔子為輔。方中尚配以赤芍祛瘀止痛為佐，減輕峻烈攻下行氣破阻藥物作用下產(chǎn)生的不適感覺，故而4藥配伍即可使梗阻得開，又不致由于藥力太強(qiáng)而致患者痛苦。所以，4藥配合共奏，有破阻化瘀、消積、止痛之功。

本研究結(jié)果顯示，養(yǎng)陰通里可以明顯提高大鼠胃排空率及小腸推進(jìn)率，由此減短術(shù)后胃腸麻痹期，使胃腸快速恢復(fù)蠕動(dòng)；在體外能夠明顯提高離體腸管的收縮幅度，并降低振動(dòng)頻率，利于術(shù)后腸道功能的恢復(fù)且不影響傷口愈合。此外，養(yǎng)陰通里可以逆轉(zhuǎn)阿托品對(duì)于腸道平滑肌的抑制作用，推測(cè)其作用機(jī)制可能是通過刺激腸道平滑肌上的M受體。