8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑的HPLC分析

郭明程，王曉軍，聶東興，張 楠，何 靜，楊 峻

（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 農(nóng)藥檢定所，北京 100125）

呋蟲胺是由日本三井化學(xué)株式會(huì)社研發(fā)的第三代新煙堿類殺蟲劑。其主要作用于昆蟲煙堿乙酰膽堿受體，通過影響昆蟲的神經(jīng)傳遞系統(tǒng)引起害蟲麻痹從而發(fā)揮殺蟲作用。呋蟲胺主要用于水稻、玉米、小麥、蔬菜和果樹等多種作物上的飛虱、蚜蟲、蝽象、潛葉蠅、粉虱、薊馬等害蟲防治[1-3]。苯醚甲環(huán)唑是由瑞士汽巴-嘉基公司開發(fā)的三唑類內(nèi)吸性殺菌劑，其通過抑制細(xì)胞壁甾醇的生物合成，阻礙半知菌、擔(dān)子菌和子囊菌等真菌的生長(zhǎng)。苯醚甲環(huán)唑殺菌廣譜，可用于葉面處理或種子處理，能有效提高作物的產(chǎn)量和品質(zhì)[4-6]。二者復(fù)配制得的8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑，適用于水稻、小麥、玉米、花生和大豆等作物種子處理，處理種子時(shí)既可機(jī)械操作，也可人工拌種。其滿足不同生產(chǎn)層次的需要，推廣應(yīng)用前景廣闊[7]。目前，有關(guān)呋蟲胺、苯醚甲環(huán)唑復(fù)配制劑的高效液相色譜分析方法尚未見報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜法測(cè)定8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑中有效成分，方法快速、簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度和精密度高，適用于該制劑的檢測(cè)分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜，帶可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和自動(dòng)控溫進(jìn)樣器；色譜柱：Venusil XBP-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；過濾器：過濾膜孔徑約0.45 μm；離心機(jī)；超聲波清洗器。

1.1.2 試劑

乙腈（色譜純）；超純水；呋蟲胺標(biāo)樣（99.0%）、苯醚甲環(huán)唑標(biāo)樣（99.0%），農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所提供；8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑（5%呋蟲胺＋3%苯醚甲環(huán)唑）。

1.2 高效液相色譜操作條件

流動(dòng)相：V（乙腈）∶V（水）=85∶15；柱溫：25℃；流速：0.5 mL/min；紫外吸收波長(zhǎng)：270 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

以上操作條件系典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同的儀器特點(diǎn)，對(duì)給定的操作參數(shù)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳的分離效果。

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

分別稱取呋蟲胺標(biāo)樣0.01 g和苯醚甲環(huán)唑標(biāo)樣0.01 g（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超聲助溶10 min，使標(biāo)樣完全溶解。冷卻至室溫，乙腈定容，搖勻后放于4℃冰箱備用。實(shí)驗(yàn)中根據(jù)需要用乙腈將儲(chǔ)備液稀釋為適當(dāng)濃度的標(biāo)樣溶液。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑0.01 g（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超聲助溶10 min。冷卻至室溫，乙腈定容，搖勻后離心，取上層清液過濾膜。

1.3.3 測(cè)定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，當(dāng)相鄰2針響應(yīng)值變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液順序進(jìn)樣，進(jìn)行分離與測(cè)定。

1.3.4 計(jì)算

根據(jù)標(biāo)樣溶液和試樣溶液中呋蟲胺和苯醚甲環(huán)唑的峰面積，按下列公式外標(biāo)法計(jì)算試樣中呋蟲胺和苯醚甲環(huán)唑質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）。計(jì)算公式如下。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中呋蟲胺或苯醚甲環(huán)唑峰面積的平均值；A2為試樣溶液中呋蟲胺或苯醚甲環(huán)唑峰面積的平均值；m1為呋蟲胺或苯醚甲環(huán)唑標(biāo)樣的質(zhì)量（g）；m2為試樣的質(zhì)量（g）；P為呋蟲胺或苯醚甲環(huán)唑標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

呋蟲胺和苯醚甲環(huán)唑最大吸收波長(zhǎng)分別為270 nm和210 nm，在210 nm吸收波長(zhǎng)下，樣品溶液中的多種雜質(zhì)均有吸收，產(chǎn)生干擾。因此，為避免雜質(zhì)干擾和提高檢測(cè)靈敏度，最終選擇270 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。在270 nm波長(zhǎng)條件下，呋蟲胺、苯醚甲環(huán)唑和其他雜質(zhì)能有效分離，且兩組分均有較強(qiáng)的吸收峰。

2.2 流動(dòng)相的選擇

以不同比例的乙腈和水為流動(dòng)相，采用Venusil XBP-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）進(jìn)行分析。當(dāng)乙腈體積分?jǐn)?shù)降低時(shí)，呋蟲胺與苯醚甲環(huán)唑保留時(shí)間延長(zhǎng)，色譜峰變寬。經(jīng)反復(fù)測(cè)試，乙腈＋水（體積比85∶15）在流速0.4 mL/min時(shí)，組分和雜質(zhì)能較好地分離，且色譜峰對(duì)稱，分離時(shí)間適中，可滿足分析需要。在此條件下，呋蟲胺保留時(shí)間約為3.75 min，苯醚甲環(huán)唑保留時(shí)間約為5.41 min。典型的呋蟲胺、苯醚甲環(huán)唑標(biāo)樣及懸浮種衣劑樣品的高效液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 呋蟲胺、苯醚甲環(huán)唑標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑FS液相色譜圖

2.3 線性相關(guān)性測(cè)定

將呋蟲胺和苯醚甲環(huán)唑配制成系列質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液，按上述色譜操作條件測(cè)定其峰面積，每濃度測(cè)定2次，取平均值。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。呋蟲胺線性回歸方程為y=133.35 x-6.855 8（R2=0.999 7）；苯醚甲環(huán)唑線性回歸方程為y=254.30 x-0.488 8（R2=0.999 9）。方法的線性關(guān)系良好，具有較好的定量線性關(guān)系。

2.4 方法的精密度測(cè)定

從同一8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑中稱取5份試樣，測(cè)定呋蟲胺和苯醚甲環(huán)唑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，考察定量分析方法的精密度，并計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)（見表1）。結(jié)果表明，呋蟲胺和苯醚甲環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.069和0.036，變異系數(shù)分別為1.32%和1.18%，均低于CIPAC（國(guó)際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(huì)）規(guī)定的要求（＜1.71%）。

表1 8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑精密度測(cè)定結(jié)果

2.5 方法的準(zhǔn)確度測(cè)定

在已知含量的8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑試樣中，分別加入一定量呋蟲胺和苯醚甲環(huán)唑標(biāo)樣溶液，按上述色譜操作條件進(jìn)行5次重復(fù)測(cè)定，結(jié)果見表2。呋蟲胺的回收率為97.75%～102.68%，平均回收率為99.68%；苯醚甲環(huán)唑的回收率為98.72%～102.12%，平均回收率為100.76%。

表2 8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑回收率測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

以Venusil XBP-C18反相柱為分離柱，乙腈＋水（體積比85∶15）為流動(dòng)相，270 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，測(cè)定8%呋蟲胺·苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。方法操作簡(jiǎn)便，分離度高，線性關(guān)系良好，且具有較高的精密度和準(zhǔn)確度，適用于該制劑的質(zhì)量檢測(cè)。