2011-2017年陜西省外環(huán)境中禽流感病毒污染情況分析

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禽類接觸史是人感染禽流感病毒的重要因素。2013年以來，我國(guó)先后出現(xiàn)人感染H5N1、H7N9、H10N8、H5N6、H7N4等禽流感病例[1-5]。據(jù)統(tǒng)計(jì)有80%～90%以上的人禽流感確診病例發(fā)現(xiàn)存在禽類接觸史[6-7]。因此，通過對(duì)活禽市場(chǎng)、規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)等高危場(chǎng)所的環(huán)境監(jiān)測(cè)，本文旨在對(duì)2010-2017年陜西省開展禽類相關(guān)外環(huán)境標(biāo)本監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，了解外環(huán)境中禽流感病毒的污染狀況，評(píng)估人群潛在風(fēng)險(xiǎn)。

1 材料與方法

1.1材料來源 在11個(gè)地市每年各隨機(jī)抽取縣區(qū)作為禽流感監(jiān)測(cè)點(diǎn)，每次采集禽類糞便、禽類飲水、禽籠具表面擦拭、禽宰殺或擺放肉案板表面擦拭、清洗禽類的污水等環(huán)境標(biāo)本。自2011年1月至2017年12月，累計(jì)采集各類標(biāo)本6 426份。

1.2樣本運(yùn)輸與檢測(cè) 采集各地市標(biāo)本后置于4 ℃冰包內(nèi)暫存，于24 h內(nèi)送至當(dāng)?shù)亓鞲芯W(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本使用QIAgen公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit 提取試劑或西安天隆公司核酸提取試劑盒提取病毒RNA。實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)試劑盒由江蘇碩世或上海之江生產(chǎn)，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。所有樣本先進(jìn)行甲型流感病毒(FluA)核酸檢測(cè)，F(xiàn)luA陽性標(biāo)本進(jìn)一步進(jìn)行H5、H7、H9亞型分型檢測(cè)。為了對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，每年由國(guó)家或省級(jí)流感參比中心組織對(duì)參與監(jiān)測(cè)的流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行考核質(zhì)控，結(jié)果均為全優(yōu)。

1.3統(tǒng)計(jì)分析采用Excel2016軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1檢測(cè)基本情況 2011年1月至2017年12月，陜西省11個(gè)監(jiān)測(cè)地區(qū)共采集活禽市場(chǎng)外環(huán)境標(biāo)本6 426份，檢出FluA陽性標(biāo)本489份，陽性率為7.61%。其中2017和2012年AIV禽流感病毒陽性率相對(duì)較高，分別為10.54%和8.56%，不同年份病毒陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=56.852，P<0.001)。489份FluA陽性標(biāo)本中，H9亞型占74.85%，H5亞型占15.34%，A型未分型占4.70%，H7亞型占3.89%，混合型占0.82%，見表1。

表1 陜西省2011-2017年外環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Results of the samples in external environment in Shaanxi Province, 2011-2017

2.2不同地區(qū)禽流感病毒核酸檢測(cè)情況 2011-2017年陜西省11個(gè)監(jiān)測(cè)地市的活禽市場(chǎng)外環(huán)境中均檢出FluA陽性標(biāo)本，陽性率較高的地區(qū)分別為榆林市(30.40%)、渭南(24.59%)；其次為咸陽(10.64%)、延安(10.05%)、安康(6.34%)、西安(5.65%)，而漢中(2.64%)、寶雞(1.29%)、楊凌(1.60%)、銅川(0.90%)和商洛(0.23%)均處于較低水平。各地市FluA病毒陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=624.216，P<0.001)，見表2。

2.3不同類型監(jiān)測(cè)場(chǎng)所禽流感病毒核酸檢測(cè)情況

在檢測(cè)的4種類型的監(jiān)測(cè)場(chǎng)所中，城鄉(xiāng)活禽市場(chǎng)的FluA陽性率最高，為22.92%；其次為家禽屠宰加工廠(14.67%)，家禽規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)和其他類型的監(jiān)測(cè)場(chǎng)所(含家禽散養(yǎng)戶集中的地區(qū)和野生候鳥棲息地)陽性檢出率分別為0.94%和0.39%。各類型監(jiān)測(cè)場(chǎng)所的標(biāo)本核酸陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=851.51，P<0.001)見表3。

表2 陜西省2011-2017年不同地區(qū)禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Tab.2 Results of the samples in external environment in Shaanxi Province, 2011-2017

表3 陜西省2011-2017年不同類型監(jiān)測(cè)場(chǎng)所禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Tab.3 Results of the samples in external environment in different monitoring points, Shaanxi Province, 2011-2017

2.4不同類型標(biāo)本禽流感病毒核酸檢測(cè)情況 在檢測(cè)的6種類型環(huán)境標(biāo)本中，宰殺或肉板擦拭標(biāo)本陽性率最高，為37.78%；其次為清洗禽類污水(20.97%)；禽類飲水標(biāo)本(5.75%)、籠具表面擦試標(biāo)本(5.98%)和糞便標(biāo)本(5.11%)，其他類型標(biāo)本的陽性率最低，為4.42%。各類型標(biāo)本核酸陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=382.313，P<0.001)見表4。

2.5不同季度禽流感病毒核酸檢測(cè)情況 4個(gè)季度均在外環(huán)境中檢測(cè)出FluA陽性標(biāo)本，其中第一季度的陽性率最高，為11.08%，其次為第二季度(8.60%)。各季度標(biāo)本核酸陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=54.18，P<0.001)。不同季度檢出的亞型存在差異，第一、四季度病毒構(gòu)成以H9亞型為主，第二季度3種亞型均可檢出，見表5。

3 討 論

陜西省自2004年報(bào)道一起禽間H5N1禽流感事件后[8-9]，鮮有關(guān)于禽間流感流行情況的報(bào)告，特別是在外環(huán)境中的禽間流感病毒病原學(xué)分布情況以往鮮有報(bào)道。近年來，由H5N1、H7N9、H10N8、H5N6、H7N4等亞型禽流感病毒均能造成人的感染和死亡時(shí)有報(bào)告[1-5]。本文對(duì)陜西省11個(gè)市區(qū)外環(huán)境開展禽流感病原學(xué)監(jiān)測(cè)，探索甲型禽流感病毒在不同外環(huán)境下的污染特點(diǎn)，為陜西當(dāng)?shù)厝烁腥厩萘鞲幸咔榈念A(yù)測(cè)預(yù)警提供依據(jù)。

表4 陜西省2011-2017年不同標(biāo)本類型禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Tab.4 Results of the different sample types, Shaanxi Province, 2011-2017

表5 陜西省2011-2017年不同標(biāo)本類型禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Tab.5 Avian influenza virus in external environment in different seasons, Shaanxi Province, 2011-2017

季度檢測(cè)數(shù)(份)陽性數(shù)(%)不同亞型檢出數(shù)(份)H5H7H9混合A型未分型第一季度1525169(11.08)17014615第二季度1826157(8.60)271992019第三季度137362(4.52)1904300第四季度1702101(5.93)1208234合計(jì)6426489(7.61)7519363428

研究結(jié)果顯示，陜西省外環(huán)境FluA總體陽性率為7.61%，遠(yuǎn)低于甘肅(20.97%)[10]和浙江(32.54%)[11]，與貴陽(8.99%)[12]基本持平?？傮w陽性率可以說明禽流感病毒的流行水平，但并不能由此推斷出人感染禽流感流行趨勢(shì)，還應(yīng)關(guān)注監(jiān)測(cè)場(chǎng)所和病原學(xué)。

由于80%～90%以上確診的人感染禽流感病例有活禽市場(chǎng)暴露史[6-7]。而陜西省內(nèi)活禽市場(chǎng)FluA總體陽性率(22.92%)亦明顯高于其他監(jiān)測(cè)場(chǎng)所，結(jié)果與廣東(24.23%)[13]，湖北(19.1%)[14]基本持平,低于江西(50.44%)[15]但高于寧夏(6.60%)[16]水平。根據(jù)Kile JC的報(bào)道[6]，在2013年3月至2017年8月的五波H7N9疫情中，陜西省共報(bào)告H7N9病例7例，廣東258例，湖北31例，江西52例，寧夏未報(bào)告。因此，禽流感病毒病原流行特點(diǎn)至關(guān)重要。

2011-2014年陜西省以H5亞型禽流感病毒為主，2015年以后以H9亞型為主。這與中國(guó)大陸整體流行情況主要為H9/H5轉(zhuǎn)換模式基本一致[17]，但轉(zhuǎn)換時(shí)間稍微推后。在外環(huán)境陽性標(biāo)本中，H5/H7/H9亞型混合陽性標(biāo)本所占比例很低，這可能與陜西省野生禽類、禽流感貿(mào)易或養(yǎng)殖業(yè)不發(fā)達(dá)，宿主動(dòng)物相對(duì)較少有關(guān)；也與監(jiān)測(cè)體系不夠健全、監(jiān)測(cè)力度不夠大有關(guān)。2017年初陜西省調(diào)整禽流感監(jiān)測(cè)方案，針對(duì)外環(huán)境加大監(jiān)測(cè)力度，之后FluA檢出數(shù)明顯增加。

從監(jiān)測(cè)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，11個(gè)監(jiān)測(cè)市區(qū)的活禽市場(chǎng)FluA陽性檢出率差異很大，陽性率最高達(dá)30.4%，最低僅0.23%，提示陜西省各地區(qū)活禽市場(chǎng)禽流感病毒污染嚴(yán)重度差異很大。延安和榆林兩市H5亞型檢出較多，其中同一監(jiān)測(cè)點(diǎn)(家禽屠宰加工廠)在2011年[18]、2013年和2014年先后4批次檢出H5亞型，鑒于當(dāng)?shù)責(zé)o活禽養(yǎng)殖業(yè)，外地輸入禽類多次污染可能性極大；榆林市同一監(jiān)測(cè)點(diǎn)(活禽市場(chǎng))曾于2012年7月至13年2月檢出H5亞型樣本35份、H5+H9混合型3份，考慮該市場(chǎng)曾被污染，但不排除采樣點(diǎn)清理不及時(shí)或不充分導(dǎo)致反復(fù)檢出陽性可能。榆林H7亞型系17年某養(yǎng)殖場(chǎng)活禽死亡時(shí)檢出[19]。除去上述兩市H5和H7檢出情況，陜西其他地市整體污染狀況較低。

不同種類的外環(huán)境標(biāo)本監(jiān)測(cè)結(jié)果提示：宰殺或肉板擦拭標(biāo)本和清洗禽類污水的陽性率明顯高于其他類型標(biāo)本的陽性率。與甘肅、湖北[10,14]等地的研究結(jié)果基本一致，這可能與工人加工處理禽類時(shí)使用同一案板有關(guān)，也與案板不清洗或清洗不徹底有關(guān)；禽類污水如家禽脫毛機(jī)、污水渠、禽廢棄物垃圾桶等容易污染又難以清洗的地方容易檢出。因此在對(duì)涉禽場(chǎng)所進(jìn)行清洗消毒時(shí)，充分清洗、徹底消毒活禽市場(chǎng)是關(guān)鍵。第一、四季度外環(huán)境FluA陽性率高于第二、三季度，呈現(xiàn)季節(jié)性差異，提示冬春季節(jié)為活禽流通旺季，應(yīng)結(jié)合病原學(xué)情況做好防控。

綜上所述，2011-2017年陜西省活禽市場(chǎng)外環(huán)境普遍存在禽流感病毒污染，建議持續(xù)開展禽流感病毒病原學(xué)監(jiān)測(cè)，特別是針對(duì)活禽市場(chǎng)和規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)重點(diǎn)監(jiān)測(cè)，對(duì)增加監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)量并對(duì)采樣點(diǎn)案板和污水等標(biāo)本類型增加采樣。這對(duì)及時(shí)掌握禽流感病毒的流行趨勢(shì)及變異情況，有效評(píng)估其流行風(fēng)險(xiǎn)，為人禽流感疫情的防控和預(yù)警提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，依據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果，建議省內(nèi)加強(qiáng)對(duì)活禽市場(chǎng)清掃和消毒力度，強(qiáng)化相關(guān)從業(yè)人員的防范意識(shí)，有條件的地區(qū)盡量統(tǒng)購(gòu)統(tǒng)銷，定點(diǎn)宰殺，集中上市，避免禽流感病毒污染。

(致謝：感謝陜西省各市禽流感監(jiān)測(cè)工作中辛勤付出的同事們！)

收稿日期：2018-05-07編輯：王曉歡