膠體金免疫層析技術(shù)在羊布魯氏菌病的檢測應(yīng)用

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青海省是我國布病流行的重疫區(qū)，根據(jù)我國動物布魯氏菌病的診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)(GB/T18646-2002),通常采用虎紅平板凝集試驗進(jìn)行牲畜布病篩選,采用試管凝集試驗進(jìn)行布病的確診,但由于SAT有時出現(xiàn)前帶現(xiàn)象和封閉現(xiàn)象，所以有時也出現(xiàn)假陰性結(jié)果，必要時需要和其他方法聯(lián)合應(yīng)用。膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)是將膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)和蛋白層析技術(shù)相結(jié)合的以硝酸纖維膜為載體的固相膜免疫分析技術(shù)，適用于現(xiàn)場快速檢測。GICA已被廣泛應(yīng)用于動物病毒、細(xì)菌、寄生蟲等獸醫(yī)病原學(xué)檢測和臨床診斷中[1]。為了解GICA靈敏度和特異度，特將GICA與RBPT、 SAT進(jìn)行了對比研究。

1 材料與方法

1.1一般材料 樣本取自格爾木地區(qū)送檢的羊血清299份。

1.2實驗試劑 虎紅凝集抗原、試管凝集抗原、獸用陰陽性標(biāo)準(zhǔn)血清均由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供，有效期為2018年10月12日，羊布魯氏桿菌病抗體快速試劑盒為廣州悅洋生物技術(shù)有限公司提供，有效期為2018年11月9日。

1.3 試驗方法

1.3.1虎紅凝集試驗和試管凝集試驗以《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)(GB/T18646-2002)》為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.3.2膠體金免疫層析技術(shù)按照產(chǎn)品說明書的操作，取待檢血清10 μL滴入試紙條的樣品孔中，再滴入緩沖液4滴，20 min內(nèi)判定結(jié)果，C為質(zhì)控線，T為檢測線，C有顯示T才有效。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 運(yùn)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

1.5Kappa值判斷標(biāo)準(zhǔn)：Kappa值<0，一致性強(qiáng)度弱；Kappa值為0～0.2，一致性強(qiáng)度為輕；Kappa值為0.21～0.40,一致性強(qiáng)度為尚好；Kappa值為0.41～0.60,一致性強(qiáng)度為中度；Kappa值為0.61～0.80,一致性強(qiáng)度為高度；Kappa值為0.81～1,一致性強(qiáng)度為最強(qiáng)。

2 結(jié) 果

2.1299份羊血清樣本3種方法檢測結(jié)果 RBPT、SAT和GICA 3種方法進(jìn)行檢測見表1。

表1 3種實驗方法布病檢測結(jié)果Tab.1 Three experimental methods of testing results about brucellosis

2.2RBPT與SAT進(jìn)行對比 RBPT與 SAT進(jìn)行對比有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=282.563，P<0.001)，檢測結(jié)果靈敏度為100%，特異度為99.23%，Kappa=0.972，兩種方法的一致性強(qiáng)度為最強(qiáng)(Kappa值>0.81)，說明一致性好(表2)。

2.3GICA與SAT進(jìn)行對比 GICA與SAT進(jìn)行對比有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=256.577，P<0.001)，檢測結(jié)果靈敏度為90%，特異度為100%，一致性都量Kappa=0.940，兩種方法的一致性強(qiáng)度為最強(qiáng)(Kappa值>0.81)，說明一致性好(表3)。

表2 RBPT與SAT布病檢測結(jié)果符合率對比Tab.2 Comparison of coincidence rate about RBPT and SAT brucellosis testing

表3 GICA與SAT布病檢測結(jié)果符合率對比Tab.3 Comparison of coincidence rate about GICA and SAT brucellosis testing

3 討 論

膠體金免疫層析技術(shù)因為具有特異、使用簡便、快速檢測的特征在獸醫(yī)臨床上其發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景是非常巨大的[2]，此次將GICA應(yīng)用于羊布魯氏菌病的檢測，通過與SAT、RBPT兩種檢測方法，進(jìn)行比較得出3種方法的檢測結(jié)果基本一致，均為陽性的有36份。運(yùn)用Kappa值一致性強(qiáng)度判斷分析得出，GICA特異度指標(biāo)略高于RBPT，與SAT一致。動物布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)中通常采用RBPT進(jìn)行篩選,采用SAT進(jìn)行確診。SAT具有敏感性強(qiáng)，特異性高等優(yōu)點,但其操作步驟繁瑣，所需器械多，樣本消耗量大，觀察結(jié)果用時長等因素的影響[3-4]，致使在現(xiàn)場工作中受限。而GICA剛好彌補(bǔ)了以上缺點，它樣本用量低，試驗條件要求不高，操作方法便捷、觀察結(jié)果快速、便于保存等優(yōu)點[5]，使膠體金免疫層析技術(shù)更適用于布病現(xiàn)場快速篩檢工作，有巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景，從而促進(jìn)青海省人、畜間布病預(yù)防控制工作健康、有序的發(fā)展。