彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)變化及意義

謝瑜，黎承平，譚琳，武坤

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，昆明650032)

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)屬于侵襲性較強(qiáng)的成人非霍奇金淋巴瘤(NHL)，病死率極高，且個(gè)體預(yù)后差異較大。DLBCL的治療和預(yù)后重點(diǎn)在于分期評價(jià)，盡管國際預(yù)后指數(shù)為NHL的危險(xiǎn)分級和制定治療方案提供了廣泛認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)，但是對于NHL的預(yù)后仍無法明確[1]。因而，探尋準(zhǔn)確的DLBCL評價(jià)和預(yù)后指標(biāo)已成為現(xiàn)臨床研究的重要方向。白細(xì)胞介素11(IL-11)由骨髓基質(zhì)細(xì)胞分泌，具有調(diào)控造血功能的生物學(xué)活性，可直接刺激巨核系組細(xì)胞和骨髓造血干細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)巨核細(xì)胞的分化和成熟。研究發(fā)現(xiàn)，IL-11與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展關(guān)系密切[2]。IL-10對機(jī)體的免疫應(yīng)答抑制具有重要作用，對淋巴瘤具有一定的調(diào)節(jié)作用[3]。但是，目前關(guān)于IL-10、IL-11與DLBCL的相關(guān)研究較少。因此，我們觀察了DLBCL組織中IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)變化，并探討其意義?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2015年1月～2017年7月確診的DLBCL患者80例(DLBCL組)[4]、反應(yīng)性淋巴增生患者40例(對照組)。DLBCL組，男48例、女32例，年齡(49.8±16.2)歲;臨床分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期27例、Ⅲ期27例、Ⅳ期6例；病理學(xué)分型：生發(fā)中心(GC)型53例，非GC型27例；有B細(xì)胞癥狀50例，無B細(xì)胞癥狀30例；淋巴瘤國際預(yù)后指數(shù)(IPI)：0～2分39例，3～5分41例;檢測前未行放化療、免疫治療。對照組男26例、女14例，年齡(48.0±14.9)歲。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組均排除其他血液系統(tǒng)疾病、其他部位的惡性腫瘤、全身感染性疾病、精神及認(rèn)知功能疾病、風(fēng)濕性疾病、結(jié)締組織疾病。本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。

1.2 淋巴結(jié)組織中IL-11、IL-10 mRNA檢測方法 采用qPCR法。用TRIzol試劑盒提取淋巴組織標(biāo)本總RNA，于20 μL體系添加總RNA 2 μg合成cDNA；qPCR反應(yīng)使用2×SYBR GREEN PCR MASTER Mix試劑盒(北京中杉生物有限公司)進(jìn)行，適量cDNA為模板，15 μL體系擴(kuò)增，0.4 μmol/L引物濃度，每個(gè)待測樣本均設(shè)置平行樣本3個(gè)并根據(jù)IL-11和IL-10具體引物行PCR擴(kuò)增，GAPDH為內(nèi)參，具體反應(yīng)于PCR儀進(jìn)行。引物序列：IL-11上游5′-AGTCGAATTCATGAGCAGCAGCTGCTCAGGGG-3′，下游5′-AGTCCTCGAGTAGGACTGTCTTCTTCCTGTA-3′；IL-10上游5′-ACCTGCCTAACATGCTTC-3′，下游5′-AGTCCCACCGCTGAGATA-3′。PCR反應(yīng)條件：10 min 95 ℃；15 s 95 ℃；30 s 60 ℃；30 s 72 ℃，共計(jì)40個(gè)循環(huán)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以2-ΔΔCt計(jì)算目的基因的相對表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 兩組IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)比較 DLBCL組IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)均高于對照組(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)比較

2.2 不同臨床病理因素DLBCL患者腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)比較 Ⅲ～Ⅳ期、非GC型、有B細(xì)胞癥狀、IPI指數(shù)3～5分DLBCL患者腫瘤組織中IL-11 mRNA表達(dá)高于Ⅰ～Ⅱ期、GC型、無B細(xì)胞癥狀、IPI指數(shù)0～2分者(P均<0.05)，有B細(xì)胞癥狀、IPI指數(shù)3～5分DLBCL患者腫瘤組織中IL-10 mRNA高于無B細(xì)胞癥狀、IPI指數(shù)0～2分者(P均<0.05)。見表2。

2.3 DLBCL腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)的關(guān)系 相關(guān)性分析顯示，DLBCL腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.577，P<0.01)。

表2 不同臨床病理因素DLBCL患者腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)比較

3 討論

DLBCL是最常見的NHL，約占30%。在我國DLBCL發(fā)病率更高，可達(dá)50%左右[5]。DLBCL沒有特殊的臨床表現(xiàn)，也沒有特征性的生物學(xué)特點(diǎn)，多以無痛性淋巴結(jié)腫大起病，但也有以淋巴結(jié)以外器官侵犯為主要表現(xiàn)起病，如胸、腹腔積液、中樞侵犯、生殖系統(tǒng)侵犯等[6,7]。因此，本研究探尋DLBCL患者的評價(jià)和預(yù)后的有效指標(biāo)，旨在提高DLBCL的治療效果。

IL-11屬于新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，具有多種生物學(xué)功能。研究提示，乳腺癌組織具有分泌IL-11的功能，乳腺癌的骨轉(zhuǎn)移和預(yù)后與IL-11的表達(dá)水平關(guān)系密切[8，9]。文獻(xiàn)提示，IL-11與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展亦具有密切聯(lián)系，已成為臨床惡性腫瘤研究的重要方向[10]。IL-10能夠?qū)?xì)胞的生長與分化進(jìn)行調(diào)節(jié)，參與炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)，是一類多細(xì)胞來源、多功能的細(xì)胞因子，亦是現(xiàn)階段公認(rèn)的炎癥與免疫抑制因子，在腫瘤、感染、器官移植、造血系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用[11～13]。此外，研究發(fā)現(xiàn)IL-10可作為強(qiáng)效免疫抑制劑調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的功能，進(jìn)而影響HIV相關(guān)性NHL的發(fā)生發(fā)展過程[14,15]。

本研究結(jié)果顯示，DLBCL組腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)均高于對照組淋巴結(jié)組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果提示，DLBCL患者腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達(dá)水平高于淋巴增生患者，證實(shí)IL-11、IL-10水平與DLBCL腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，結(jié)果與上述研究一致。IL-11、IL-10屬于機(jī)體誘導(dǎo)免疫耐受抑制細(xì)胞，由于腫瘤抗原的封閉和裝飾作用，加上自身免疫原性較弱，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體無法識別腫瘤抗原而出現(xiàn)免疫逃逸現(xiàn)象，上述原因可能是導(dǎo)致DLBCL患者機(jī)體IL-11、IL-10表達(dá)過高的主要原因。

本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅲ～Ⅳ期、非GC型、有B細(xì)胞癥狀、IPI指數(shù)3～5分的DLBCL腫瘤組織中IL-11 mRNA表達(dá)均高于Ⅰ～Ⅱ期、GC型、無B細(xì)胞癥狀、IPI指數(shù)0～2分的DLBCL腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這提示IL-11 mRNA具有作為DLBCL的臨床分期、病理分型及預(yù)后評估指標(biāo)的潛力，可作為評價(jià)和評估DLBCL預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)之一。針對IL-10 mRNA的研究結(jié)果顯示，不同臨床分期、不同病理學(xué)分型DLBCL腫瘤組織中IL-10 mRNA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有B細(xì)胞癥狀、IPI指數(shù)3～5分DLBCL腫瘤組織中IL-10 mRNA表達(dá)高于無B細(xì)胞癥狀、IPI指數(shù)0～2分的DLBCL腫瘤組織。IL-10 mRNA對DLBCL的臨床分期和病理分型并不具有重要意義，但可作為DLBCL預(yù)后的重要指標(biāo)。IL-10屬于重要炎癥因子，但炎癥因子與多種影響因素有關(guān)，因此IL-10 mRNA對DLBCL的臨床分期和病理分型并不具有重要意義。這提示DLBCL的病理分期介導(dǎo)機(jī)制復(fù)雜，不僅僅與炎癥因子有關(guān)；但炎癥因子參與了本病的發(fā)生發(fā)展過程，因而IL-10 mRNA可作為DLBCL預(yù)后重要評估指標(biāo)。因此，我們認(rèn)為IL-11、IL-10 mRNA在DLBCL腫瘤組織中高表達(dá)，可作為DLBCL預(yù)后判斷的重要指標(biāo)。