灰棗優(yōu)系抗寒性綜合評價

郭佳歡，馮會麗，史彥江，俞元春*

(1.南京林業(yè)大學南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心, 南京林業(yè)大學生物與環(huán)境學院, 江蘇 南京 210037;2.新疆林業(yè)科學院經濟林研究所, 新疆 烏魯木齊 830000)

【研究意義】灰棗(Zizyphusjujubacv. ‘Huizao’)果實質地密合、含水量低、糖分高、風味佳，含有多種微量元素和較多的藥用成分，具有很高的食療價值和保健效果[1-3]，是優(yōu)質的鮮食兼制干棗品種。新疆灰棗自20世紀70年代初從河南新鄭引種以來，當地得天獨厚的光熱資源使其各項經濟性狀均優(yōu)于原產區(qū)，尤其在南疆各地得到大面積推廣，栽植面積達47.37×104hm2以上[4]，已成疆內棗樹主栽品種[5]。然而，由于新疆特殊的地理位置及氣候條件，夏季晝夜溫差大，冬季長且寒冷，低溫凍害在灰棗的實際生產中時有發(fā)生，現(xiàn)已成為制約當地棗產業(yè)發(fā)展的主要因素之一。植物抗寒性是衡量植物本身對低溫冷害的承受能力的指標，是決定植物分布與區(qū)劃的重要依據。【前人研究進展】目前，果樹抗寒性研究主要從細胞形態(tài)結構、生理代謝、種質資源及基因工程等多方面進行研究[6-7]。其中，通過人工低溫處理測定植物體的相對電導率、可溶性糖、可溶性蛋白、丙二醛含量及脯氨酸含量[8]，并以此衡量植物的抗寒能力大小已成為目前常用的抗寒性評定方法[9]?！颈狙芯壳腥朦c】目前，關于果樹抗寒性的研究已有大量報道，國內外學者對于蘋果(Maluspumila)[10]、梨(Pyrusspp.)[11]、櫻桃(Cerasuspseudocerasus)[12]、葡萄(Vitisvinifera)[13]、核桃(Juglansregia)[14]等果樹抗寒性都作過研究，但關于新選育的3個灰棗優(yōu)系抗寒性研究還未見報道。本試驗以普通灰棗和新疆林業(yè)科學院新選育的灰棗3個優(yōu)系為試驗材料，通過人工低溫處理，對相對電導率、可溶性糖、可溶性蛋白、丙二醛含量及游離脯氨酸共5個抗寒性生理指標進行測定分析?！緮M解決的關鍵問題】旨在探索灰棗優(yōu)系在低溫脅迫下的生理響應機制，試圖探索灰棗及其優(yōu)系的抗寒機理，為灰棗耐寒品種的選育推廣提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

試驗材料為灰棗和新疆林業(yè)科學院選育的3個灰棗優(yōu)系，目前暫命名為‘灰實2’、‘灰實7’和‘灰實8’。于2017年1月20日在阿克蘇實驗林場二隊紅棗優(yōu)樹匯集圃選取長勢一致的1年生休眠二次枝為試驗材料，灰棗和3個優(yōu)系各選取3株樣樹為重復，在東西南北4個方位各取5條枝，將同一品種/優(yōu)系樣品混合，帶回實驗室。蒸餾水清洗3次，用吸水紙吸干多余水分并在枝條兩端封蠟后裝袋，貼標簽，分組放入可控低溫冰箱內冷凍待測。

1.2 試驗方法

將灰棗及3個優(yōu)系的待測枝條剪成20 cm長的枝段，灰棗及每個優(yōu)系的枝段分成6組，取其中1組用于試驗對照。將剪好的枝段用去離子水漂洗3次，用吸水紙吸干水分并在末端封蠟后分別置于可控低溫冰箱中進行冷凍處理，每次處理時隨機選取灰棗和各優(yōu)系枝條5段，設3次重復，其余裝入自封袋中后放入0 ℃恒溫冰箱中保存待用。處理時，溫度梯度分別設為-15、-20、-25、-30、-35、-40 ℃，設-15 ℃為試驗對照(CK)溫度。低溫處理時，在達到設定的冷凍溫度時需維持12 h，處理后將溫度上升至0 ℃，放置12 h后在室內進行各項抗寒指標的測定。其中，溫度下降及上升的速度均為5 ℃/h。將灰棗和各優(yōu)系不同溫度處理的枝段切成2 mm厚的薄片，避開芽眼，同一品種/優(yōu)系薄片混合后待測。

1.3 測定項目及方法

1.3.1 相對電導率 相對電導率(Relative electric conductivity, REC)采用電導率法[15]測定。稱取2 g切片試樣置于25 mL具塞試管中，加入去離子水至25 mL刻度線后蓋緊，放于搖床震蕩24 h，每個處理設5個重復。采用上海京科雷磁公司生產的DDSL-308型電導率測定儀測定浸出液的初始電導率(C1)，將試管置于沸水中煮沸30 min，靜置冷卻后加去離子水定容至25 mL后測定其最終電導率(C2)，計算相對電導率。相對電導率按公式(1)計算：

REC=(C1/C2)×100 %

(1)

以處理溫度為橫坐標，以相對電導率為縱坐標作圖，結合Logistic方程(2)計算抗寒性[16]。

(2)

式中：Y為REC(%)，t為處理溫度( ℃)，由于本試驗的植物細胞傷害率抵消了基礎干擾，因此設k=100，a，b為方程參數。通過對方程(2)線性化處理后得到方程式ln[(k-Y)/Y]=ln(a-bt)，Y=ln[(k-Y)/Y]。以處理溫度t為自變量，以相對電導率y為因變量，通過線性回歸后得到REC(Y)和處理溫度(t)的直線方程Y=at+b，并求得a，b值及相關系數R，運用SPSS 18.0結合公式(2)可求得拐點處的值，即植物組織半致死溫度值LT50=-ln(a/b)。

通過對方程(2)求二階、三階導，并令其為0，則可得到棗樹細胞在低溫處理下開始受損時的起始溫度T1=(lna/3.732)/b和棗樹組織在低溫處理下完全致死的溫度T2=(lna/0.268)/b。

1.3.2 可溶性糖和可溶性蛋白 可溶性糖(Water soluble sugars, WSS)采用蒽酮比色法[17]測定。稱取0.3g切片試樣放入具塞試管，加入15 mL蒸餾水后放入水浴鍋內煮沸20 min，取出冷卻后過濾至100 mL的容量瓶中，往試管中繼續(xù)加蒸餾水沖洗殘渣數次過濾至容量瓶后定容至刻度線處。取1 mL提取液置于另一試管中，加入5 mL蒽酮試劑，搖勻，沸水浴10 min，冷卻后測定吸光度，比色波長為620 nm，重復3次，取平均值。測定時以蒸餾水為空白對照。WSS的計算公式(3)為：

(3)

式中：C為根據標準曲線求得標準液可溶性糖含量(μg)，VT為提取液的總體積(mL)，WF為樣品鮮重(g)，VS為測定時的提取液取液量(mL)，n為稀釋倍數。

可溶性蛋白(Soluble protein, SP)采用考馬斯亮藍G-250染色法[17]測定。稱取0.1 g切片試樣放入研缽，加入5 mL蒸餾水后研磨30 min。洗液轉移至離心管后置于4000 r/min的離心機中離心10 min。提取上清液，加蒸餾水定容至10 mL。取1 mL提取液加入小試管中，加入5 mL考馬斯亮藍G-250溶液，搖勻，靜置5 min。待反應充分后測定吸光度，比色波長為595 nm，重復3次，取平均值。測定時以蒸餾水為空白對照。SP的計算公式(4)為：

(4)

式中：C為根據標準曲線求得標準液可溶性蛋白含量(μg)，VT為提取液的總體積(mL)，VS測定時的提取液取液量(mL)，WF為樣品鮮重(g)。

1.3.3 丙二醛和游離脯氨酸 丙二醛(Malondialdehyde, MDA)采用硫代巴比妥酸(TBA)顯色法[18]測定。取0.1 g切片試樣放入研缽，加入2 mL三氯乙酸(TCA)和少量石英砂研磨至勻漿，再加入3 mL TCA進一步研磨，將所得勻漿轉移至離心管后置于4000 r/min的離心機中離心10 min，所得上清液即為提取液。取提取液測定吸光度，比色波長為532、600和450 nm，重復3次，取平均值。MDA含量的計算公式(5)為：

(5)

式中：MC為MDA含量(μmol/g)，MN為MDA濃度(μmol/L)，VT為提取液的總體積(mL)，WF為樣品鮮重(g)。其中，MN的計算方法為：MN=6.45×(OD532-OD600)-0.56×OD450，OD532、OD600和OD450為在波長532、600和450 nm下的吸光度。

游離脯氨酸(Free proline, FP)采用茚三酮顯色法[19]測定。取0.3 g切片試樣放入具塞試管中，往試管中加入3 %的磺基水楊酸溶液5 mL，水浴加熱煮沸15 min，冷卻后提取上清液2 mL，加入2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮試劑，水浴煮沸30 min。冷卻后加入4 mL甲苯，充分震蕩后靜置。取上層溶液測定吸光度，比色波長為520 nm，重復3次，取平均值。測定時以甲苯為空白對照。FP含量的計算公式(6)為：

(6)

式中：C為根據標準曲線求得標準液脯氨酸質量(μg)，VT為提取液的總體積(mL)，VS測定時的提取液取液量(mL)，WF為樣品鮮重(g)。

1.4 數據處理與作圖

將所測數據按照公式(7)以相對指標為單位進行標準轉換，求得各理化指標性狀的抗寒系數(Cold resistance coefficient, CRC)，并進行相關性分析。式中，VD為處理測定值，VC為對照測定值。

CRC=(VD/VC)×100 %

(7)

隸屬函數法[20]綜合各項指標進行抗寒性評價，以公式(8)計算與抗寒性呈正相關的指標(可溶性糖、可溶性蛋白、游離脯氨酸)的隸屬度值；以公式(9)計算與抗寒性呈負相關的指標(丙二醛和相對電導率)的隸屬度值。

Uin=(Xin-Ximin)/(Ximax-Ximin)

(8)

(9)

按照平均隸屬度抗寒性分級法[21]將抗寒性分為5個級別，0.70～1.00為Ⅰ級，高抗(High resistance, HR)；0.60～0.69為Ⅱ級，抗(Resistance, R)；0.40～0.59為Ⅲ級，中抗(Middle resistance, MR)；0.30～0.39為Ⅳ級，低抗(Lower resistance, LR)；0～0.29為Ⅴ級，不抗。

表1 灰棗不同優(yōu)系在低溫處理后REC多重比較

注：表中數值為平均值±標準差，同列不同大小寫字母表示在0.01和0.05水平上差異顯著，下同。

Note:Values are means±SD. Different capital and small letters in a column indicate significant difference at 0.01 or 0.05 levels. The same as below.

采用EXCEL2007、ORIGIN PRO9.0進行數據的統(tǒng)計，采用SPSS18.0進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 不同低溫處理對棗樹枝條REC的影響

電導率法是指植物受到低溫傷害時，細胞的膜透性增大，細胞內部電解質不同程度的滲出，導致電導率發(fā)生變化[22]。植物受凍越嚴重，外滲電解質物質越多，電導值越大，細胞膜受傷害程度越重，則植物抗寒性越差，反之，抗寒性越強[23]。由表1可以看出，灰實2、灰實7、灰實8以及灰棗的相對電導率均隨著處理溫度的降低而升高，在相同溫度下的相對電導率差異明顯。當處理溫度為初始值CK時，灰實8的相對電導率最低，為37.44 %，極顯著(P<0.01)低于灰實2和灰棗，顯著(P<0.05)低于灰實7。當處理溫度為-20 ℃時，與對照溫度相比，灰實2、灰實7、灰實8以及灰棗的相對電導率上升幅度較小，分別為12.72 %、6.86 %、9.67 %和8.21 %，說明此時溫度下降對灰棗及其優(yōu)系的影響相對較小。當處理溫度降至-25 ℃時，灰實2、灰實7、灰實8以及灰棗的相對電導率大幅上升，其上升幅度分別為46.15 %、33.01 %、32.59 %、41.52 %，除灰實8外，其余品種/優(yōu)系的相對電導率均超過了50 %，說明在此溫度下，細胞內部電解質大量外滲，灰棗及其優(yōu)系受凍明顯。當處理溫度降至-30 ℃及以下時，不同品種(系)棗樹相對電導率均已超過65 %，且變化幅度較小，說明-30 ℃及以下時灰棗及其優(yōu)系會遭到嚴重凍害。

從表2可以看出，灰棗不同優(yōu)系在低溫處理后的抗寒性有所差異?；覍?、灰實7、灰實8和灰棗的組織細胞初始凍傷溫度分別為-3.08、-2.36、-2.49和-2.89 ℃，低溫半致死溫度分別為-11.48、-8.82、-9.30和-10.80 ℃，以及組織細胞接近全透時的低溫完全致死溫度分別為-42.85、-32.89、-34.69和-40.31 ℃。以半致死溫度的高低作為衡量棗樹抗寒性能大小的標準，其排序為灰實2>灰棗>灰實8>灰實7。

2.2 不同低溫處理對棗樹枝條WSS和SP含量的影響

可溶性糖對于植物抗寒的生理機制主要表現(xiàn)在調節(jié)細胞滲透液濃度，降低水勢，提升細胞保水效果，從而降低冰點，同時可溶性糖對植物細胞原生質體，線粒體等細胞器及膜上敏感偶聯(lián)因子起到保護作用。由表3可知，不同低溫處理后，不同棗樹枝條可溶性糖含量均呈現(xiàn)出先升后降的趨勢，且可溶性糖含量達到峰值時的處理溫度值基本相同，灰棗各優(yōu)系及灰棗均在-30 ℃時的可溶性糖測定含量達到最大值。其中，灰實2與灰棗對照組差異不明顯，灰實7與灰棗對照組呈顯著差異(P<0.05)，灰實8與對灰棗照組成極顯著差異(P<0.01，表3)。

表2 灰棗不同優(yōu)系在低溫處理后的半致死溫度

表3灰棗不同優(yōu)系在低溫處理后WSS多重比較

Table 3 Multiple comparison of water soluble sugars from different excellent strains ofZiziphusjujuba‘Huizao’ under low temperature ( %)

品種(系)Variety (Clones)可溶性糖(%) Water soluble sugars CK-20 ℃-25 ℃-30 ℃- ℃-40 ℃灰實2Gray experiment 22.41±0.17Bc2.58±0.11Bb4.96±0.19ABb6.76±0.13Bbc5.56±0.15Bb4.75±0.08Ab灰實7Gray experiment 72.68±0.12Bb2.77±0.07Bb5.01±0.13ABab6.98±0.14Bb5.78±0.08Bb4.89±0.15Aab灰實8Gray experiment 83.15±0.08Aa3.42±0.15Aa5.22±0.04Aa7.32±0.10Aa6.23±0.21Aa5.08±0.13Aa灰棗Ziziphusjujuba ‘Huizao’2.53±0.12Bbc2.67±0.12Bb4.71±0.08Bc6.69±0.10Bc5.67±0.02Bb4.72±0.19Ab

由表4可知，低溫條件下，可溶性蛋白含量在灰實2、灰實7、灰實8及灰棗上呈現(xiàn)“低-高-低”的變化趨勢，且均在-25 ℃附近時測定含量達到最大值。當處理溫度為初始值CK時，灰實8的可溶性蛋白含量極顯著高于灰實2、灰實7和灰棗(P<0.01)，灰實2、灰實7和灰棗間并無明顯差異；當處理溫度達到-25 ℃時，灰實7和灰實8的可溶性蛋白測定含量與灰實2和灰棗呈極顯著差異，灰實2的可溶性蛋白含量與對灰棗對照組基本一致。

2.3 不同低溫處理對棗樹枝條MDA和FP含量的影響

從表5可以看出，隨著處理溫度的降低，不同品種/優(yōu)系棗樹枝條測得的丙二醛含量呈現(xiàn)“低-高-低-高”波浪式變化趨勢?；覍?和灰棗在-35 ℃時達到最高值，達11 μmol/g以上，且與灰實7、灰實8存在極顯著差異(P<0.01)；灰實7和灰實8在-40 ℃時達到最高值，為10.42～10.71 μmol/g左右，灰實8與灰實2呈顯著差異(P<0.05)。

正常條件下，植物細胞內游離脯氨酸含量很低，但遇到逆境脅迫時，游離脯氨酸變化積累，并且積累值指數與植物的抗逆性有關。由表6可以看出，低溫處理過程中，灰實7和灰實8的游離脯氨酸含量變化幅度較大，波動范圍達到3.89～3.93 mg/g；灰實2和灰棗的變化較小，波動范圍為3.22～3.31 mg/g。當處理溫度為初始對照溫度CK時，灰實2和灰實8的與灰棗呈顯著差異(P<0.05)，灰實7與灰棗呈極顯著差異(P<0.01)。當處理溫度降至-25 ℃時，灰棗及其優(yōu)系的游離脯氨酸含量均達到最大值，其中灰實7與灰棗呈顯著差異(P<0.05)，灰實8與灰棗呈極顯著差異(P<0.01)，灰實2與灰棗的差異不顯著。當處理溫度為-30 ℃時開始明顯下降，至-35 ℃時有所上升，之后開始下降，整體來看，低溫處理下灰棗及其優(yōu)系的游離脯氨酸含量變化表現(xiàn)為先上升后下降的變化趨勢。

表4 灰棗不同優(yōu)系在低溫處理后SP多重比較

表5 灰棗不同優(yōu)系在低溫處理后MDA多重比較

2.4 抗寒指標間的相關性分析

從表7可以看出，不同抗寒性指標間具有一定的相關性。其中，可溶性糖與相對電導率(r=0.625)呈極顯著正相關；可溶性蛋白與丙二醛(r=-0.524)、相對電導率(r=-0.540)呈極顯著負相關。丙二醛與游離脯氨酸(r=0.522)、相對電導率(r=0.699)呈極顯著正相關；游離脯氨酸與相對電導率(r=0.280)呈顯著正相關；其余各抗寒性指標間雖有相關關系，但相關系數較低，相關性不顯著。

表6 灰棗不同優(yōu)系在低溫處理后FP多重比較

表7 各抗寒性指標間的相關性分析

注：*表示5 %顯著水平；**表示1 %極顯著水平,下同。

Note: * Correlation is significant at the 5 % level; **Correlation is significant at the 1 % level. The same as below.

表8 灰棗不同優(yōu)系的抗寒性綜合評判

2.5 抗寒性綜合評價

植物的抗寒生理機制是由多種因素綜合作用的結果，只有結合多個抗寒指標才能真正反映植物的抗寒能力。為了更準確的評價灰棗優(yōu)系的抗寒性，本研究采用隸屬函數法，綜合REC、WSS、SP、MDA、FP等多種抗寒因子，用平均隸屬度對灰實2、灰實7、灰實8及灰棗的抗寒能力進行綜合評價。平均隸屬度值越高，說明其抗寒能力越強，反之抗寒能力越弱。研究結果顯示，灰棗及其優(yōu)系的抗寒因子綜合隸屬度在0.456～0.482之間，灰實2的平均隸屬度最高(0.482)，灰實7最低(0.456)。綜合結果表明，灰棗及其優(yōu)系的抗寒性綜合排序為：灰實2>灰棗>灰實8>灰實7(表8)。

3 討 論

3.1 相對電導率與抗寒性的關系分析

低溫處理過程中，溫度越低，灰棗及其優(yōu)系的枝條組織的電解質外滲量越大，相對電導率增幅越明顯。研究顯示，人為低溫處理后，灰棗及其優(yōu)系枝條組織的電解質外滲率隨溫度下降而表現(xiàn)出急劇上升的變化趨勢。Jan[24]認為，低溫傷害使植物細胞的膜脂流動性及細胞的膜透性增加，細胞液外滲導致待測溶液電解質增加，最終導致電導率增大。本試驗結果與Jan對于低溫脅迫傷害對植物生理機制的影響研究相同。單以灰棗及其優(yōu)系組織細胞接近全透時的低溫完全致死溫度作為衡量棗樹抗寒性能大小的標準，灰實2的抗寒性能明顯優(yōu)于灰棗、灰實8、灰實7。

3.2 各抗寒性生理指標間的關系分析

可溶性糖是調節(jié)細胞質體內部滲透勢、降低水勢的主要因子之一，通常條件下，植物體內可溶性糖的含量增加表明植物抗寒性的增強。研究結果顯示，低溫處理過程中，灰棗及其優(yōu)系的可溶性糖含量呈現(xiàn)出先升后降的“n”型單峰曲線，且達到峰值時的處理溫度均在-30 ℃之間。其中，灰實8在-30 ℃時的可溶性糖含量極顯著高于灰實2、灰實7和灰棗。Sakai[25]認為植物組織細胞內可溶性糖的含量較高則代表該植物抗寒性較好，本研究對灰棗及其優(yōu)系的抗寒性能綜合評價結果顯示這與Sakai的研究結論一致。

低溫脅迫對植物細胞蛋白質的影響變化主要表現(xiàn)在可溶性蛋白和酶類的變化以及產生抗寒性蛋白?？扇苄缘鞍拙哂休^強的親水性，它能明顯增強細胞的持水力，而植物細胞內可溶性蛋白含量的增加可以束縛更多的自由水，減少胞內自由水因低溫結冰膨脹而對原生質體造成的傷害，從而提高植物的抗寒性。本研究結果顯示，低溫處理過程中，灰棗及其優(yōu)系的可溶性蛋白含量變化規(guī)律明顯，表現(xiàn)出一致的變化趨勢，均在-25 ℃附近時測定含量達到最大值。這與玉蘇甫等[26]對梨砧木抗寒性的研究結果相似。

在低溫逆境下植物遭受傷害與活性氧積累誘發(fā)的膜脂過氧化作用密切相關。丙二醛是膜脂過氧化過程中活性氧簇(ROS, Reactive oxygen species與生物膜上的磷脂、酶和膜受體相關的多不飽和脂肪酸的側鏈及核酸等大分子物質發(fā)生脂質過氧化反應形成過氧化最終產物。丙二醛對質膜有毒害作用，膜透性直接反映細胞的損傷程度[27]。因此，低溫處理時，丙二醛含量變化通常作為衡量植物抗寒能力的一個重要生理指標。本研究結果顯示，不同棗樹優(yōu)系枝條測得的丙二醛含量呈“低-高-低-高”波浪式變化，抗寒性強的灰棗優(yōu)系丙二醛含量上升較早，下降也較早。其中，灰實2和灰棗在-35 ℃時最高值達到11 μmol/g以上，灰實7和灰實8在-40 ℃時最高值為10.42～10.71μmol/g。這說明，抗寒性較強的優(yōu)系以通過減少丙二醛的滯留時間來減少因低溫脅迫引起的丙二醛積累對植物細胞造成的傷害。

游離脯氨酸由于其極強的親水性，能夠調節(jié)滲透勢，穩(wěn)定原生質體及組織的代謝過程，因而能提高滲透壓，降低冰點，增強植物抗寒性。本研究結果顯示，灰實7和灰實8的游離脯氨酸含量波動范圍較大，為3.89～3.93 mg/g；灰實2和灰棗的波動范圍較小，為3.22～3.31 mg/g。當溫度降至-25 ℃時，灰棗及其優(yōu)系的游離脯氨酸含量均達到最大值，當處理溫度為-30 ℃時開始明顯下降，至-35 ℃時有所上升，之后開始下降。以游離脯氨酸的含量變化作為衡量植物抗寒性能力的標準，灰實2和灰棗的抗寒性較好，灰實7和灰實8的抗寒性較差。

低溫脅迫可對植物細胞內相對電導率、可溶性糖、可溶性蛋白、丙二醛含量及脯氨酸含量等多項生理指標產生影響，而這些生理指標正好也反映了植物的抗寒性能。綜合研究說明，不同抗寒性指標間具有一定的相關性?？扇苄蕴桥c丙二醛、相對電導率呈正相關，可溶性糖與相對電導率呈極顯著(P<0.01)正相關(r=0.625)，與可溶性蛋白、游離脯氨酸呈負相關。可溶性蛋白與游離脯氨酸呈正相關，與丙二醛(r=-0.524)、相對電導率(r=-0.540)呈極顯著(P<0.01)負相關。丙二醛與游離脯氨酸(r=0.522)、相對電導率(r=0.699)呈極顯著(P<0.01)正相關。游離脯氨酸與相對電導率呈顯著(P<0.05)正相關。其余各抗寒性指標間雖有相關關系，但相關系數較低，相關性不顯著?；覍?、灰實7、灰實8和灰棗的綜合隸屬度在0.40～0.59之間，分別為0.482、0.478、0.456和0.476。

4 結 論

按照平均隸屬度抗寒性分級法對灰棗及其優(yōu)系抗寒性分級：灰實2、灰實7、灰實8和灰棗的抗寒性均為Ⅲ級，抗寒能力為中抗，其抗寒性能力大小綜合排序為：灰實2>灰棗>灰實8>灰實7，其中推薦灰實2作為抗寒性優(yōu)良品種。