環(huán)指蛋白181在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中表達(dá)及其臨床意義

王 磊 張 珉 王旭光 王翠芳 張 玲

(沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室，遼寧 沈陽(yáng) 110034)

環(huán)指蛋白(RN)181又稱(chēng)HSPC238，屬于RN超家族成員，具有RING型結(jié)構(gòu)域及E3泛素鏈接酶活性。在肝癌、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤等多種腫瘤中，RN181可分別通過(guò)絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)/細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)信號(hào)通路或泛素化途徑調(diào)控腫瘤的進(jìn)展。乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤〔1，2〕，其中以浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌為最常見(jiàn)病理類(lèi)型，RN181在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義目前尚無(wú)報(bào)道。本研究探討RN81在浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮的作用及其臨床診斷意義。

1 材料與方法

1.1臨床資料 2015年1月至2015年12月經(jīng)病理確診的女性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌標(biāo)本79例，另選取36例經(jīng)病理確診的乳腺增生組織為對(duì)照。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌術(shù)前均未行放療、化療及內(nèi)分泌治療。79例乳腺癌標(biāo)本中，年齡25～82歲，平均52.8歲，組織學(xué)分級(jí)參考諾丁漢聯(lián)合組織學(xué)分級(jí)；分子分型：luminalA型〔雌激素受體(ER)+和(或)孕激素受體(PR)+和人表皮生長(zhǎng)因子受體(HER)2-〕28例，luminalB型〔ER+和(或)PR+和HER2+〕30例，HER2過(guò)表達(dá)型(ER-，PR-和HER2+)10例，三陰型(ER-，PR-和HER2-)11例。

1.2試劑 鼠抗人RN181單克隆抗體(購(gòu)自美國(guó)Santa cruz公司)，ElivisionTM Plus即用型免疫組化試劑盒(鼠/兔)、磷酸鹽緩沖液(PBS)、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑、動(dòng)物非免疫血清(羊)等均購(gòu)自福州邁新生物開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3方法 標(biāo)本均經(jīng)包埋，制成4 μm厚切片。標(biāo)本均在同一條件下進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，具體步驟如下：經(jīng)脫蠟，脫苯，水化后，首先用3%的過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，高溫高壓修復(fù)抗原，然后使用RN181一抗(1∶600)4℃濕盒內(nèi)孵育過(guò)夜，次日按Elivision試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素復(fù)染。PBS代替一抗。

1.4結(jié)果判定 免疫組化結(jié)果采用雙盲法由兩位病理醫(yī)師進(jìn)行評(píng)定。判定標(biāo)準(zhǔn)：每張切片在高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野(×400)，隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。根據(jù)染色強(qiáng)度(0，沒(méi)有染色；1，淺黃色；2，棕色；3，深棕色)及著色比例0分(陰性著色)；1分(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1%～10%)；2分(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)11%～50%)；3分(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%～80%)；4分(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)81%～100%)，兩項(xiàng)計(jì)分相乘即為最終得分(0～12分)。得分<6分為低表達(dá)，≥6分為高表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法分析。

2 結(jié) 果

2.1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 RN181的表達(dá)主要位于胞質(zhì)，見(jiàn)圖1。79例乳腺癌組織中36例(46%)低表達(dá)，36例乳腺增生組織中30例(83%)高表達(dá)；二者差異顯著(P=0.003)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)低于未轉(zhuǎn)移(P=0.000)，RN181在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)與年齡(P=0.918)、腫瘤直徑(P=0.817)、組織學(xué)分級(jí)(P=0.150)均無(wú)明顯相關(guān)性，見(jiàn)表1。

2.2RN181在乳腺癌不同分子分型中的表達(dá)及其關(guān)系 RN181在各分子分型中的組間表達(dá)率存在差異性(P=0.001)，luminalB型中RN181高表達(dá)低于其他3種亞型。見(jiàn)表2。

圖1 RN181免疫組織化學(xué)染色Elivision法結(jié)果(×400)

表1 RN181的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系〔n(%)〕

表2 RN181的表達(dá)與乳腺癌分子分型的關(guān)系〔n(%)〕

與luminalA相比：1)P<0.001；與luminalB相比：2)P<0.05

3 討 論

RN181是由人類(lèi)基因LOC51255編碼的含有153個(gè)氨基酸的小分子蛋白，RN家族成員與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)〔3，4〕，具有E3泛素蛋白連接酶活性，并可與血小板整聯(lián)蛋白aⅡbβ3的KVGFFKR結(jié)構(gòu)域相結(jié)合〔5〕。整聯(lián)蛋白相關(guān)信號(hào)通路與泛素化途徑在多種腫瘤組織中發(fā)揮調(diào)控作用〔6～8〕，而RN181可能將二者結(jié)合在一起共同調(diào)控腫瘤進(jìn)展?，F(xiàn)有研究報(bào)道RN181在不同腫瘤進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮不同作用。在直腸癌的研究中，沉默RN181蛋白可激活MAPK/ERK信號(hào)通路促進(jìn)SW480細(xì)胞增殖〔9〕。RN181在肝癌組織中表達(dá)低于癌旁，通過(guò)抑制ERK/MAPK信號(hào)通路抑制肝癌細(xì)胞增殖，而干擾肝癌細(xì)胞中的RN181后可以解除增殖抑制，提示RN181具有抑制肝細(xì)胞癌生長(zhǎng)的作用〔10，11〕。Tan等〔12〕發(fā)現(xiàn)RN181通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑與血紅素加氧酶(HMOX)1，核糖體蛋白(RP)S27A，泛素B和金屬硫蛋白(MT)2A這4種蛋白相互作用發(fā)揮腫瘤抑制作用〔12〕。RN181作為E3泛素連接酶通過(guò)抑制核因子(NF)-κB信號(hào)通路抑制彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)〔13〕，由此可見(jiàn)，RN181在腫瘤的調(diào)控中可能發(fā)揮抑癌作用，其具體分子機(jī)制尚需深入研究。本研究結(jié)果提示，RN181在浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中可能發(fā)揮抑癌作用，但其具體分子機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

乳腺癌具有高度異質(zhì)性〔14～17〕，Peroul等〔18〕最先提出了乳腺癌分子分型的概念，其將乳腺癌分為5種亞型：管腔A型〔luminalA：ER+和(或)PR+和HER2-〕，管腔B型〔luminalB：ER+和(或)PR+和HER2+〕，HER2+型(ER-，PR-和HER2+)，基底樣型(BLBC)及其他。根據(jù)分子分型制定乳腺癌局部及全身治療策略十分重要。一方面，乳腺癌的分子分型能充分反映其生物學(xué)行為，明確個(gè)體分子的特征，為乳腺癌患者判斷預(yù)后及個(gè)體化治療提供基礎(chǔ)，對(duì)于luminal型患者手術(shù)治療可提前，內(nèi)分泌治療是基礎(chǔ)〔19〕。因此尋找luminal型的敏感、特異性指標(biāo)顯得尤為重要。另一方面，在2011年St.Gallen國(guó)際乳腺癌會(huì)議上在原有分子分型指標(biāo)上新加入了KI67，在2013年St.Gallen國(guó)際乳腺癌會(huì)議上又將KI67的比例進(jìn)行調(diào)整〔20〕。由此可見(jiàn)乳腺癌的分子分型在不斷細(xì)化，但目前的分子分型標(biāo)志物仍然具有局限性，尚不能完全滿足診治需求。本實(shí)驗(yàn)提示RN181在luminalB型中可能為特異性低表達(dá)，可能作為新的乳腺癌分子分型特異性標(biāo)志物，具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。