傳染性單核細(xì)胞增多癥外周血淋巴細(xì)胞亞群和免疫球蛋白變化特點(diǎn)分析

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(西安市兒童醫(yī)院感染二科，陜西 西安 710003)

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是屬于皰疹病毒科嗜淋巴細(xì)胞病毒群的一員，好發(fā)于兒童及青少年群體，且對所有人群均普遍易感，屬于終生攜帶型病毒。有文獻(xiàn)指出，我國超過8歲的人群中約90%其血清EBV均為陽性[1-2]。臨床上最常見的初次EBV感染多為傳染性單核細(xì)胞增多癥，多呈良性自限性，具有較好的臨床預(yù)后。但是，若患者長期處于免疫抑制、潛伏感染或遺傳缺陷的刺激下，EBV感染仍可出現(xiàn)淋巴瘤、慢性活動性EBV感染或EBV相關(guān)噬血細(xì)胞綜合征，其臨床預(yù)后較差。據(jù)相關(guān)研究顯示，EBV可顯著降低感染者的免疫功能，若是感染者本身免疫機(jī)制存在缺陷，感染EBV后病情則更容易惡化，具有較高的臨床病死率[3-4]。EBV可通過感染自然殺傷細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞導(dǎo)致機(jī)體的免疫機(jī)制出現(xiàn)紊亂，故不同感染宿主對EBV存在不一樣的應(yīng)答反應(yīng)，出現(xiàn)不同的臨床表現(xiàn)。本研究通過我院診治的40例感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒作為研究組，并選取同期體檢健康兒童30例作為對照組分析兒童EBV感染致傳染性單核細(xì)胞增多癥外周血淋巴細(xì)胞亞群和免疫球蛋白變化特點(diǎn)。

1資料與方法

1.1一般資料

將西安市兒童醫(yī)院2017年1至12月收治的40例感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒作為研究組，選取同期體檢健康兒童30例作為對照組。研究組中男21例，女19例；年齡為3～8歲，平均為(6.01±1.34)歲。對照組中男15例，女15例；年齡為3～9歲，平均為(6.25±1.40)歲。兩組的性別、年齡一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

研究組患兒符合《兒童主要非腫瘤性EB病毒感染相關(guān)疾病的診斷和治療原則建議》[5]中的臨床診斷及實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)。臨床癥狀診斷標(biāo)準(zhǔn)：①頸部淋巴結(jié)腫大；②肝脾腫大；③發(fā)熱；④咽部或扁桃體發(fā)炎；⑤眼瞼部水腫。實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)：①外周血清抗EBV衣殼抗原IgG抗體(Epstein-Barr virus-virocapsid antigen-IgG，EBV-VCA-IgG)滴度顯著增加超過4倍；②外周血清抗EBV-核抗原-IgG陰性，抗EBV-VCA-IgG及抗EBV-病毒衣殼抗原陽性；③外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)升高超過5.0×109/L和(或)異性淋巴細(xì)胞分?jǐn)?shù)超過0.10；④外周血清抗EBV-VCA-IgG陰性，然而EBV-VCA-IgG抗體陽性，同時(shí)表現(xiàn)為低親和力抗體。同時(shí)符合上述臨床癥狀診斷標(biāo)準(zhǔn)中的任意三項(xiàng)且實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)中的第三項(xiàng)即可診斷為感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥。對照組兒童均無家族遺傳性疾病、急慢性疾病及自身免疫性疾病。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)

①具有自身免疫性疾病或者免疫缺陷性疾病；②具有骨髓癌、淋巴癌等各種惡性腫瘤性疾?。虎劬哂羞z傳性疾病、先天畸形或先天生理缺陷；④精神異常，具有精神疾病或精神病史者。

1.4外周血淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白檢測方法

抽取兩組兒童早晨空腹靜脈血2mL，采用乙二胺四乙酸行抗凝處理后，通過流式細(xì)胞儀[由貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司提供]行外周血淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞)計(jì)數(shù)，并通過CXP 2.0系統(tǒng)行圖像分析。抽取兩組兒童早晨空腹靜脈血2mL，凝固后行離心處理，離心速度為3 400r/min，離心半徑為15cm，離心時(shí)間為10min，充分分離血清，通過免疫散射比濁法測量兩組兒童的IgA、IgG、IgM表達(dá)水平。本研究中所用的檢測試劑盒均由貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司提供。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1兩組兒童免疫球蛋白表達(dá)水平的比較

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，研究組免疫球蛋白IgA、IgG水平均較對照組明顯升高(均P<0.01)；兩組IgM水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2兩組兒童外周血血常規(guī)及淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)的比較

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，研究組的淋巴細(xì)胞、CD3+、CD8+淋巴細(xì)胞及白細(xì)胞數(shù)量均較對照組顯著升高(均P<0.05)；研究組的B淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著低于對照組(P<0.05)；兩組的CD4+和自然殺傷細(xì)胞數(shù)量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見表2。

表2 兩組兒童外周血淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)的比較結(jié)果

3討論

3.1感染EBV患兒對外周血血常規(guī)及淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)的影響

本研究發(fā)現(xiàn)感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒的淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增加，其中尤以T淋巴細(xì)胞最為明顯，而T淋巴細(xì)胞中以CD8+細(xì)胞的瘋狂增加最為明顯。本研究中研究組患兒CD8+細(xì)胞的計(jì)數(shù)是正常健康兒的12倍，與相關(guān)文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道相一致。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒的外周血中CD3+淋巴細(xì)胞與CD8+淋巴細(xì)胞同樣存在異常增加的現(xiàn)象。由此可見感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒的機(jī)體會在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生強(qiáng)烈的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，造成其機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生大量的T淋巴細(xì)胞，引起外周血的T淋巴細(xì)胞濃度升高。有研究指出，大部分感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒會發(fā)生T淋巴細(xì)胞擴(kuò)增活化，而CD8+淋巴細(xì)胞約占80%，CD8+淋巴細(xì)胞是一種具有強(qiáng)大的溶解能力的細(xì)胞，通過識別EBV感染的B淋巴細(xì)胞并將其溶解殺死，從而抑制EBV感染的B淋巴細(xì)胞的增殖分化；且由于此溶解過程分泌出大量的細(xì)胞因子將會造成頸部淋巴結(jié)腫大、肝脾腫大、發(fā)熱、咽部或扁桃體發(fā)炎、眼瞼部水腫等臨床癥狀[8-9]。目前臨床上普遍認(rèn)為CD8+淋巴細(xì)胞作用機(jī)制是其大量增殖后分泌出大量的TRAIL、CD95-CD95L、穿孔素、腫瘤壞死因子及顆粒酶等方式溶解消滅EBV感染的B淋巴細(xì)胞，因此CD+19的B淋巴細(xì)胞于急性感染期內(nèi)會顯著減少[10-11]。本研究發(fā)現(xiàn)，感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒于急性發(fā)作期其自然殺傷細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均無明顯差異，與相關(guān)文獻(xiàn)[12-13]相一致。目前臨床上尚未明確自然殺傷細(xì)胞計(jì)數(shù)及CD4+淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化是否與患兒自身免疫系統(tǒng)、遺傳、病毒、環(huán)境等因素有關(guān)，有待進(jìn)一步證實(shí)。

3.2感染EBV患兒對免疫球蛋白表達(dá)水平的影響

本研究發(fā)現(xiàn)研究組免疫球蛋白IgA、IgG均顯著高于對照組(均P<0.05)，可見感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒的機(jī)體內(nèi)存在劇烈的免疫應(yīng)激反應(yīng)。據(jù)相關(guān)研究顯示，EBV抗原長久隱藏于機(jī)體內(nèi)是造成傳染性單核細(xì)胞增多癥最直接致病原因之一，由于EBV抗原可誘導(dǎo)機(jī)體分泌出特異性抗體，并結(jié)合呈EBV抗原-抗體復(fù)合物，同時(shí)EBV抗原可刺激免疫細(xì)胞的異常增殖，引發(fā)免疫瀑布連鎖反應(yīng)，造成更嚴(yán)重的自身免疫系統(tǒng)損傷問題[14-15]。但是，關(guān)于自身免疫系統(tǒng)受損的問題是否直接由感染EBV引起目前臨床上尚未得到明確的認(rèn)可，有待進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，CD8+淋巴細(xì)胞數(shù)量急劇增加可能是感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒淋巴細(xì)胞急劇增加的重要因素，且患兒免疫球蛋白IgA、IgG急劇增加，因此通過檢測淋巴細(xì)胞亞群對診斷感染EBV致傳染性單核細(xì)胞增多癥具有一定意義。