彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤治療后血清β2-MG VEGF與LDH水平變化及其臨床意義

非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin's lymphoma，NHL）是一類高度異質(zhì)性淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤類型，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DL?BCL）為NHL常見亞型，約占全部NHL的35%［1］。DL?BCL在臨床表現(xiàn)、分子特點(diǎn)、形態(tài)特點(diǎn)、流行病學(xué)、免疫學(xué)表型等方面均存在明顯異質(zhì)性，DLBCL患者對標(biāo)準(zhǔn)化R-CHOP方案化療（利妥昔單抗環(huán)磷酰胺+多柔比星+長春地辛+潑尼松）治療效果較好，但仍有部分DLBCL患者對R-CHOP方案化療不敏感，導(dǎo)致治療失?。?］。β2-微球蛋白（β2 microglobulin，β2-MG）是由淋巴細(xì)胞和部分有核細(xì)胞分泌的小分子蛋白質(zhì)，在骨髓增生異常綜合征和白血病等惡性血液系統(tǒng)疾病中均可見β2-MG表達(dá)顯著上調(diào)，可能與血液系統(tǒng)疾病進(jìn)展存在關(guān)聯(lián)［3］。乳酸脫氫酶（lactate dehy?drogenase，LDH）廣泛存在于人體組織的糖酵解酶類，正常組織惡變后，腫瘤細(xì)胞代謝障礙、細(xì)胞損傷所致癌細(xì)胞基因調(diào)節(jié)紊亂可導(dǎo)致LDH合成增多［4］。Evens等［5］研究顯示，血清LDH水平的變化與癌細(xì)胞增殖活性呈正相關(guān)，高表達(dá)LDH通常提示預(yù)后不良。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）為促血管生成的關(guān)鍵因子，可提升血管通透性，促進(jìn)血漿蛋白、纖維蛋白經(jīng)血管外滲，造成細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生改變，誘導(dǎo)微血管形成，目前已被證實(shí)系促進(jìn)腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵刺激因子［6］。但β2-MG、VEGF及LDH水平在DLBCL中的表達(dá)和臨床價值尚未完全明確。

1 材料與方法

1.1 病例資料

選取2015年2月至2017年7月四川省人民醫(yī)院收治的89例DLBCL患者作為研究對象（DLBCL組），其中男性58例，女性31例；年齡為18～78歲，平均年齡（50.5±17.6）歲。入組標(biāo)準(zhǔn)：符合世界衛(wèi)生組織（WHO）淋巴血液腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)中DLBCL診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］；經(jīng)病理組織學(xué)確診；年齡≥18歲；初治患者，采血前1個月未接受免疫抑制劑或其他藥物治療；無家族遺傳病史；患者知情且自愿簽署研究同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心肝腎肺器質(zhì)性功能障礙；合并其他惡性腫瘤；合并急慢性感染；嚴(yán)重精神疾病和腦血管疾病；入組前接受過化療；合并可能引起血清β2-MG、VEGF和LDH水平升高的其他疾?。蝗焉锘虿溉槠谂?；無法配合研究。依據(jù)國際Ann Arbor分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期24例，Ⅲ期37例，Ⅳ期16例；伴骨髓侵犯24例；伴B癥狀52例。選擇同期至四川省人民醫(yī)院行體格檢查的40例正常健康人群作為對照組，心肝腎肺功能均正常，無血液系統(tǒng)惡性腫瘤，無家族病史，患者知情且配合研究。其中男性27例，女性13例；年齡為19～76歲，平均年齡（51.1±16.5）歲。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 DLBCL組均接受參照DLBCL治療指南［8］行R-CHOP方案或CHOP方案（環(huán)磷酰胺+多柔比星+長春地辛+潑尼松）化療。CHOP方案：d1，環(huán)磷酰，750 mg/m2，多柔比星50 mg/m2，長春地辛3 mg/m2；潑尼松50 mg bid d1～d5。利妥昔單抗聯(lián)合CHOP方案，在CHOP方案化療前1 d均給予利妥昔單抗靜滴，375 mg/m2，以3周為1個化療周期，所有患者均至少接受6個周期化療。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)測定 對照組于體格檢查單日空腹采集外周肘靜脈血3 mL，DLBCL組于入院次日和化療完成后空腹采集外周肘靜脈血3 mL，離心后（3 000 r/min×15 min，離心半經(jīng)15 cm）分離血清低溫保存待測，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清VEGF水平，試劑盒購自福州邁新生物科技有限公司；采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法測定血清β2-MG水平，采用美國Beckman公司Axsym型全自動免疫分析儀及其配套試劑進(jìn)行檢測；采用速率法測定血清LDH水平，LX20型全自動生化分析儀購自美國Beckman公司，嚴(yán)格參照試劑使用說明進(jìn)行操作。臨床病理資料采集方面，DLBCL組均于入院后采集。

1.2.3 患者臨床病理資料 包括年齡、性別、腫塊大小、典型B癥狀、原發(fā)部位、國際Ann Arbor分期、骨髓侵犯、國際預(yù)后指數(shù)（international prognostic index，IPI）評分和治療反應(yīng)等。

1.2.4 治療效果評定 DLBCL組均于化療6個周期后參照美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）第2版DLBCL診療指南評定治療效果［9］，分為完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）和疾病進(jìn)展（partial disease，PD），以CR+PR為治療有效組（n=71），SD+PD為治療無效組（n=18）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

全部數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，各因子相互關(guān)系及其與治療有效率的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析法。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 入院時DLBCL組與對照組血清β2-MG、VEGF及LDH水平比較

入院時DLBCL組血清β2-MG、VEGF及LDH水平均高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1～3）。

2.2 DLBCL組化療前后血清β2-MG、VEGF及LDH水平比較

化療后DLBCL組患者血清β2-MG、VEGF及LDH水平均降低，與同組化療前比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖4～6）。

2.3 DLBCL組不同化療方案患者化療后血清β2-MG、VEGF及LDH水平比較

行R-CHOP方案的DLBCL組患者化療后血清β2-MG、VEGF及LDH水平略低于CHOP方案，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖7～9）。

2.4 DLBCL組不同化療方案患者治療有效率的比較

行R-CHOP方案DLBCL患者治療有效率為93.48%，行CHOP方案DLBCL患者治療有效率為79.07%，行R-CHOP方案患者治療有效率明顯高于CHOP方案患者（P＜0.05，表1）。

圖1 兩組患者血清β2-MG比較

圖2 兩組患者血清VEGF比較

圖3 兩組患者血清LDH水平比較

圖4 DLBCL患者化療前后血清β2-MG比較

圖5 DLBCL患者化療前后血清VEGF比較

圖6 DLBCL患者化療前后LDH水平比較

圖7 不同化療方案患者化療后血清β2-MG比較

圖8 不同化療方案患者化療后血清VEGF比較

圖9 不同化療方案患者化療后血清LDH水平比較

表1 DLBCL患者不同化療方案治療有效率的比較 n（%）

2.5 DLBCL組患者入院血清β2-MG、VEGF及LDH水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

不同年齡、性別、腫塊大小、腫瘤原發(fā)部位的患者入院血清β2-MG、VEGF及LDH水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），伴典型B癥狀患者血清LDH水平高于未伴B癥狀患者（P＜0.05），Ann Arbor分期為Ⅲ～Ⅳ期患者血清β2-MG、VEGF及LDH水平高于分期為Ⅰ～Ⅱ期患者（P＜0.05），伴骨髓侵犯患者血清β2-MG、VEGF及LDH水平高于未伴骨髓侵犯患者（P＜0.05），IPI指數(shù)為高危患者血清β2-MG、VEGF及LDH水平高于低?；颊撸≒＜0.05），治療反應(yīng)為無效患者血清β2-MG、VEGF及LDH水平高于有效患者（P＜0.05，表2）。

2.6 DLBCL組患者入院血清β2-MG、VEGF及LDH水平相互關(guān)系及其與治療效果相關(guān)性分析

DLBCL組患者血清β2-MG、VEGF及LDH水平表達(dá)三者互相呈正相關(guān)，同時三者與治療有效率的對比均呈負(fù)相關(guān)，其中LDH水平與治療有效率相關(guān)度最高（P＜0.05，表3）。

表2 DLBCL患者入院血清β2-MG、VEGF及LDH水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 （±s）

表2 DLBCL患者入院血清β2-MG、VEGF及LDH水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 （±s）

臨床資料n β2-MG（mg/L）VEGF（pg/mL）LDH（U/L）年齡（歲）＞60≤60 24 65 t P 性3.56±1.72 3.52±1.68 0.099 0.921 352.74±110.63 349.88±105.64 0.111 0.911 309.65±80.74 301.87±93.52 0.360 0.719別男女tP 58 31 3.54±1.69 3.55±1.72 0.026 0.979 350.98±120.66 352.14±109.79 0.044 0.964 310.75±86.26 307.52±75.45 0.175 0.861腫塊大小（cm）≥10＜10 t P 20 69 3.63±0.23 2.96±0.74 3.979＜0.001 360.55±98.65 294.25±40.97 4.452＜0.001 320.25±68.74 275.26±59.46 2.875 0.005典型B癥狀是否tP原發(fā)部位結(jié)內(nèi)結(jié)外t P Ann Arbor分期Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期t P 52 37 64 25 36 53 3.54±0.36 3.51±0.53 0.318 0.751 3.55±0.47 3.57±0.54 0.172 0.863 3.01±0.68 3.76±0.41 6.487＜0.001 351.25±60.75 347.52±71.29 0.279 0.780 348.98±68.41 356.25±59.44 0.466 0.641 298.65±42.26 376.58±52.74 7.394＜0.001 319.56±46.25 271.25±50.71 4.665＜0.001 319.56±50.74 325.65±47.96 0.516 0.606 276.65±50.99 330.45±46.84 5.130-骨髓侵犯是否tP 24 65 3.82±0.65 2.97±0.41 7.335＜0.001 372.25±49.64 301.25±50.06 5.951＜0.001 329.52±39.65 286.51±25.78 5.987＜0.001 IPI指數(shù)低危高危38 51 t P 2.86±0.35 3.96±0.47 12.130＜0.001 296.55±48.76 376.61±50.58 7.499＜0.001 286.26±30.98 330.74±43.26 5.388＜0.001

表2 DLBCL患者入院血清β2-MG、VEGF及LDH水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 （±s）（續(xù)表2）

表2 DLBCL患者入院血清β2-MG、VEGF及LDH水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 （±s）（續(xù)表2）

臨床資料治療效果有效無效n β2-MG（mg/L）VEGF（pg/mL）LDH（U/L）71 18 t P 2.63±0.42 3.82±0.27 11.410＜0.001 286.55±53.36 380.74±51.25 6.740＜0.001 276.58±45.99 326.84±50.06 4.068＜0.001

表3 DLBCL患者入院血清β2-MG、VEGF及LDH水平相互關(guān)系及其與治療效果的相關(guān)性分析

3 討論

DLBCL為高度異質(zhì)性、侵襲性NHL，近年來發(fā)病率呈上升趨勢。其生物學(xué)行為呈中度惡性，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化治療患者5年生存率為40%［10］。目前，尚未完全明確DLBCL治療反應(yīng)及預(yù)后的相關(guān)影響因素，臨床分期、器官組織侵犯情況及年齡可能與腫瘤進(jìn)展有關(guān)［11］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，淋巴瘤血清腫瘤標(biāo)志物，如LDH和VEGF等在淋巴瘤疾病進(jìn)展及預(yù)后評估中發(fā)揮重要作用［12］。VEGF可選擇性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜酪氨酸激酶受體，誘導(dǎo)病理性血管生成。王雪蓮等［13］研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌、肺癌、乳腺癌等多種實(shí)體瘤患者血清中均可檢出VEGF高表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL患者血清VEGF水平明顯高于正常健康人群，與王艷等［14］研究結(jié)果相一致。且進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，VEGF與DLBCL臨床分期、骨髓侵犯、IPI指數(shù)和治療反應(yīng)均存在一定的關(guān)聯(lián)，臨床分期晚、伴骨髓侵犯、IPI指數(shù)為高危、治療無效的DLBCL患者血清VEGF表達(dá)水平均較高，提示DLBCL患者VEGF高表達(dá)與DLBCL疾病進(jìn)展、侵襲性病理狀態(tài)、治療低反應(yīng)性和不良預(yù)后存在一定的關(guān)聯(lián)，主要與持續(xù)VEGF高表達(dá)可誘導(dǎo)淋巴瘤血管新生，提高癌細(xì)胞增殖活性而造成其侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有關(guān)，因此可作為疾病監(jiān)測的有效指標(biāo)。

β2-MG為細(xì)胞膜相容性抗原組成部分，屬于低分子蛋白質(zhì)，正常健康人群血清β2-MG含量較為穩(wěn)定，大部分有核細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞均可合成β2-MG，尤其以單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主［15］?？络娴龋?6］研究表明，β2-MG變化與癌細(xì)胞負(fù)荷有關(guān)，同時參與腫瘤增殖和浸潤過程。多發(fā)性骨髓瘤、白血病等血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者均可檢出β2-MG表達(dá)上調(diào)［17］。本研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL組患者血清β2-MG水平明顯高于正常健康人群，考慮可能與DLBCL組患者淋巴細(xì)胞自身可合成及分泌大量β2-MG有關(guān)。同時本研究還發(fā)現(xiàn)，DLBCL組患者治療后血清β2-MG水平明顯降低，且患者β2-MG變化與DLBCL臨床分期、骨髓侵犯、IPI指數(shù)和治療反應(yīng)有關(guān)，臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、伴骨髓侵犯、IPI指數(shù)較高、治療反應(yīng)較低的患者血清β2-MG表達(dá)水平較高，與胡利娟等［18］研究結(jié)論相符，表明DLBCL組患者β2-MG水平的變化可作為評定其惡性程度、腫瘤侵襲性行為和治療反應(yīng)的依據(jù)。LDH水平目前為評定NHL患者預(yù)后的有效指標(biāo)，其為糖酵解酶，在人體肝臟、腎臟、心肌、胰腺和骨骼肌等組織內(nèi)表達(dá)水平均較高，在細(xì)胞壞死或惡變時，LDH合成增多，導(dǎo)致血清LDH水平表達(dá)上調(diào)。Loriaut等［19］研究表明，淋巴瘤患者血清LDH水平的變化與細(xì)胞增殖活性呈正相關(guān)，癌細(xì)胞無限增殖引起LDH升高并刺激周圍組織，導(dǎo)致反應(yīng)性LDH大量釋放，促使血清LDH含量上升，提示LDH含量變化與淋巴瘤惡性程度相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL組患者血清LDH水平高于正常健康人群，且在治療后LDH水平明顯降低，同時還與DLBCL典型B癥狀、骨髓侵犯、腫瘤分期、治療反應(yīng)和IPI指數(shù)均有關(guān)，血清LDH增高的DL?BCL患者常伴典型B癥狀及骨髓侵犯，且腫瘤侵襲程度較高、治療反應(yīng)較低、IPI指數(shù)較高，提示血清LDH水平可能是預(yù)測DLBCL分期、評估療效和預(yù)后的依據(jù)。另外，血清β2-MG、VEGF及LDH水平三者表達(dá)均呈正相關(guān)，且三者與DLBCL組患者治療有效率均呈負(fù)相關(guān)，可將三者作為DLBCL疾病監(jiān)測和療效評估的重要依據(jù)。采用血清β2-MG、VEGF和LDH水平作為腫瘤患者疾病變化和療效評估的輔助指標(biāo)，檢查價格低廉、操作簡單、可重復(fù)性高，具有長期持續(xù)監(jiān)測優(yōu)勢，有助于腫瘤患者治療效果和預(yù)后評價，為制定個體化治療方案提供了依據(jù)。

綜上所述，DLBCL患者血清β2-MG、VEGF及LDH水平較正常健康人群明顯上調(diào)，且與患者臨床分期、骨髓侵犯、IPI指數(shù)和治療反應(yīng)有關(guān)，上述指標(biāo)均可作為評估DLBCL患者疾病變化，預(yù)測其治療效果和預(yù)后的依據(jù)。