谷氨酰胺對(duì)壞死性小腸結(jié)腸炎預(yù)防機(jī)制的研究

孟陽(yáng)（通訊作者） 施高陽(yáng) 王丹 胥飛 朱玲玲

（1鹽城市第一人民醫(yī)院兒科 江蘇 鹽城 224000）

（2揚(yáng)州市蘇北人民醫(yī)院新生兒科 江蘇 揚(yáng)州 225000）

新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎首次報(bào)道于1964年，多見于早產(chǎn)兒，是新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房病死率極高的腸道急癥[1]。近年來學(xué)者們嘗試尋找合適的NEC動(dòng)物模型，研究NEC的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)一步探索其防治藥物及藥理作用。本研究主要致力于建立新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型，并探索谷氨酰胺對(duì)其是否存在預(yù)防作用。具體研究如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

采用清潔級(jí)、2日齡的健康wistar新生鼠60只，體重3～5 g，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，隨機(jī)分成三組：空白對(duì)照組（A）、模型組（B）、谷氨酰胺組（C）各20只。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

A組喂養(yǎng)于母鼠旁。C組：0.3g·Kg-1·天-1谷氨酰胺灌胃，持續(xù)五天；B組C組：于實(shí)驗(yàn)第六天起每只5mg·Kg-1·天-1LPS灌胃，持續(xù)三天；C組和B組新生鼠均代鼠乳人工喂養(yǎng)，代鼠乳配制參照Flores[2]方法。LPS灌胃結(jié)束后第2、6、12、24h，各時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取5只斷頸法處死后，留取回盲部近端腸管，進(jìn)行H-E染色，留作病理標(biāo)本，觀察組織形態(tài)學(xué)變化。

2.結(jié)果

2.1 腸組織損傷的程度

B組和C組各時(shí)間點(diǎn)腸組織平均損傷評(píng)分均高于A組，病理?yè)p傷評(píng)分高峰在6時(shí)。C組腸組織損傷評(píng)分在2、6、12h與B組比較P值均＜0.05；B組腸組織損傷評(píng)分在2、6、12、24h與A組比較P值均＜0.05；C組腸組織損傷評(píng)分在2、6h與A組比P值均＜0.05。

表 各組新生鼠腸組織損傷病理評(píng)分 （±sD）

表 各組新生鼠腸組織損傷病理評(píng)分 （±sD）

注a：與A組相比P＜0.05；b：與B組相比P＜0.05；c：與A組相比P＜0.001。

組別 2h 6h 12h 24h A 組 0.53±0.51 0.4±0.55 0.6±0.55 0.4±0.55 B 組 2.25±0.5c 3±0.82c 2.75±0.96a 1.4±0.42a C 組 1.38±0.48ba 1.6±0.55ba 1.4±0.89b 0.8±0.45

2.2 H-E染色后A、B、C組腸組織病理改變（HE×200）

A組：腸上皮和絨毛結(jié)構(gòu)完整；B組2h腸上皮細(xì)胞變性，腸黏膜下層和固有層分離，絨毛萎縮、結(jié)構(gòu)脫落；C組2h腸黏膜下層和固有層輕微分離，絨毛頂端脫落；B組6h腸上皮結(jié)構(gòu)基本消失，黏膜下層和肌層重度水腫，絨毛結(jié)構(gòu)崩解分離；C組6h腸黏膜下層和固有腫脹，絨毛斷裂、缺失；B組12h腸上皮結(jié)構(gòu)較前修復(fù)，絨毛結(jié)構(gòu)不清，C組12h輕微腸黏膜下層水腫，絨毛結(jié)構(gòu)始修復(fù)；B組24h腸黏膜下層和基層水腫，絨毛結(jié)構(gòu)始修復(fù)；C組24h腸上皮結(jié)構(gòu)基本完整，絨毛結(jié)構(gòu)清楚。

3.討論

1974年Barlow等首次綜合采用配方乳人工喂養(yǎng)聯(lián)合缺氧成功建立新生大鼠NEC模型。近年來，國(guó)內(nèi)學(xué)者通過人工喂養(yǎng)聯(lián)合接種腸道細(xì)菌造模，發(fā)現(xiàn)其與人類NEC病理改變十分相似，且建立方法較為廉價(jià)、方便，較好重復(fù)[2]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)象為出生48小時(shí)的新生鼠，采用人工喂養(yǎng)+LPS灌胃的方法建立NEC模型。實(shí)驗(yàn)中B組新生鼠于操作后逐漸精神萎靡、體毛雜亂，嚴(yán)重者驚厥，腹部青紫、血便，甚至死亡，且剖腹見胃潴留明顯，腸管擴(kuò)張、水腫，血性滲出物增多，嚴(yán)重者見腸片狀出血、壞死。進(jìn)一步鏡檢后發(fā)現(xiàn)，B組腸組織上皮被炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，固有層充血，絨毛逐漸萎縮、結(jié)構(gòu)塌陷、進(jìn)而崩解；其實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)和病理形態(tài)學(xué)改變與人類NEC類似。同時(shí)B組腸組織損傷在2、6、12、24h與A組比較P值均＜0.05，證實(shí)其統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示造模成功[3]。

GLn多年來被認(rèn)為是非必須氨基酸，但近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，Gln能維持腸結(jié)構(gòu)完整性，應(yīng)激狀態(tài)下更為明顯。其作為條件必需氨基酸，通過修復(fù)機(jī)體組織細(xì)胞供能，進(jìn)而調(diào)節(jié)免疫。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)H-E染色后B、C組大鼠腸組織病理改變?cè)?、6、12h有明顯不同，C組腸組織損傷輕且修復(fù)較B組快，統(tǒng)計(jì)C組腸道病理?yè)p傷評(píng)分在2、6、12h與B組比較P值均＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，揭示Gln可能具備減輕并修復(fù)腸黏膜屏障的功效，接下來需進(jìn)一步從免疫和炎癥因子表達(dá)層面探索Gln對(duì)NEC的保護(hù)機(jī)制，為臨床防治NEC的工作提供寬闊思路。