紫背天葵提取物對食品中常見腐敗菌的抑制效果研究

□ 楊小霞 肇慶市水產(chǎn)技術推廣中心 巫培豪 肇慶學院食品與制藥工程學院 曹 中 肇慶市水產(chǎn)技術推廣中心林曼玉 陳冰如 覃 亮 肇慶學院食品與制藥工程學院

紫背天葵（Begonia fimbristipula Hance）別名紅鳳菜、紅背菜、觀音菜等，屬多年生草本植物，其富含維生素B1、維生素A、鉀、鈣以及銅、鋅、鐵等人體必需的微量元素，可作為保健時蔬亦可干燥后入藥，是產(chǎn)后婦女補血的首選蔬菜[1-2]，且紫背天葵內(nèi)含豐富的黃酮苷和生物堿，具有抗寄生蟲及抗病毒的能力[3]。在肇慶，豐富肥沃的土地資源及舒適的溫濕度為紫背天葵的生長提供了優(yōu)越的條件，紫背天葵作為肇慶主要特產(chǎn)之一深受市民的喜愛。由于紫背天葵特殊的營養(yǎng)和藥用價值，本文就其對食品中常見腐敗菌的抑菌效果進行了研究，以期提高紫背天葵作為功能性保健食品或藥物的開發(fā)價值。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮紫背天葵，采于鼎湖山，經(jīng)烘干、粉碎后供實驗使用；枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、黑曲霉菌（Aspergillus niger），由肇慶學院食品與制藥工程學院微生物實驗室提供；沙堡氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。

HH-S2恒溫水浴鍋，江蘇省金壇市環(huán)宇科學儀器廠；DHG-9070B干燥箱，上海浦東榮豐科學儀器有限公司；FY135粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司；SW-CJ-2FD超凈工作臺，蘇凈集團安泰公司；PYX-DHS-50X65隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海市躍進醫(yī)療器械廠；LRH-150生化培養(yǎng)箱，上海浦東榮豐科協(xié)儀器有限公司；YX280A手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器，上海三申醫(yī)療器機有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 紫背天葵水提物的制備

紫背天葵干燥品進行粉碎后過40目篩，用電子天平稱量紫背天葵干燥品 50 g，放置 1 000 mL 燒杯中加入600 mL蒸餾水浸泡過夜，取浸泡好的紫背天葵浸液于已放置石棉網(wǎng)的電熱爐上加熱，先用武火煮沸后改再用文火煎煮1.5 h，用紗布隔渣過濾收集濾液，濾渣再加600 mL蒸餾水重復煎煮2次后進行濾液合并，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在水浴60 ℃條件下把紫背天葵溶液減壓濃縮至50 mL，濃縮液冷卻后以4 000 r/min轉(zhuǎn)速在離心機中離心15 min，最后取上清液用孔徑為0.22 μm的濾膜進行過濾除菌，即得以原藥計藥液質(zhì)量濃度為1 g/mL的紫背天葵水提物，密封標記好于冰箱4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 紫背天葵脂提物的制備

稱取50 g藥物裝入兩個濾紙筒后放入提取筒中，燒瓶內(nèi)放入2顆沸石，連接固定好燒瓶和提取筒，用量筒量分別取150 mL乙酸乙酯試劑后從提取筒上方倒入燒瓶中，連接冷凝管索氏提取器安裝完畢，打開水浴鍋電源，設置溫度為90 ℃，用索氏提取法加熱回流6 h直至提取筒中的提取液顏色接近無色時，關閉電源停止加熱，移去水浴鍋使之自然冷卻后用燒杯收集合并藥液，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃條件下減壓濃縮至 50 mL，以 4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min，最后取上清液用孔徑為0.22 μm的濾膜進行過濾除菌，即得以原藥計藥液質(zhì)量濃度為1 g/mL的紫背天葵脂提物，密封標記好置4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 菌懸液的配制

用接種環(huán)挑取少量菌種接種于適宜的斜面培養(yǎng)基中，進行2次反復轉(zhuǎn)種，活化好的菌種使用接種環(huán)刮取三環(huán)菌落，注入約30 mL已滅菌的無菌水中，來回震蕩混勻，制成含菌量約為106～107CFU/mL的菌懸液，備用。使用前需振蕩均勻，用以防止菌液濃度不均。

1.2.4 紫背天葵提取物對菌種活性的抑制測定

分別取紫背天葵水提取液、酯提液2 mL于燒杯中，以無菌水為空白對照，分別放入若干直徑為6 mm的無菌濾紙密封于浸泡過夜。用移液槍吸取200 μL菌懸液于固體培養(yǎng)基中涂布均勻，用鑷子分別取出浸泡了紫背天葵提取液的濾紙片吹干后貼于含菌的平板上，每個樣品進行3組重復濃度。以上操作均在無菌條件下進行，所應用的試驗儀器均經(jīng)高壓滅菌處理，操作完成后將菌株置于37 ℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)18～24 h后觀察結(jié)果，真菌置28 ℃培養(yǎng)48 h后觀察，用游標卡尺量取抑菌圈大小，記錄數(shù)據(jù)取平均值[4-5]。

1.2.5 最低抑菌濃度（MIC）測定

取 10 mL 1 g/mL 紫背天葵提取物于試管中，采用二倍稀釋法對藥液進行濃度稀釋至1、0.5、0.25、0.125、0.062 5、0.032、0.016 g/mL。在各平皿內(nèi)分別加入2.0 mL不同濃度的紫背天葵提取液，每皿再倒入20 mL已滅菌的培養(yǎng)基，冷卻后制成含藥培養(yǎng)基。分別加入0.2 mL備用的菌懸液，涂布均勻，放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察各種菌生長情況。以完全沒有菌生長的最低提取物濃度為該提取物的最低抑菌濃度（MIC），每個濃度重復操作3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫背天葵提取物的抑菌效果

紫背天葵提取物對不同菌的抑菌效果見表1。實驗結(jié)果表明，紫背天葵水提取物和脂提物對金黃色葡萄球菌菌表現(xiàn)出顯著的抑制效果，對枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的抑制效果一般，對黑曲霉菌均無抑制作用。對于同一種細菌的抑制效果，紫背天葵水提物的抑菌效果優(yōu)于脂提物。

2.2 紫背天葵提取物的最低抑菌濃度（MIC）

不同濃度紫背天葵提取物對供試菌的抑菌活性見表2、3，紫背天葵水提取物對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的最低抑菌濃度為0.062 5、0.25、0.5 g/mL；紫背天葵脂提取物對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的最低抑菌濃度為0.25、0.5、1 g/mL。

3 討論

本文研究和比較了紫背天葵水提和脂提物對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和黑曲霉菌的生長抑制作用。實驗結(jié)果表明，紫背天葵水提取物和脂提物對金黃色葡萄球菌均表現(xiàn)出顯著的抑制效果，對枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的抑制效果一般，對黑曲霉菌無抑制作用。而且對于同一種細菌的抑制效果，紫背天葵水提物的抑菌效果優(yōu)于脂提物。目前，由于抗生素的濫用造成很多微生物產(chǎn)生了抗藥性，這給臨床治療帶來了一定的困難，急需尋找新的抗菌藥源。本實驗證明了紫背天葵水提和脂提物能對部分細菌表現(xiàn)出不同的抑制作用，希望能為紫背天葵日后在醫(yī)藥、食品方面的應用提供研究基礎。

表1 紫背天葵提取物對幾種微生物的抑菌效果

表2 紫背天葵水提取物對幾種微生物的最低抑菌濃度（MIC）

表3 紫背天葵脂提取物對幾種微生物的最低抑菌濃度（MIC）

注：-表示無菌生長；+表示有不超過1/6平皿面積生長；++表示有不超過1/4平皿面積的菌落生長；+++表示有不超過1/3平皿面積的菌落生長；++++表示有不超過1/2平皿面積的菌落生長；+++++表示有不超過2/3平皿面積的菌落生長，++++++表示有超過2/3平皿面積的菌落生長。