咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的殘留檢測方法

吳瓊，呂岱竹，韓丙軍，黃海珠，張艷玲

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心，海南?？?71101；2.農(nóng)業(yè)部熱作產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評估實(shí)驗(yàn)室（?？冢?，海南海口571101；

3.海南省熱帶果蔬產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南海口571101）

咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的殘留檢測方法

吳瓊1，2，3，呂岱竹1，2，3，韓丙軍1，2，3，黃海珠1，2，3，張艷玲1，2，3

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心，海南?？?71101；2.農(nóng)業(yè)部熱作產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評估實(shí)驗(yàn)室（?？冢Ｄ虾？?71101；

3.海南省熱帶果蔬產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南?？?71101）

建立了牛奶中咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚殘留的氣相色譜質(zhì)譜（GC-MS）檢測方法。牛奶樣品經(jīng)乙腈-丙酮（7∶3）提取，凝膠滲透色譜（GPC）凈化，GC-MS檢測，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，在牛奶中咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的定量限分別為0.05，0.025 mg/kg；最小檢出量分別為0.2，0.5 ng；咪鮮胺在牛奶中的平均回收率為82.6%～109.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs）為1.7%～4.0%；2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的平均回收率為85.3%～99.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs）為2.6%～5.8%。該方法提取效果好，具有良好的回收率和重復(fù)性。

氣相色譜質(zhì)譜法；咪鮮胺；代謝物；牛奶；殘留

咪鮮胺（prochloraz）是一種廣譜殺菌劑，對大田作物、水果蔬菜、草皮及觀賞植物上的多種病害具有防治作用；另外，咪鮮胺還可用于柑橘、香蕉等水果收獲后的產(chǎn)品保鮮，其應(yīng)用范圍較為廣泛[1-4]。有關(guān)咪鮮胺的用量各國都有嚴(yán)格的規(guī)定，如CAC、歐盟和日本都規(guī)定了咪鮮胺在生乳中的MRL值，分別為0.05，0.4，0.05 mg/kg，我國尚未制定。

有關(guān)咪鮮胺在水果上的殘留檢測方法已有一些報(bào)道，主要是采用氣相色譜法（GC）[5-6]、液相色譜法（LC）[7-10]、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）等分析方法[11-12]。咪鮮胺屬于低毒殺菌劑，但是其代謝物2，4，6-三氯苯酚具有一定的環(huán)境毒理作用，對水生物極毒。目前尚未見有關(guān)采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）同時(shí)分析牛奶中咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚殘留的方法。

本研究采用溶劑提取的方法，通過GC-MS快速檢測牛奶中咪鮮胺及其2，4，6-三氯苯酚的殘留量，旨在建立咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的殘留分析方法。

1 材料和方法

1.1 儀器與主要試劑

氣相色譜型號Thermo Trace Ultra GC，配RSH Tri Plus自動(dòng)進(jìn)樣器，Xcalibur軟件；色譜柱Thermo Fisher TR-5MS，0.25 μm，0.32 mm×60 m；質(zhì)譜儀型號Thermo DSQII；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申生科技有限公司）；氮吹儀TTL-DCII（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）；高速分散均質(zhì)機(jī)T25 DS25（德國IKA（廣州）儀器實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司）；全自動(dòng)凝膠色譜凈化系統(tǒng)GPC（德國LcTech公司）。

咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.7%，購自德國Dr. Ehrenstorfer公司），2，4，6-三氯苯酚（純度99.7%，購自德國Dr.Ehrenstorfer公司），環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.5%，購自德國Dr.Ehrenstorfer公司）。

乙腈、丙酮、環(huán)己烷和乙酸乙酯均為分析純；正己烷為色譜純；氯化鈉于600℃灼燒后使用。

1.2 樣品提取

稱取10.00 mL牛奶樣品，向樣品中加入20 mL乙腈-丙酮混合溶劑（1∶1，體積比）。用勻質(zhì)機(jī)在15 000 r/min勻質(zhì)3 min。吸取上清液于裝有氯化鈉的離心管中，離心分層，取上清液于100 mL雞心瓶中。殘?jiān)?0 mL乙腈-丙酮混合溶劑（1∶1，體積比）重復(fù)提取1次，合并2次提取液。將提取液于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，用環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑（1∶1，體積比）進(jìn)行溶劑替換，最后濃縮至約5 mL，待凈化。

1.3 凝膠滲透色譜凈化

1.3.1 條件凈化柱400 mm×25 mm，內(nèi)裝BIOBeads S-X3填料或相當(dāng)者；檢測波長254 nm；流動(dòng)相為環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑（1∶1，體積比）；流速5 mL/min；進(jìn)樣量5 mL；開始收集時(shí)間15 min；結(jié)束收集時(shí)間40 min。

1.3.2 凈化將濃縮的提取液轉(zhuǎn)到10 mL容量瓶中，用5 mL環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑（1∶1，體積比）分2次洗滌雞心瓶，并轉(zhuǎn)移至上述10 mL容量瓶中，再用上述溶劑定容至刻度，搖勻。經(jīng)0.45μm濾膜過濾到10 mL試管中，供凝膠滲透色譜儀凈化，收集15～40 min的餾分于100 mL雞心瓶中，在40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL。用氮?dú)獯蹈?，再?.5 mL正己烷溶解殘?jiān)?，供氣相色譜-質(zhì)譜進(jìn)行檢測。同時(shí)取不含農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品的樣品，按上述步驟制備空白樣品提取液，用于配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 氣相色譜質(zhì)譜儀測定條件

載氣為氦氣（純度99.999%），流速為1.0mL/min；進(jìn)樣口溫度280℃，進(jìn)樣量2 μL，不分流進(jìn)樣，延時(shí)采集時(shí)間5 min；柱溫程序，100℃保持1 min，30℃/ min升至130℃，保持0 min，15℃/min升至280℃，保持23 min。色譜-質(zhì)譜接口溫度300℃，離子源溫度230℃；電子能量70 eV；離子化方式EI。保留時(shí)間和監(jiān)測離子如表1所示。

表1 GC-MS/SIM分析咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚殘留量的相關(guān)參數(shù)

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

試驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)法單離子定量測定。用正己烷分別配制100 μg/mL的咪鮮胺、2，4，6-三氯苯酚，以及10 μg/mL的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)品母液。用空白樣品溶液配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度分別為0.50，0.80，1.0，2.0，4.0 μg/mL，采用1.4的儀器條件進(jìn)樣分析，以咪鮮胺進(jìn)樣濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，咪鮮胺與環(huán)氧七氯峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；以2，4，6-三氯苯酚進(jìn)樣濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，2，4，6-三氯苯酚與環(huán)氧七氯峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6 準(zhǔn)確度和精密度的測定

在沒有檢出咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的牛奶樣品中分別添加不同含量水平的咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平咪鮮胺分別為0.05，0.2，0.4 mg/kg，2，4，6-三氯苯酚分別為0.025，0.1，0.4 mg/kg。按照所建立的前處理和檢測方法進(jìn)行添加回收試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性分析

在0.50～4.0 μg/mL范圍內(nèi)，咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的峰面積比響應(yīng)值（y）和濃度（x）均具有良好的線性關(guān)系，咪鮮胺回歸方程為y＝7.162 4x－1.597 2，R2＝0.997 5；2，4，6-三氯苯酚回歸方程為y＝0.470 8x－0.015 3，R2＝0.999 7（圖1，2）。

2.2 回收率和精密度分析

表2 咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的添加回收率

添加回收試驗(yàn)結(jié)果（表2）表明，在添加水平為0.05～0.4 mg/kg，咪鮮胺在牛奶中的平均回收率為82.6%～109.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～4.0%；在添加水平為0.025～0.4 mg/kg，2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的平均回收率為85.3%～99.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6%～5.8%。二者均符合農(nóng)藥殘留試驗(yàn)的要求[13]。

2.3 色譜條件的優(yōu)化

本試驗(yàn)采用GPC法去除牛奶中的脂肪等大分子干擾物，所選用的BIO-Beads S-X3填料對目標(biāo)物沒有影響，無可逆吸附，色譜的分離度也比較好。咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的SIM色譜如圖3所示。

2.4 靈敏度分析

在所選定的檢測條件下，儀器對咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚最小檢出量分別為0.2，0.5 ng；牛奶中咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的定量限（LOQ）分別為0.05，0.025 mg/kg。

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)的檢測方法采用乙腈-丙酮混合溶劑（1∶1，體積比）作為牛奶樣品的提取液，提取效果較好，雜質(zhì)峰較少。本研究結(jié)果表明，在添加水平為0.05～0.4 mg/kg時(shí)，咪鮮胺在牛奶中的平均回收率在82.6%～109.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.7%～4.0%；在添加水平為0.025～0.4 mg/kg時(shí)，2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的平均回收率在85.3%～99.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.6%～5.8%。該方法分離效果好，靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

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Determination of Prochloraz and 2，4，6-trichlorophenol Residues in Milk

WUQiong1，2，3，L譈Daizhu1，2，3，HANBingjun1，2，3，HUANGHaizhu1，2，3，ZHANGYanling1，2，3
（1.Analysis&TestingCenter，Chinese AcademyofTropical Agricultural Sciences，Haikou 571101，China；2.Agricultural MinistryLaboratoryfor Tropical Crop Product Qualityand SafetyRisk Assessment，Haikou 571101，China；3.Hainan Provincial KeyLaboratoryofQualityand Safetyfor Tropical Fruits and Vegetables，Haikou 571101，China）

A gas chromatographyand mass spectrometry（GC-MS）method was established for the determination ofprochloraz and 2,4,6-trichlorophenol residues in milk.The milk samples were extracted with acetonitrile-acetone（7∶3）solvent and purified by using GPC.The final extract was injected into GC-MS and quantified by internal standard method.The result showed that the limits of quantification（LOQs）were 0.05,0.025 mg/kg for prochloraz and 2,4,6-trichlorophenol,limit of detection of prochloraz and 2,4, 6-trichlorophenol were 0.2,0.5 ng.The recoveries of prochloraz and 2,4,6-trichlorophenol spiked in milk were 82.6%-109.1%and 85.3%-99.3%with the relative standard deviations（RSDs）1.7%-4.0%and 2.6%-5.8%.The results showthat the proposed method is sensitive and accurate for the determination ofprochlorazand 2,4,6-trichlorophenol in milk.

GC-MS;prochloraz;metabolites;milk;residue

TS252.7

：A

：1002-2481（2017）06-0937-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.06.18

2017-02-16

中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院院本級基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（1630042014006）

吳瓊（1984-），女，黑龍江牡丹江人，助理研究員，主要從事農(nóng)藥殘留試驗(yàn)研究工作。