血清標(biāo)本冷藏時(shí)間對(duì)生化項(xiàng)目穩(wěn)定性的影響

李榮海 姚興偉 邱聰穎 楊琦 盧欣 張澤 郭姮 王斌

[摘要] 目的 評(píng)估血清標(biāo)本冷藏保存7 d內(nèi)每24小時(shí)各個(gè)生化項(xiàng)目的穩(wěn)定性及重復(fù)性，為臨床醫(yī)師提供良好的建議與指導(dǎo)。 方法 收集2017年1～12月來(lái)自西苑醫(yī)院臨床血清標(biāo)本30例，采用Roche Cobas 8000全自動(dòng)分析儀檢測(cè)，并將每次檢測(cè)后的血清樣本以半封閉式保存于4℃冰箱中，每24小時(shí)對(duì)葡萄糖（GLU）、肌酐（Cr）、C反應(yīng)蛋白（CRP）等44項(xiàng)生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果 K+、Cl-、Na+、補(bǔ)體C3、肌酸激酶（CK-MB）和乳酸脫氫酶（LDH）在24 h內(nèi)的檢測(cè)結(jié)果與其他時(shí)間段的檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；K+、Cl-、Na+、補(bǔ)體C3濃度隨時(shí)間的變化明顯升高；而CK-MB、LDH濃度隨時(shí)間的變化明顯降低。其余天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、GLU等38項(xiàng)生化項(xiàng)目差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ﹥ 0.05）。 結(jié)論 醫(yī)務(wù)工作者應(yīng)充分理解血清標(biāo)本存放期間各個(gè)生化項(xiàng)目的變化，尤其是K+、Cl-、Na+、補(bǔ)體C3、CK-MB和LDH濃度的變化。

[關(guān)鍵詞] 血清標(biāo)本；生化項(xiàng)目；穩(wěn)定性；冷藏時(shí)間

[中圖分類號(hào)] R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）07（a）-0143-04

Effect of cold storage time on the stability of biochemical project

LI Ronghai1# YAO Xingwei2# QIU Congying3 YANG Qi2 LU Xin2 ZHANG Ze2 GUO Heng2 WANG Bin2

1.Department of Clinical Laboratory， Xiyuan Hospital， CACMS， Beijing 100091， China； 2.Department of Clinical Laboratory， Dongzhimen Hospital， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100700， China； 3.Department of Clinical Laboratory， Beijing Bo′ai Hospital， China Rehabilitation Research Center， Beijing 100068， China

[Abstract] Objective To evaluate the stability and repeatability of every 24 hours biochemical project in the serum samples for 7 days， in order to provide good advice and guidance for clinicians. Methods From January to December in 2017， 30 cases of clinical serum samples from Xiyuan Hospital were collected， and Roche Cobas 8000 automatic analyzer was used for the detection. The samples were stored at 4℃ after being detected with 44 biochemical projects every day in the study， such as glucose （GLU）， creatinine （Cr） and C-reactive protein （CRP）. Results The detection results of K+， Cl-， Na+， C3， CK-MB， LDH in 24 h were significantly different from those of other time periods， and the differences were statistically significant （P < 0.05）. The concentration of K+， Cl-， Na- and complement C3 were significantly increased， while the levels of CK-MB and LDH were significantly decreased. However， the level of other 38 testing projects had not statistically significant （P > 0.05）. Conclusion It is important for medical workers to know the changes of some biochemical markers in serum samples during one week， especially the changing concentration of K+， Cl-， Na-， complement C3， CK-MB and LDH.

[Key words] Serum samples； Biochemical test； Stability； Cold storage time

根據(jù)《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[1]相關(guān)文件的規(guī)定，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)樣本的性狀、檢驗(yàn)和任何適用的要求來(lái)制訂文件化程序及規(guī)定臨床樣本保留的時(shí)限，以便于當(dāng)出現(xiàn)與患者歷史數(shù)據(jù)有較大變化需要進(jìn)行復(fù)查的結(jié)果。樣本保存時(shí)間和條件可能影響檢測(cè)項(xiàng)目的穩(wěn)定性和重復(fù)性。杜忠明等[2]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，即使樣品保存在冰箱內(nèi)，雖利于某些成分的穩(wěn)定，但由于致冷時(shí)的除濕作用，在這樣的環(huán)境中存放置樣品，蒸發(fā)仍相當(dāng)嚴(yán)重。故本研究將探討血清標(biāo)本放置不同的時(shí)間對(duì)生化項(xiàng)目穩(wěn)定性的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器

北京白洋離心機(jī)廠生產(chǎn)的白洋離心機(jī)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行離心，3500 r/min，離心10 min；采用Roche Cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行分析。

1.2 標(biāo)本及其來(lái)源

收集2017年1～12月來(lái)自西苑醫(yī)院臨床血清標(biāo)本30例，各標(biāo)本無(wú)黃疸、溶血、乳糜。將1 d檢測(cè)后的標(biāo)本采用半封閉式方式保存在4℃冰箱中，每24小時(shí)檢測(cè)1次，并詳細(xì)記錄檢測(cè)結(jié)果，然后分別與1 d檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，觀察各生化項(xiàng)目的穩(wěn)定性。冰箱的溫度由北京國(guó)尚信科技有限公司的冷鏈系統(tǒng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

1.3 試劑、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品

γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品由中生北控生物科技股份有限公司提供；載脂蛋白B的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品由德國(guó)Disvs公司提供；其它生化項(xiàng)目的檢測(cè)試劑均采用德國(guó)羅氏公司原裝試劑和德國(guó)羅氏系列定標(biāo)液。質(zhì)控品由德國(guó)廠家羅氏公司提供兩個(gè)水平質(zhì)控品。

1.4 檢測(cè)方法

K+、Na+、Cl-、Mg2+等離子采用離子選擇電極法（ISE法）；補(bǔ)體C3、C4、免疫球蛋白A、免疫球蛋白E等采用免疫比濁法；乳酸脫氫酶（LDH）、γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）等酶采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法；總膽紅素（TBIL），直接膽紅素（DTBIL）采用重氮法；葡萄糖（GLU）采用氧化酶法等。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量方差分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)過(guò)連續(xù)7 d對(duì)血清標(biāo)本44項(xiàng)生化項(xiàng)目的檢測(cè)，其中K+、Cl-、Na+、補(bǔ)體C3、CK-MB、LDH差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），其余38項(xiàng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

K+、Cl-、Na+、補(bǔ)體C3濃度隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高。與1 d相比，K+在6、7 d升高（P < 0.05或P < 0.01）；Na+除了2 d檢測(cè)結(jié)果與1d比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），3～7 d檢測(cè)結(jié)果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）；Cl-在2～7 d檢測(cè)結(jié)果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）；補(bǔ)體C3在6、7 d檢測(cè)結(jié)果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）。

CK-MB、LDH濃度隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低。CK-MB在4～7 d檢測(cè)結(jié)果結(jié)果均低于1 d（P < 0.05或P < 0.01），LDH在7 d檢測(cè)結(jié)果低于1 d（P < 0.05）。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，電解質(zhì)K+、Na+、Cl-以及補(bǔ)體C3隨著樣本存放時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸升高。血清中電解質(zhì)K+、Na+、Cl-水平是監(jiān)測(cè)機(jī)體中水、電解質(zhì)及酸堿平衡的重要生化指標(biāo)，在臨床檢驗(yàn)中有重要的指導(dǎo)作用，臨床急救醫(yī)生需要通過(guò)檢驗(yàn)科電解質(zhì)的快速檢驗(yàn)報(bào)告對(duì)患者的病情進(jìn)行診斷[3-6]。對(duì)于樣本中電解質(zhì)K+、Na+、Cl-明顯升高的趨勢(shì)，秦海瑜等[7]認(rèn)為有兩個(gè)重要原因：第一，分離膠并不能完全使血清和血細(xì)胞隔離開，導(dǎo)致血細(xì)胞內(nèi)高濃度離子釋放到血清中；第二，某些外部因素所致，在實(shí)際臨床工作中要盡可能降低外部因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響程度，尤其注意在室溫環(huán)境下放置一段時(shí)間的生化標(biāo)本。特別是敞口后血清中電解質(zhì)K+、Na+、Cl-水平高于其實(shí)際水平，可能是血清水分的蒸發(fā)導(dǎo)致被檢測(cè)物質(zhì)在血清中的水平明顯增高的原因[8]。由于本實(shí)驗(yàn)室將檢測(cè)后血清樣本采用不加原儲(chǔ)血管的橡膠蓋進(jìn)行半封閉式的保存在4℃冰箱，造成血清水分部分蒸發(fā)，可能是導(dǎo)致血清中電解質(zhì)K+、Na+、Cl-濃度隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高的原因之一。

補(bǔ)體C3是人體補(bǔ)體系統(tǒng)中含量最高的組分，也是補(bǔ)體激活經(jīng)典途徑以及旁路途徑的關(guān)鍵成分。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)監(jiān)測(cè)顯示補(bǔ)體C3的水平隨保存時(shí)間延長(zhǎng)而上升，2 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.06±0.24）g/L，上升了2.11%；3 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.09±0.24）g/L，上升了4.74%，仍屬于臨床的可接受范圍，但4 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.14±0.26）g/L，上升超過(guò)10%。升高的原因可能是樣本存放時(shí)間過(guò)久導(dǎo)致血清中補(bǔ)體C5轉(zhuǎn)化酶的自行裂解，從而引起C3濃度明顯升高[9-11]。鑒于補(bǔ)體的不穩(wěn)定性，建議血清補(bǔ)體C3測(cè)定最好采用新鮮標(biāo)本，若無(wú)法及時(shí)檢測(cè)或考慮到成本因素，分離的血清可置于-20℃保存3 d。

實(shí)驗(yàn)中CK-MB、LDH濃度隨時(shí)間的變化而逐漸降低。CK-MB主要存在于心肌細(xì)胞中，是診斷急性心肌梗死（AMI）的重要指標(biāo)之一，AMI時(shí)血清CK-MB可顯著升高，曾被認(rèn)為是診斷AMI的金標(biāo)準(zhǔn)[12-15]。CK-MB活性的酶易于老化，主要表現(xiàn)為酶構(gòu)象的改變，引起CK-MB檢測(cè)降低或正常的原因可能是由于過(guò)了檢測(cè)的時(shí)間，以致于血清酶老化使酶的催化活性降低或喪失。

LDH是一種糖酵解酶，也是一種冷變性酶，存在于所有的組織細(xì)胞中，但分布于腎臟的含量較高，LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5是LDH五種形式的同工酶，其最適合的溫度應(yīng)該是室溫。本次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本采用分離膠采血管收集并保存的溫度是4℃，檢測(cè)的結(jié)果與1 d相比，7 d檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。因此有學(xué)者建議對(duì)不同溫度及不同保存方式的血清進(jìn)行相關(guān)項(xiàng)目的檢測(cè)，以便找到便捷合理的血清保存方式[16]。華永川等[17]探討了分離膠管、血清血球共用管、血清管不同時(shí)間段血清酶活性和穩(wěn)定性的變化，結(jié)果顯示分離膠不影響酶的穩(wěn)定性和活性，且LDH（血清血球管）于第5天開始升高，與本研究中的LDH變化趨勢(shì)相符。

楊永紅等[18]通過(guò)OLYMPUS AU54OO全自動(dòng)生化儀對(duì)36個(gè)生化項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，除GLU、CO2結(jié)合力、K+外其他測(cè)定的33項(xiàng)生化項(xiàng)目隨著時(shí)間的延長(zhǎng)其濃度無(wú)明顯變化。然而上述的研究中只有K+的檢測(cè)趨勢(shì)與本研究相同，部分檢測(cè)項(xiàng)目（GLU、Na+、Cl-、LDH、CK-MB）的變化趨勢(shì)與本研究有所差異，可能的原因包括冷藏時(shí)采用的保存的措施有所不同，楊永紅等[18]采用的是用儲(chǔ)血盒直接加蓋冷藏其制備的血標(biāo)本，而本研究采用的是半封閉式方式保存，檢測(cè)儀器設(shè)備的不同、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)等其他原因等，因此值得后續(xù)研究進(jìn)一步比較分析。

張麗霞[19]認(rèn)為影響分析物穩(wěn)定性和檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要參數(shù)包括實(shí)驗(yàn)室的室溫以及血清或血漿的貯存溫度、時(shí)間。國(guó)內(nèi)很多學(xué)者建議對(duì)于C3、C4補(bǔ)體應(yīng)采用冰凍保存方式[20]，據(jù)實(shí)驗(yàn)研究顯示LDH、CK、AST、ALT只要檢測(cè)后立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行密封及避光也可在室溫下進(jìn)行保存?？傊?，本研究實(shí)驗(yàn)表明大多數(shù)血清的生化項(xiàng)目可以置于4℃冰箱中且其結(jié)果具有一定的穩(wěn)定性，而應(yīng)該特別關(guān)注K+、Cl-、Na+、補(bǔ)體C3以及CK-MB、LDH濃度的變化，并詳盡地分析其可能的影響因素。因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自身的實(shí)際情況（儀器設(shè)備型號(hào)、試劑類別、血清標(biāo)本儲(chǔ)存方式等），總結(jié)歸納出血清樣本存留時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的具體影響，為本地區(qū)的臨床醫(yī)生提供更加真實(shí)可靠的數(shù)據(jù)來(lái)源，以便于進(jìn)一步提高檢驗(yàn)質(zhì)量，更好地服務(wù)于臨床。

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（收稿日期：2018-04-04 本文編輯：李岳澤）