復(fù)方中草藥對黃顙魚生長、肉質(zhì)及血清中補體C3、補體C4含量的影響

曲 木， 黃 成， 張寶龍， 程鎮(zhèn)燕， 白東清， 賈麗艷， 翟勝利*

（1.天津市晨輝飼料有限公司，天津市水族動物功能性飼料企業(yè)重點試驗室，天津 301800；2.天津農(nóng)學院水產(chǎn)學院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點試驗室，天津 300384）

黃顙魚 （pelteobagrus fulvidraco）屬鯰形目（Siluriformes）， 鲿科 （Bagridae）， 黃顙魚屬（Pelteobagrus）。因其細嫩的口感，少刺，味道鮮美而被人們所喜愛，但是由于養(yǎng)殖面積和強度的急劇增加，病害日益嚴重，養(yǎng)殖人員大量使用抗生素和化學藥品，致使魚體抗藥性增加，養(yǎng)殖成本提高，已嚴重影響人類的健康和水環(huán)境安全 （盛竹梅等，2012）。近年來，中草藥被廣泛應(yīng)用于凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei） （ 王 蕓 等 ，2007）、 鯉 魚（Cyprinus carpiovar） （ 孟 兆 娜 等 ，2011）、 草 魚（Ctenopharyngodon idellus）（李超等，2011）等的研究中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加中草藥對養(yǎng)殖對象生長及免疫力提升有極大的促進作用。目前，添加中草藥以提高魚體抗病毒性、抗病菌及促進免疫力等功效成為水產(chǎn)飼料添加劑的研究熱點 （劉紅柏等，2004；姜德山等，2003；羅琳等，2000；黃琪琰，1993）。本試驗研究以黨參、黃芪、野菊花混合制成的復(fù)方中草藥對黃顙魚生長、肉質(zhì)及血清中補體含量的影響，為飼料配方優(yōu)化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

1.1.1 復(fù)方中草藥的制備 復(fù)方中草藥的制備參照葛婧等（2016）方法并略作改動。將黃芪、黨參和野菊花三種中草藥按5∶3∶2比例混合。將稱重過的中草藥洗凈溫水浸泡50 min，加20倍水量，先用武火煎煮，沸騰后改用文火，砂鍋3次煎煮，一煎40 min，二煎 35 min，三煎 30 min，連續(xù)煎煮后過濾殘渣，湯劑按組別分別裝瓶標號放入冰箱4℃冷藏待用。

1.1.2 飼料的制備 本試驗飼料以復(fù)方中草藥為添加劑，以魚粉、豆粕、雞肉粉、玉米蛋白粉為主要蛋白來源，輔佐少量礦物質(zhì)元素，配合中草藥制成六個梯度的試驗飼料。以Diet 1為對照組（復(fù)方中草藥含量0%），其余為試驗組。飼料自然風干，裝袋保存標記待用。

表1 飼料配方%

1.2 試驗魚與養(yǎng)殖管理

1.2.1 試驗魚 試驗魚購自天津市和來科技有限公司，挑選規(guī)格一致，初始體重（20.0±1.0）g 的黃顙魚，經(jīng)消毒、暫養(yǎng)2周后，隨機選取健康無病，體色正常不畸形的試驗魚分為六個處理組，每組4個平行，每個平行20尾魚，飼養(yǎng)在780m×575m×467 m的方形（實際養(yǎng)殖水150 L）藍色塑料箱中，記錄每條魚的體重。馴化2周后開始正式養(yǎng)殖試驗，養(yǎng)殖周期為28 d。

1.2.2 養(yǎng)殖管理 試驗期間日投喂量為體重的3%～6%，具體投喂量按試驗魚實際攝食情況而定，每天記錄投喂量，每天飼喂兩次，投喂時間為每天9:30和16:30。定期檢測水質(zhì)指標：試驗期間水溫（27.5±2.5）℃，溶氧≥6.0 mg/L，pH 為（7.3±1.2），氨氮 ＜ 0.2 mg/L，亞硝酸鹽 ＜ 0.005 mg/L。每兩天換一次水，每次換水1/3左右，及時清理底質(zhì)沉積。

1.2.3 樣本采集 養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，禁食24 h，從每個養(yǎng)殖箱隨機撈取5尾魚，稱重記錄。試驗魚經(jīng)丁香酚麻醉后，在冰盤上進行抽血，取出來的靜脈血4℃、4000 r/min離心15 min，取上層血清待用。之后進行解剖，取肝臟、脾、中腎等組織，對肝臟稱重記錄，所有樣本-20℃條件保存。

每個平行分別取10尾魚，取側(cè)線上方的同側(cè)新鮮背肌，干紗布擦干表面水分，其中5尾魚的樣品放于底部放有適當吸水紙的10 mL離心管中，以用于肌肉滴水損失率的測定，剩余5尾樣品裝入密封袋以用于后續(xù)肌肉蒸煮損失率測定。

1.3 試驗方法

1.3.1 生長指標的測定

生長指標計算按下列公式進行：

增重率/%=（終末體重-初始體重）/初始體重×100；

特定生長率/（%/d）=（ln 終末體重-ln 初始體重）/養(yǎng)殖時間×100；

餌料系數(shù)=飼料投喂重量/（終末體重-初始體重）；

肝體比/%=肝臟重量/終末體重×100；

蛋白效率 （PER，%）=體重增加量/蛋白質(zhì)攝取×100。

1.3.2 肉質(zhì)檢測

1.3.2.1 肌肉滴水損失率測定 將盛有樣本的10 mL離心管，4℃，4000 r/min離心20 min，取出擦干背肌表面水分，稱重記錄。

滴水損失率/%=（離心前肌肉質(zhì)量-離心后肌肉質(zhì)量）/離心前肌肉質(zhì)量×100。

1.3.2.2 肌肉蒸煮損失率測定 將裝有樣本的密封袋，放入70℃的恒溫水浴鍋中蒸煮15 min，取出冷卻至室溫，擦干背部肌肉表面水分，稱重記錄。

蒸煮損失率/%=（蒸煮前肌肉質(zhì)量-蒸煮后肌肉質(zhì)量）/蒸煮前肌肉質(zhì)量×100。

1.3.3 黃顙魚組織中補體C3、補體C4含量的測定

采用商用試劑盒 （購自南京建成生物工程研究所）對血清及組織中的補體C3、補體C4含量進行測定。

1.4 數(shù)據(jù)分析 所有指標數(shù)據(jù)均用Excle 2007進行分析處理，所有數(shù)據(jù)均以“平均數(shù)±標準誤”表示，使用SPSS 18統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析（ANOVA），用 Duncan（D）比較差異性，顯著性水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥對黃顙魚生長性能的影響 用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚，在7、14、21、28 d時取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚增重率有上升的趨勢，在4個取樣階段均為Diet 4處理組最高，與對照組相比分別升高了 69.89%、106.69%、143.51%、66.07%，Diet 4處理組各階段增重率大小順序為21 d＞7 d＞14 d＞28 d（見表 2）。

表2 復(fù)方中草藥對黃顙魚增重率的影響%

用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚，在7、14、21、28 d時取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚增重率有上升的趨勢，在4個取樣階段均為Diet 4處理組最高，與對照組相比分別升高了 70.07%、105.71%、142.11%、63.64%，Diet 4處理組各階段特定生長率大小順序為 7 d＞14 d＞21 d＞28 d（見表 3）。

表3 復(fù)方中草藥對黃顙魚特定生長率的影響%/d

用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚，在7、14、21、28 d 時取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚的餌料系數(shù)變化趨勢不明顯，在4個取樣階段均為Diet 4處理組最低，且顯著低于其他各組（P＜0.05），分別比對照組降低了 11.58%、22.35%、28.88%、35.52%，Diet 4處理組各階段餌料系數(shù)大小順序為7 d＞14 d＞28 d＞21 d（見表 4）。

表4 復(fù)方中草藥對黃顙魚餌料系數(shù)的影響

用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚，在7、14、21、28 d時取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚蛋白質(zhì)效率有上升的趨勢，在4個取樣階段均為Diet 4處理組最高，且顯著高于其他各組（P＜0.05），與對照組相比分別升高了 25.82%、41.48%、47.09%、63.91%，Diet 4處理組各階段蛋白質(zhì)效率大小順序為14 d＞28 d＞7 d＞21 d（見表 5）。

表5 復(fù)方中草藥對黃顙魚蛋白質(zhì)效率的影響%

2.2 復(fù)方中草藥對黃顙魚肉質(zhì)的影響 用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚，在7、14、21、28 d時取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚肉質(zhì)的滴水損失率有降低的趨勢，在4個取樣階段均為Diet 4處理組最低（P＜0.05），與對照組相比分別降低了24.52%、28.81%、44.28%、46.03%，Diet 4處理組各階段滴水損失率大小順序為 7 d＞14 d＞28 d＞21 d（見表 6）。

表6 復(fù)方中草藥對黃顙魚背部肌肉滴水損失率的影響%

用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚，在7、14、21、28 d時取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚肉質(zhì)的蒸煮損失率有降低的趨勢，在4個取樣階段均為Diet 4處理組顯著較低 （P＜0.05），與對照組相比分別降低了28.80%、29.81%、39.47%、38.62%，Diet 4處理組各階段滴水損失率大小順序為7 d＞14 d＞28 d＞21 d（見表 7）。

表7 復(fù)方中草藥對黃顙魚背部肌肉蒸煮損失率的影響%

2.3 復(fù)方中草藥對黃顙魚血清中補體C3、補體C4含量的影響

2.3.1 復(fù)方中草藥對黃顙魚血清中補體C3含量的影響 用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚，在 7、14、21、28 d 時取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚血清中的補體C3活性有上升的趨勢，在4個取樣階段均為Diet 3處理組顯著升高（P＜0.05），與對照組相比分別升高了 51.18%、139.93%、46.80%、102.56%，Diet 3處理組各階段補體C3活性高低順序為21 d＞28 d＞14 d＞7 d（見表 8）。

2.3.2 復(fù)方中草藥對黃顙魚血清中補體C4含量的影響 用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚，在 7、14、21、28 d 時取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中草藥添加量的上升，黃顙魚血清中的的補體C4活性有上升的趨勢，在4個取樣階段均為Diet 3處理組顯著升高（P＜0.05），與對照組相比分別升高了 231.43%、159.05%、161.04%、223.81%，Diet 3處理組各階段補體C4活性高低順序為21 d＞28 d＞14 d＞7 d（見表 9）。

表8 復(fù)方中草藥對黃顙魚血清中補體C3含量的影響mg/L

表9 復(fù)方中草藥對黃顙魚血清中補體C4含量的影響mg/L

3 討論

3.1 復(fù)方中草藥對黃顙魚生長的影響 中草藥含有多中營養(yǎng)元素和生物活性物質(zhì)，對養(yǎng)殖動物有一定的促生長作用。Wu等（1998）發(fā)現(xiàn)，0.3%中草藥（絞股蘭）對草魚增重的促進作用最大，Dan等（1999）發(fā)現(xiàn)，1%中草藥（小茴香）對鯽魚增重的促進效果最大。與上述結(jié)果相似，本試驗中，黃顙魚攝食了含有中草藥的飼料后，增重率和特定生長率顯著提高，Diet 4飼料組即中草藥含量為0.4%時促生長效果最好。中草藥的給藥劑量不同，可能是因為添加中草藥種類、養(yǎng)殖對象的不同造成的。復(fù)方中草藥可以促進黃顙魚對飼料的吸收和消化，增加飼料的吸收利用率。消化率決定飼料利用率，而消化率與消化部位產(chǎn)生的消化酶息息相關(guān)，消化酶決定黃顙魚對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，朱浩等（2008）證明了中草藥飼料可以改變消化酶活性，從而促進黃顙魚的生長。中草藥具有誘食作用，可以增加黃顙魚對飼料的興趣，大大降低飼料的浪費，變相的降低餌料系數(shù)。從蛋白質(zhì)效率上看，投喂中草藥后，可以提高黃顙魚對蛋白質(zhì)吸收利用，對生長起到一定的促進作用。而肝體比方面試驗組與對照組相比并沒有太大的變化，這與丁小峰（2006）的試驗結(jié)果相似。

3.2 復(fù)方中草藥對黃顙魚肉質(zhì)的影響 肌肉滴水損失和蒸煮損失是衡量肌肉蛋白質(zhì)保持水分的能力，直接影響肉的風味、質(zhì)地和營養(yǎng)成分等食用品質(zhì)（黃燕華等，2013）。試驗中投喂黃顙魚中草藥飼料后，蒸煮損失率和滴水損失率都有所下降，其中Diet 4的效果最好，中草藥含量為1.20%，從而也說明肉質(zhì)中的水分減少，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)成分變大，黃顙魚的品質(zhì)變高。王吉橋等（2008）研究證明了投喂中草藥可以提高黃顙魚肌肉中蘇氨酸，蛋氨酸等含量，大大提高肉質(zhì)的營養(yǎng)價值。張耀武等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥能夠提高黃河鯉肌肉中鮮味氨基酸的含量，提升其肌肉品質(zhì)。

3.3 復(fù)方中草藥對黃顙魚組織中補體C3、補體C4含量的影響 補體系統(tǒng)可廣泛參與機體抗微生物防御反應(yīng)以及免疫調(diào)節(jié)，也可介導免疫病理的損傷性反應(yīng)，是機體內(nèi)具有重要生物學意義的效應(yīng)系統(tǒng)和效應(yīng)放大系統(tǒng)（符華林，2002），而C3、C4為補體系統(tǒng)中固有的成分，在機體防御過程中可通過免疫復(fù)合物、調(diào)理吞噬細胞等機制對病原微生物進行清除及活化炎性細胞對靶細胞的殺傷作用（崔保安等，2003；王英超等，1998）。 研究表明，以添加復(fù)方中草藥（麻黃、苦參、黃岑、五倍子等）的飼料飼喂黃顙魚，可顯著提高其血清中補體C3、補體C4的含量 （盛竹梅等，2012）。李華等（2013）用富含復(fù)方中草藥（牛膝、板藍根、甘草、陳皮、肉桂、麥芽、神曲）的飼料飼喂大鱗鲆，發(fā)現(xiàn)4%的中草藥處理組大鱗鲆血清中補體C3含量持續(xù)上升。與以上研究結(jié)果相同，本試驗在飼料中添加黨參、黃芪、野菊花，同樣可以使黃顙魚血清中補體C3、補體C4的含量得到提升，進而提升黃顙魚免疫力。最適中草藥添加量有差異，可能是由于中草藥種類不同，富含活性物質(zhì)不同造成的。

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果表明，中草藥添加量為0.4%時，試驗組黃顙魚生長特性最好，肌肉滴水損失率和蒸煮損失率最低。在21 d中草藥添加量為0.2%與0.4%時，試驗組黃顙魚血清中補體C3、補體C4含量顯著升高。綜合生長、肉質(zhì)及免疫指標來看，黃顙魚最適復(fù)方中草藥添加量為0.4%，最佳給藥時間為21 d。