高效液相色譜法測定鹽酸丙酰左卡尼汀片中鹽酸丙酰左卡尼汀的含量

肖紅梅

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科、國家中醫(yī)藥管理局中藥化學(xué)三級實驗室，安徽 合肥 230001)

鹽酸丙酰左卡尼汀(Propionyl-L-carnitine hydrochloride)化學(xué)名為(R)-3-羧基-2-丙酰氧基-N，N，N-三甲基-1-丙胺鹽酸鹽，為左卡尼汀乙酰轉(zhuǎn)移酶刺激劑，可以擴(kuò)張外周微動脈血管，改善微循環(huán)，臨床上主要用于治療間歇性跛行、外周微血管疾病、慢性充血性心力衰竭等[1-4]。目前僅有意大利Sigma-tau 公司上市了片劑和注射用凍干粉末，我國目前沒有其任何制劑上市銷售，尚處于臨床研究階段。

1 儀器與試藥

1.1儀器SHIMADZU LC-20系列高效液相色譜儀(島津SHIMADZU公司)；XP205型分析天平(0.01 mg，梅特勒-托利多儀器有限公司)；SK5200超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；Mili-Q型超純水制備儀(密理博中國有限公司)。

1.2試藥鹽酸丙酰佐卡尼汀對照品(瑞陽制藥有限公司，批號：20141001)；乙酰左卡尼汀(瑞陽制藥有限公司，批號：20141101)，左卡尼汀(中國藥品生物制品檢定研究院，批號：101041-201503)，巴豆甜菜堿(中國藥品生物制品檢定研究院，批號:420033-201501)，鹽酸丙酰左卡尼汀片(瑞陽制藥有限公司，批號：20150101、20150102、20150103，規(guī)格：500 mg)；乙腈(色譜純、天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均為分析純；水(自制超純水)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件Thermo Hypersil Aps-2 氨基柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液(1.0 mol·L-1氫氧化鈉溶液調(diào) pH調(diào)至4.7)-乙腈(35∶65)為流動相，流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃，檢測波長205 nm。

2.2樣品溶液制備

2.2.1對照品貯備液 精密稱取鹽酸丙酰佐卡尼汀對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成5.050 2 g·L-1作為鹽酸丙酰左卡尼汀對照品貯備液。

2.2.2對照品溶液 精密量取對照品貯備液4 mL置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.3供試品溶液 取供試品10片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于鹽酸丙酰左卡尼汀20 mg)，置10 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.2.4空白輔料溶液制備 稱取鹽酸丙酰左卡尼汀片所用空白輔料(按處方配比)適量，加流動相振搖并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.5雜質(zhì)貯備溶液 精密稱取巴豆甜菜堿、乙酰左卡尼汀、左卡尼汀[5]適量，用流動相溶解并稀釋制成含巴豆甜菜堿252 mg·L-1、乙酰左卡尼汀244 mg·L-1和左卡尼汀261 mg·L-1的混合溶液，搖勻即得。

2.2.6系統(tǒng)適用性試驗溶液 精密稱取鹽酸丙酰左卡尼汀50.3 mg，置于10 mL量瓶中，先加少量流動相溶解，再加入1.0 mL雜質(zhì)貯備溶液，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1專屬性 分別取空白輔料溶液與系統(tǒng)適用性溶液20 μL，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示制劑中各輔料組分與各雜質(zhì)在205 nm的波長下不干擾主成分的測定，鹽酸丙酰左卡尼汀峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度為5.8，系統(tǒng)適用性符合要求。結(jié)果見表1，高效液相色譜圖見圖1。

表1 試驗溶液的系統(tǒng)適用性結(jié)果

注：A為空白輔料溶液;B為對照品溶液；C為系統(tǒng)適應(yīng)性溶液;1為鹽酸丙酰左卡尼?。?為乙酰左卡尼??；3為左卡尼汀；4為巴豆甜菜堿圖1 HPLC含量測定色譜圖

2.3.2定量限的考察 取對照品溶液濃溶液，稀釋20 000倍后，進(jìn)樣20 μL，計算鹽酸丙酰左卡尼汀定量限(S/N≈10)為0.253 mg·L-1。

2.3.3線性關(guān)系的考察 分別精密吸取“2.2.1”項下對照品貯備液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 μL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，以峰面積對進(jìn)樣濃度(g·L-1)進(jìn)行線性回歸，得鹽酸丙酰左卡尼汀回歸方程Y=808 112X+19 954，r=0.999 9。結(jié)果表明：鹽酸丙酰左卡尼汀在0.505 0～5.050 2 g·L-1范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.3.4精密度試驗 取“2.2.2”項下對照品溶液，精密吸取20 μL注入液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣6次，鹽酸丙酰左卡尼汀峰面積RSD為0.34%，結(jié)果表明方法精密度良好。

2.3.5重復(fù)性試驗 取鹽酸丙酰左卡尼汀片(批號:20150101)10片，按“2.2.3”項下方法處理并測定，鹽酸丙酰左卡尼丁的平均標(biāo)示含量為100.6%(n=6)，RSD為0.83%，結(jié)果表明測定重復(fù)性好。

2.3.6穩(wěn)定性試驗 精密吸取“2.2.3”項下供試品溶液于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測定，鹽酸丙酰左卡尼汀峰面積RSD為0.87%，結(jié)果表明在室溫放置條件下12 h內(nèi)對照品溶液基本穩(wěn)定。

2.3.7加樣回收率試驗 按處方量稱取空白輔料(按處方配比)適量，加入80%處方量的鹽酸丙酰左卡尼汀對照品，混合均勻。同法稱取空白輔料適量，按處方配比加入100%處方量，120%的鹽酸丙酰左卡尼汀對照品。精密稱取以上供試品適量(以空白輔料為固定量)，置于10 mL量瓶中，計算含量。回收率平均為100.1%，RSD為0.9%，具體數(shù)據(jù)見表2。結(jié)果表明測定方法準(zhǔn)確、可靠。

表2 加樣回收率試驗(n=9)

2.4樣品測定取鹽酸丙酰左卡尼汀片3批，按照“2.2.3”項下方法處理并測定鹽酸丙酰左卡尼汀片的含量，結(jié)果見表3。

表3 鹽酸丙酰左卡尼汀片含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

取鹽酸丙酰左卡尼汀對照品(批號：20141001)適量，用流動相溶解稀釋成適宜濃度(100 mg·L-1)，在190～400 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果溶液在205 nm波長處有最大吸收值，因此選擇205 nm為檢測波長。

在選擇色譜系統(tǒng)的過程中，參考了文獻(xiàn)[6-8]所使用的色譜系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)在使用的過程中鹽酸丙酰左卡尼汀峰峰形較差，拖尾因子較大，達(dá)到1.5以上，理論塔板數(shù)僅能達(dá)到2 000左右，滿足不了本研究的要求，后參考?xì)W洲藥典9.0收載的左卡尼汀有關(guān)物質(zhì)檢測項下的色譜系統(tǒng)[9]，其結(jié)果鹽酸丙酰左卡尼汀峰峰形較好，拖尾因子可以達(dá)到1.3以內(nèi)，理論塔板數(shù)達(dá)5 000以上，與相鄰的乙酰左卡尼汀雜質(zhì)峰分離度達(dá)到5.0以上，各雜質(zhì)峰的分離度也均符合要求，可以滿足本研究的要求，最終選擇本試驗所用的條件為鹽酸丙酰左卡尼汀片含量測定的方法。