摘葉處理對(duì)黑穗醋栗葉片和果實(shí)AsA-GSH循環(huán)代謝的影響

劉慶帥,孫小娟,李芳曉,秦 棟,霍俊偉

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院 寒地小漿果開(kāi)發(fā)利用國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,哈爾濱 150030)

抗壞血酸（ascorbic acid，AsA）是人類(lèi)必須從食物中攝取的一種小分子物質(zhì)，具有極好的抗氧化性，在防治壞血病、參與造血、促進(jìn)膠原蛋白的合成、治療哮喘、抗腫瘤[2]等方面有著良好的醫(yī)療價(jià)值。在植物內(nèi)它不僅能清除自由基，還作為某些還原酶的輔因子參與還原反應(yīng)，而且在調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)、誘導(dǎo)開(kāi)花、延緩衰老、促進(jìn)細(xì)胞分裂、碳氮代謝、信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和傳遞等多種生理調(diào)控過(guò)程中起著重要作用。L-半乳糖途徑是大多數(shù)植物中抗壞血酸生物合成的主要途徑，這在蘋(píng)果、葡萄、刺梨、番茄和獼猴桃等園藝作物上已得到驗(yàn)證?？箟难?谷胱甘肽（ascorbateglutathione，AsA-GSH）循環(huán)是AsA再生途徑之一，其在黑穗醋栗果實(shí)中AsA積累中的作用已被證實(shí)。

黑穗醋栗（Ribes nigrum L.）屬虎耳草科（Saxifragaceae）茶藨子屬落葉叢生灌木，果實(shí)為黑色漿果，有光澤，近球形，味酸甜，清香，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，以富含高水平的AsA而著稱(chēng)，其含量高達(dá)200～400 mg/100g FW，是蘋(píng)果和草莓的幾十倍，是重要的AsA植物源，由其制成的果醬、果酒、飲料等無(wú)公害或綠色食品備受歡迎。

本課題組前期研究表明，黑穗醋栗不同品種果實(shí)AsA含量不同，存在明顯差異，AsA的含量與抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）、脫氫抗壞血酸還原酶（DHAR）、單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）活性呈正相關(guān)，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，黑穗醋栗果實(shí)AsA含量高的品種，其葉片AsA含量也高（見(jiàn)表1），但一旦果實(shí)坐果，葉片AsA含量有明顯的下降過(guò)程，果實(shí)和葉片中AsA的關(guān)系如何？是否存在長(zhǎng)距離運(yùn)輸？這些還都需要進(jìn)一步探討。

現(xiàn)有研究表明植物葉片等源器官自身具備完整的AsA合成途徑，但由于AsA長(zhǎng)距離運(yùn)輸理論的提出，使植物庫(kù)器官中AsA形成機(jī)制變得復(fù)雜化，尤其對(duì)葡萄、蘋(píng)果、梨、越橘等低AsA含量的水果是否具有AsA的合成能力，及其組織間的差異是研究果實(shí)AsA積累機(jī)制的基礎(chǔ)，這也是提高果實(shí)AsA水平的前提。用喂飼擬南芥和紫花苜稽后，發(fā)現(xiàn)AsA可以從葉片經(jīng)過(guò)韌皮部向芽、花和根進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸；AsA轉(zhuǎn)運(yùn)參與了刺梨果實(shí)中AsA的積累，但刺梨除了果實(shí)外，其他各組織器官中DHA含量均較高，但葉片中的AsA和DHA的濃度相對(duì)其他葉柄和枝條更高一些，所以猜測(cè)刺梨也有可能以葉片為合成的源頭，把氧化產(chǎn)物長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)焦麑?shí)中；番茄的同位素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)表明，番茄植株的AsA從葉片運(yùn)出后大都積累在綠色未成熟的果實(shí)中，而在成熟果實(shí)中沒(méi)有積累。此外，植物中還存在不同組織器官間的AsA的長(zhǎng)距離運(yùn)輸，通過(guò)輸導(dǎo)組織調(diào)節(jié)庫(kù)和源組織中AsA的分布，然而長(zhǎng)距離運(yùn)輸對(duì)組織器官AsA積累作用程度目前還沒(méi)有明確的定論。這些研究表明，通過(guò)長(zhǎng)距離運(yùn)輸積累AsA的途徑，不僅在器官和組織間存在差異，也因物種的不同而有所差異。

為了進(jìn)一步研究黑穗醋栗果實(shí)中AsA與葉片中AsA含量的關(guān)系，我們進(jìn)行了摘果試驗(yàn)，在黑穗醋栗果實(shí)開(kāi)始坐果時(shí)，摘去50%果實(shí)（總坐果量的50%），探討了摘果處理對(duì)AsA含量及AsA-GSH循環(huán)的影響，結(jié)果表明：摘果處理后能顯著增加果實(shí)中AsA的含量，但葉片中AsA含量有所減少。而摘果處理組枝條果實(shí)中AsA含量的增加與減少與自身AsA的再生循環(huán)沒(méi)有太大聯(lián)系，可能受枝條總的葉片中AsA含量的影響。但葉片減少是否也像摘果處理那樣影響果實(shí)AsA含量及AsA-GSH代謝循環(huán)？至今還未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道。

因此，為了全面揭示黑穗醋栗果實(shí)中AsA合成積累的機(jī)理，本次實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摘葉處理，探討摘葉處理對(duì)葉片和果實(shí)AsA含量及AsA-GSH代謝循環(huán)的影響，也為未來(lái)選育高含量AsA加工專(zhuān)用新品種提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試材為8年生生長(zhǎng)勢(shì)相對(duì)一致，但果實(shí)AsA含量差異顯著的3個(gè)栽培品種：亞德、布勞德和利桑佳，其果實(shí)和葉片AsA含量見(jiàn)表1；試材定植于東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑穗醋栗種質(zhì)資源圃?xún)?nèi)，管理水平中等。

表1 黑穗醋栗品種及AsA含量（±標(biāo)準(zhǔn)差）

1.2 摘葉處理

在黑穗醋栗果實(shí)開(kāi)始坐果（5月初）時(shí)，在每個(gè)品種的單株上選取生長(zhǎng)勢(shì)一致，結(jié)果數(shù)以及葉片數(shù)基本一致的兩個(gè)枝條，對(duì)其中1條進(jìn)行摘葉處理，去除其50%的葉片，另外一個(gè)枝條做對(duì)照，每個(gè)品種處理30個(gè)單株，每次采樣后保證處理枝條的葉片始終是對(duì)照枝條總?cè)~片數(shù)的50%左右。每隔7天進(jìn)行一次采樣，直至果實(shí)成熟，共采樣8次。每次取樣后，當(dāng)天或第二天測(cè)量部分新鮮果實(shí)和葉片樣品中的AsA含量，其余果實(shí)和葉片經(jīng)液氮冷凍后，貯存于-80℃冰箱，用于相關(guān)酶活性測(cè)定。

1.3 測(cè)定方法

AsA含量的測(cè)定采用高效液相色譜法。T-AsA、DHA含量的測(cè)定參考Kampfenkel的方法。APX、MDHAR、DHAR、GR活性測(cè)定分別參考Asada 以及Ma 和 Cheng的方法，GSH和GSSG含量的測(cè)定參考Griffith的方法。以上測(cè)定均重復(fù)3次。

圖1 3個(gè)不同黑穗醋栗品種坐果后1-8周果實(shí)形態(tài)變化

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

用Execl數(shù)據(jù)處理，并作圖，用DPS9.5軟件進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)分析。

在數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析中，未摘葉處理（對(duì)照組）葉片、未摘葉處理（對(duì)照組）果實(shí)、摘葉處理（處理組）葉片和摘葉處理（處理組）果實(shí)分別記為CL、CF、TL和TF。

2 結(jié)果與分析

2.1 摘葉處理對(duì)黑穗醋栗葉片及果實(shí)AsA含量的影響

無(wú)論是高AsA含量品種亞德，還是低AsA含量品種利桑佳，其葉片和果實(shí)的AsA含量變化趨勢(shì)相同（圖2A-C），均是隨著果實(shí)的發(fā)育而增加，在第3周達(dá)到最大值，‘亞德’、‘布勞德’和‘利桑佳’每100 g鮮重果實(shí)中的AsA含量分別為424.03 mg、256.97 mg和274.96 mg；葉片中的AsA含量分別為122.36 mg、81.07 mg和70.04 mg；隨后由于果實(shí)的膨大（圖1）而有所下降，在果實(shí)著色期和成熟期（第5～8周）趨于穩(wěn)定。

與未摘葉處理（對(duì)照）相比，摘葉處理明顯增加了處理組葉片中AsA含量，且差異極顯著（p＜0.01），在第3周，亞德品種摘葉處理組葉片的AsA含量是對(duì)照的1.31倍；摘葉處理對(duì)果實(shí)中AsA含量的影響與葉片相反，摘葉處理組中，果實(shí)AsA含量明顯低于對(duì)照，且差異極顯著（p＜0.01），在第3周，利桑佳果實(shí)中AsA含量是對(duì)照的0.87倍；這可能是隨著葉片的相對(duì)減少，果實(shí)中的AsA含量相對(duì)減少，但反過(guò)來(lái)可能也促進(jìn)了葉片中AsA的合成。

圖2 3個(gè)黑穗醋栗品種摘葉處理與對(duì)照組抗壞血酸含量比較

2.2 摘葉處理對(duì)黑穗醋栗葉片及果實(shí)GSH含量及GSH/GSSG的影響

3個(gè)黑穗醋栗品種果實(shí)中GSH的含量在整個(gè)果實(shí)發(fā)育期內(nèi)無(wú)顯著性變化（以布勞德為例）。在坐果后第一周，果實(shí)中GSH含量比較低，隨后略有上升至第3周，然后緩慢下降，下降幅度不大（圖3A）。摘葉處理后，對(duì)照組與處理組果實(shí)中GSH含量無(wú)顯著性差異（p＞0.05），表明葉片的相對(duì)減少，對(duì)果實(shí)中GSH含量沒(méi)有顯著性的影響。

3個(gè)黑穗醋栗品種葉片中GSH的含量在整個(gè)試驗(yàn)周期呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)（以布勞德為例）。在坐果后第1周含量最低（15.93 mg/100g），隨后迅速上升，在第3周達(dá)到峰值（34.02 mg/100g），是第1周的2.13倍，隨后由于果實(shí)的膨大而有所下降，在果實(shí)著色期和成熟期（第5～8周）趨于平穩(wěn)，與果實(shí)內(nèi)AsA含量變化趨勢(shì)相似。

GSH/GSSG比值用來(lái)衡量谷胱甘肽的氧化還原狀態(tài)，通常使用GSH/GSSG比值的變化來(lái)表明AsA-GSH循環(huán)在AsA的生成中起重要作用。隨著果實(shí)的發(fā)育，果實(shí)中GSH/GSSG比值呈緩慢上升的趨勢(shì)（圖3B），而葉片中GSH/GSSG值變化幅度較大，但始終低于同期果實(shí)中的比值（圖3B）。葉片中GSH/GSSG值的變化趨勢(shì)與葉片中AsA含量的變化同步，在坐果后1周比值最低，隨著果實(shí)的發(fā)育，呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在第3周達(dá)到峰值，為第1周的4.7倍，然后逐漸下降，下降至第8周為1.9，與第1周GSH/GSSG值相差不大。

與未摘葉處理（對(duì)照）相比，摘葉處理增大了處理組葉片中GSH/GSSG值，第4周相差最大，差值為0.5；但摘葉處理對(duì)果實(shí)中GSH/GSSG值的影響不大。這表明葉片的相對(duì)減少對(duì)葉片中AsA-GSH循環(huán)有一定的影響。

2.3 摘葉處理對(duì)黑穗醋栗葉片及果實(shí)AsA-GSH循環(huán)相關(guān)酶活性的影響

圖3 布勞德GSH的含量及GSH/GSSG的比值

圖4-A 亞德摘葉處理與對(duì)照中APX活性的比較

圖4-B 布勞德摘葉處理與對(duì)照中APX活性的比較

圖4-C 利桑佳摘葉處理與對(duì)照中APX活性的比較

APX是植物體內(nèi)利用AsA作為電子供體清除H2O2的酶，清除的同時(shí)使AsA氧化成MDHA。3個(gè)黑穗醋栗品種內(nèi)APX酶活性變化趨勢(shì)相同（圖4A-C），但每個(gè)品種葉片和果實(shí)內(nèi)酶活性的變化存在差異。在果實(shí)中，APX活性初期活性較高，之后隨著果實(shí)的發(fā)育，呈下降趨勢(shì)（圖4A-C），其中1～3周下降幅度較大，4～8周酶活性起伏變化不大，這與果實(shí)中AsA含量變化趨勢(shì)正好相反。而在葉片中，酶活性在1～2周先下降，隨后迅速上升至第3周達(dá)到峰值，‘亞德’、‘布勞德’和‘利桑佳’葉片中的APX活性分別為39.35 U/g、36.37 U/g和33.57 U/g；隨后由于果實(shí)的膨大而有所下降，但在果實(shí)的成熟期（第7～8周）有輕微上升。

與未摘葉處理（對(duì)照）相比，摘葉處理增加了處理組果實(shí)中APX活性，在第3周，亞德品種處理組果實(shí)的酶活性是對(duì)照組的1.12倍；摘葉處理對(duì)葉片中APX活性的影響與果實(shí)相反，處理組中，葉片中的酶活性低于對(duì)照，在第3周，利桑佳品種葉片中APX活性是對(duì)照的0.93倍；這可能是由于葉片的減少，導(dǎo)致葉片中APX活性降低，但反過(guò)來(lái)促進(jìn)了果實(shí)中APX活性的升高。

DHAR作為AsA再生系統(tǒng)中關(guān)鍵酶，能將氧化態(tài)的DHA還原成AsA。3個(gè)黑穗醋栗品種中DHAR活性的高低與AsA含量成正比，但無(wú)論是高AsA含量品種亞德，還是低AsA含量品種利桑佳，其DHAR活性的變化趨勢(shì)相同（圖5A-C），均隨著果實(shí)的發(fā)育呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢(shì)，但與AsA含量變化不同的是，其酶活性在坐果后第4周達(dá)到峰值（滯后1周），‘亞德’、‘布勞德’和‘利桑佳’果實(shí)中DHAR活性分別為46.71 U/g、42.68 U/g和34.58 U/g；葉片中DHAR活性分別為56.22 U/g、53.79 U/g和49.48 U/g；隨后由于果實(shí)的膨大而有所下降，在果實(shí)成熟期（第7～8周）趨于穩(wěn)定。

圖5-A 亞德摘葉處理與對(duì)照DHAR活性比較

與未摘葉處理（對(duì)照）相比，摘葉處理對(duì)處理組果實(shí)中DHAR活性無(wú)顯著性影響；而葉片中，處理組葉片中DHAR活性始終高于同期對(duì)照組葉片酶活性，且AsA越高，差異越顯著（p＜0.05）。從而說(shuō)明，摘葉處理對(duì)葉片中DHAR活性有一定的影響，但對(duì)果實(shí)中DHAR活性的影響不大。

MDHAR能將氧化態(tài)的MDH還原成AsA，是AsA-GSH循環(huán)中的關(guān)鍵酶之一。3個(gè)黑穗醋栗品種中MDHAR活性變化趨勢(shì)相同，因此用布勞德代表所有這3個(gè)品種。果實(shí)和葉片中MDHAR活性均呈先上升后下降趨勢(shì)，在第4周達(dá)到峰值（圖6），‘布勞德’果實(shí)和葉片中MDHAR活性分別為19.64 U/g和24.37 U/g。與未摘葉處理（對(duì)照）相比，處理組果實(shí)中MDHAR活性有所降低，而處理組葉片中MDHAR活性有所升高。

GR對(duì)GSH的氧化還原狀態(tài)和植物的抗逆性有著重要的作用，可將GSSG還原成GSH。隨著果實(shí)的發(fā)育，3個(gè)品種中GR活性的變化趨勢(shì)相似，再次以布勞德為例。自坐果后，GR活性隨著果實(shí)的發(fā)育，呈下降趨勢(shì)（圖7），其中1～3周下降幅度較大，4～8周酶活性起伏變化不大趨于穩(wěn)定，與果實(shí)中APX活性變化趨勢(shì)相同。而在葉片中，酶活性在1～3周迅速上升至第3周達(dá)到峰值（26.03 U/g），隨后由于果實(shí)的膨大而有所下降，但在果實(shí)的著色期和成熟期（第5～8周）趨于穩(wěn)定。

圖5-B 布勞德摘葉處理與對(duì)照DHAR活性比較

圖5-C 利桑佳摘葉處理與對(duì)照DHAR活性比較

圖6 布勞德摘葉處理與對(duì)照MDHAR活性比較

圖7 布勞德摘葉處理與對(duì)照組GR活性比較

與未摘葉處理（對(duì)照）相比，摘葉處理降低了處理組果實(shí)中GR的活性，但無(wú)顯著性差異（p＞0.05）；而葉片中，摘葉處理明顯地增加了處理組第3周葉片中GR的活性，且差異顯著（p＜0.05），第3周時(shí)處理組葉片中GR的活性是對(duì)照組的1.1倍，而其他坐果時(shí)期差異不顯著。

3 討論與結(jié)論

AsA是植物體內(nèi)一種重要的非酶抗氧化劑和氧化還原物質(zhì)，在清除活性氧自由基及抗氧化方面具有非常重要的生理功能。目前，對(duì)獼猴桃、刺梨、蘋(píng)果、葡萄、棗和酸棗等園藝作物的AsA生物合成和代謝途徑進(jìn)行了深入研究，對(duì)引起高等植物抗壞血酸含量差異的主要因素進(jìn)行了探討。隨著對(duì)高等植物中 AsA生物合成和代謝途徑的深入了解，特別是明確了AsA生物合成的 L-半乳糖途徑和AsA-GSH循環(huán)再生途徑后。通過(guò)研究AsA 含量與AsA-GSH循環(huán)再生途徑相關(guān)的酶活性變化的關(guān)系，為選育高含量AsA黑穗醋栗新品種提供理論依據(jù)。

黑穗醋栗作為高AsA含量的小漿果，其AsA的合成積累規(guī)律也日益受到人們的關(guān)注。在果實(shí)中AsA的含量或其氧化還原態(tài)通常與再生代謝相關(guān)酶的活性相關(guān)。本研究中以AsA含量差異較大的3個(gè)黑穗醋栗品種‘亞德’、‘布勞德’和‘利桑佳’為試材，測(cè)定了3種AsA含量不同的黑穗醋栗品種中相關(guān)酶的活性，結(jié)果表明，隨著坐果時(shí)間的增加，3個(gè)不同品種黑穗醋栗果實(shí)中AsA的含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，果實(shí)AsA的迅速積累期主要在坐果第2～3周，而且均在坐果第3周時(shí)達(dá)到最大值，這與果實(shí)的膨大期相吻合，也可能與AsA參與果實(shí)初期細(xì)胞分裂有關(guān)，隨后隨著果實(shí)的膨大AsA含量逐漸下降。這與蘋(píng)果、獼猴桃、小麥的AsA積累特點(diǎn)基本一致，在果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育初期AsA含量迅速上升，在果實(shí)發(fā)育中后期含量逐漸下降。

越桔、草莓、甜櫻桃、獼猴桃、蘋(píng)果、枸杞等的研究表明，AsA含量與DHAR和MDHAR活性密切相關(guān)。將MDHAR在番茄和煙草葉綠體中超表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)它們的AsA含量分別上升1.2倍和2.2倍。而將小麥DHAR分別在煙草和玉米中過(guò)量表達(dá)后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DHAR活性增加了32倍多，煙草和玉米葉片的AsA含量增加了4倍，不光對(duì)AsA含量的有所影響，而且GSH含量也增加了2.6倍，且GSH/GSSG 的比率也增加，說(shuō)明由DHAR過(guò)量表達(dá)引起的AsA含量提高的同時(shí)，GSH的合成也伴隨著增加。這在馬鈴薯和擬南芥中同樣得到了證實(shí)。這些結(jié)果說(shuō)明，AsA再生能力在維持AsA含量中起著重要作用，且可能在特定條件和發(fā)育階段對(duì)AsA水平起到主要的調(diào)控作用。在本實(shí)驗(yàn)中研究結(jié)果表明：與AsA-GSH循環(huán)再生途徑相關(guān)的DHAR、MDHAR和GR酶活性變化是先增加后減少，但DHAR和MDHAR活性最大值出現(xiàn)在第4周，與AsA含量相比延后一周。推測(cè)這可能與果實(shí)的快速膨脹有關(guān)，這樣能夠保證果實(shí)膨脹后，AsA含量下降的不那么快。而APX活性變化與之相反，在第1～3周迅速下降，在第3周達(dá)到最小值，隨后逐漸趨于平穩(wěn)。APX是植物體內(nèi)利用AsA作電子供體清除H2O2的關(guān)鍵酶，APX將AsA轉(zhuǎn)化為MDHA，APX活性的降低有助于確保AsA含量的積累與穩(wěn)定。這些研究結(jié)果不僅證實(shí)了AsA含量與DHAR和MDHAR活性密切相關(guān)，而且有力地支持了AsA-GSH循環(huán)在幾種園藝作物中的AsA合成和積累中起著至關(guān)重要的作用。我們的試驗(yàn)結(jié)果也表明在黑穗醋栗果實(shí)和葉片中AsA-GSH循環(huán)對(duì)AsA的生物合成和積累起著重要作用。

GSH/GSSG值越高意味著GSH量越高，同時(shí)表明有越多的DHA可通過(guò)DHAR和GSH的作用轉(zhuǎn)化為AsA。本研究結(jié)果表明，黑穗醋栗果實(shí)中的GSH/GSSG比值總是大于葉片，而且黑穗醋栗葉片中GSH/GSSG比值與AsA含量呈正相關(guān)。對(duì)枝條進(jìn)行摘葉處理后，葉片中無(wú)論是GSH的含量還是GSH/GSSG的比值都有下降的趨勢(shì)，說(shuō)明摘葉處理對(duì)葉片中抗壞血酸的ASA-GSH循環(huán)有一定影響，而對(duì)果實(shí)中無(wú)太大影響。摘葉處理后，對(duì)照組果實(shí)中GR活性略大于處理組，但無(wú)顯著性差異，這說(shuō)明摘葉處理對(duì)其果實(shí)中GR活性影響不大。摘葉處理后第3周，葉片中GR活性迅速升高，與同期的對(duì)照組相比差異顯著，而其他坐果時(shí)期并無(wú)顯著性差異。這與在番茄中的研究結(jié)論相一致。這表明，GSH及GR參與AsA-GSH循環(huán)來(lái)完成黑穗醋栗中AsA的積累。

目前研究發(fā)現(xiàn)在植物的細(xì)胞質(zhì)、葉綠體和胞外環(huán)境中都含有AsA，且AsA濃度達(dá)到毫克級(jí)，AsA在細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間都是可以自由移動(dòng)的，說(shuō)明在植物中存在高效的AsA跨膜和長(zhǎng)距離轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，因此AsA在植株內(nèi)的移動(dòng)也是影響AsA含量的一個(gè)重要因素，特別是器官或組織間的長(zhǎng)距離運(yùn)輸。但由于AsA長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)奶岢?，使植物?kù)器官中 AsA 的形成機(jī)制變得復(fù)雜化。摘葉處理對(duì)果實(shí)中AsA含量有一定的影響，因此我們猜測(cè)AsA在葉片和果實(shí)中存在長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)年P(guān)系，其AsA含量主要取決于果實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境，而源-庫(kù)運(yùn)輸對(duì)果實(shí)AsA含量的影響并不大。此外擬南芥和紫花苜蓿的研究表明，AsA的合成主要在源葉中，可經(jīng)韌皮部向芽、花等庫(kù)組織進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸。這在楊樹(shù)和馬鈴薯中也得到了相同的結(jié)果，這進(jìn)一步證實(shí)了AsA存在長(zhǎng)距離的運(yùn)輸。在我們之前的研究中，通過(guò)摘果處理來(lái)測(cè)試黑穗醋栗中AsA是否存在長(zhǎng)距離運(yùn)輸，我們發(fā)現(xiàn)摘果處理前黑穗醋栗葉片中的AsA含量比果實(shí)高得多，然而，摘果處理后，葉片中的AsA含量立即下降，果實(shí)中AsA水平高于葉片。因此，這種現(xiàn)象可能是黑穗醋栗葉片和果實(shí)之間AsA長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)拈g接證據(jù)，與本實(shí)驗(yàn)摘葉處理試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

但是Hancock曾通過(guò)多種試驗(yàn)證明黑穗醋栗葉片中合成的AsA對(duì)果實(shí)中AsA的積累無(wú)影響，認(rèn)為主要是通過(guò)L-半乳糖途徑來(lái)合成AsA，還發(fā)現(xiàn)樹(shù)莓中的AsA主要取決于自身的合成能力，幾乎不能檢測(cè)到AsA運(yùn)輸?shù)拇嬖?，但是葉片對(duì)果實(shí)的糖供應(yīng)能力可能對(duì)樹(shù)莓AsA的合成具有一定的調(diào)控能力。對(duì)源葉和果實(shí)的遮陰實(shí)驗(yàn)表明，單獨(dú)對(duì)番茄果實(shí)遮陰會(huì)導(dǎo)致果實(shí)AsA含量的顯著下降，說(shuō)明光照在番茄成熟果實(shí)AsA原位合成中起重要作用。同時(shí)有研究指出，AsA從源葉到果實(shí)的運(yùn)輸取決于果實(shí)的生長(zhǎng)階段，如摘除黑穗醋栗的花朵或番茄果實(shí)并不影響它們果實(shí)中AsA的積累。還有研究表明，刺梨在果實(shí)發(fā)育后期才開(kāi)始積累AsA，直至果實(shí)成熟，且接近成熟時(shí)AsA積累速率最高，這表明果實(shí)內(nèi)AsA積累可能受到不同生長(zhǎng)發(fā)育階段的調(diào)控。因此不同作物的AsA的積累可能有所不同，黑穗醋栗的AsA的長(zhǎng)距離運(yùn)輸還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

摘葉處理會(huì)改變果實(shí)表面光照、溫度等外部環(huán)境條件的變化，進(jìn)而影響黑穗醋栗果實(shí)中AsA的最終含量。對(duì)黑穗醋栗進(jìn)行摘葉處理后，葉片的相對(duì)減少對(duì)AsA含量以及相關(guān)酶的活性有一定的影響，且該影響在果實(shí)和葉片之間存在差異。通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析表明，摘葉處理后，黑穗醋栗葉片中AsA含量以及其他酶活性均有所增加，而果實(shí)中AsA含量、APX活性以及MDHAR活性有所降低，GSH含量、DHAR和GR活性無(wú)變化。雖然本實(shí)驗(yàn)對(duì)黑穗醋栗果實(shí)和葉片AsA含量的關(guān)系進(jìn)行了初步推斷，但最直接的證據(jù)可用同位素示蹤法來(lái)驗(yàn)證，這也是未來(lái)我們的研究重點(diǎn)之一。另外黑穗醋栗AsA的主要合成途徑是L-半乳糖途徑，其兩種關(guān)鍵酶L-半乳糖脫氫酶和L-半乳糖-1，4-內(nèi)酯脫氫酶是如何在摘果或摘葉中調(diào)控葉片和果實(shí)中AsA的含量的還需要繼續(xù)研究。