深低溫保存紅細(xì)胞技術(shù)的研究及臨床應(yīng)用

何國松 曾波

【摘 要】

冰凍紅細(xì)胞是針對稀有血型開展的項(xiàng)目，解凍去甘油紅細(xì)胞是稀有血型患者急救輸血最常用的成分血。

【關(guān)鍵詞】 深低溫；紅細(xì)胞；臨床應(yīng)用

【中圖分類號】R181.3+2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】

B 【文章編號】1005-0019（2018）14-206-01

冰凍紅細(xì)胞是針對稀有血型開展的項(xiàng)目，解凍去甘油紅細(xì)胞是稀有血型患者急救輸血最常用的成分血。本次實(shí)驗(yàn)在保證血液質(zhì)量的前提下，盡量縮短手工制備解凍去甘油紅細(xì)胞的耗時(shí)，延長血液保存期限，及時(shí)、有效的為病人提供所需血液成分。

成立14年來，稀有血型庫建立在冊的稀有血型獻(xiàn)血者A型81人，5人無聯(lián)系；B型65人，7人無聯(lián)系；O型89人，8人無聯(lián)系；AB型19人，3人無聯(lián)系，稀有血型獻(xiàn)血者分布文山8縣市，急需血液時(shí)不能及時(shí)采集。臨時(shí)在緊急情況下一袋RH（D）陰性血用到患者身上之前要經(jīng)歷一個(gè)漫長的過程，所以開展冰凍紅細(xì)胞項(xiàng)目勢在必行，解凍去甘油紅細(xì)胞制備過程研究應(yīng)用是稀有血型患者的福音。

1 項(xiàng)目研究的目的及意義

1.1 RH（D）陰性患者的緊急輸血 由于RH（D）陰性血型在我國所占的比例極少（0.3%），常規(guī)低溫保存的血液期限短，所以在病人需要時(shí)都不能及時(shí)供應(yīng)[1]，但在開展冰凍紅細(xì)胞項(xiàng)目后，所有采集到的RH（D）陰性血液在規(guī)定時(shí)間內(nèi)都進(jìn)行冰凍保存，在病人需要時(shí)解凍去甘油后就能及時(shí)輸入患者體內(nèi)。

1.2 新生兒溶血病換血治療由抗-D抗體引起的新生兒溶血病，是所有血型抗體引起溶血病中最嚴(yán)重的一種，它發(fā)病快、病程短、愈后差，如果不及時(shí)進(jìn)行血液置換甚至?xí)猩ｋU(xiǎn)[2]。項(xiàng)目的開展也為新生兒溶血病患者帶來了更多的福音。

1.3 自然災(zāi)害和戰(zhàn)略儲備開展冰凍紅細(xì)胞項(xiàng)目后血液的保持期限由35天延長至了十年，在遇到特大自然災(zāi)害或非常時(shí)期時(shí)可以及時(shí)供給血液挽救生命，是自然災(zāi)害和戰(zhàn)備的堅(jiān)強(qiáng)后盾。

2 采取的技術(shù)措施和方法步驟

2.1 所需細(xì)胞保護(hù)劑和細(xì)胞洗滌劑 ①復(fù)方甘油②9%濃氯化鈉③0.9%注射用生理鹽水

2.2 采取的技術(shù)措施項(xiàng)目開展后由于去甘油化時(shí)間過長，在緊急情況下不能給病人及時(shí)的供應(yīng)血液，所以結(jié)合我站實(shí)際情況，著手從試劑滴速、離心力、離心時(shí)間等關(guān)鍵控制點(diǎn)進(jìn)行了反復(fù)的試驗(yàn)，每袋試驗(yàn)的血液都經(jīng)過質(zhì)量檢測，通過試驗(yàn)分析得出：試劑加入的快慢對血液質(zhì)量沒有顯著變化；但是由于紅細(xì)胞的可塑變形性，提高離心力、縮短離心時(shí)間反而得到了滿意的結(jié)果，不但沒有增加紅細(xì)胞的破壞率還提高了紅細(xì)胞的回收率。

2.3 方法步驟

2.3.1 紅細(xì)胞甘油化：

①用無菌接管機(jī)將要冰凍的紅細(xì)胞與轉(zhuǎn)移袋聯(lián)接。

②將轉(zhuǎn)移完畢的紅細(xì)胞及紅細(xì)胞空袋一起離心（程序12）。

③ 將離心完畢的紅細(xì)胞的上清液用分漿夾引流入紅細(xì)胞空袋中，再用無菌接管機(jī)去掉紅細(xì)胞空袋同時(shí)聯(lián)接輸血器及復(fù)方甘油溶液（1U：160ml，2u： 320ml）。

④將紅細(xì)胞放在旋轉(zhuǎn)儀上，用輸血器將復(fù)方甘油溶液由慢到快（每袋15-20分鐘）滴入紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移袋，滴加完畢后，熱合、斷袋。靜置平衡30分鐘。

⑤用計(jì)算機(jī)進(jìn)行血液轉(zhuǎn)化錄入，打印《血液交接單》交供血科包裝入庫放置入-80℃低溫冰箱保存。

2.3.2 解凍去甘油紅細(xì)胞：

①從冰箱取出冰凍紅細(xì)胞，放入37℃干式融化箱（或水浴箱）中振搖融化15分鐘。

②將融化后的冰凍紅細(xì)胞連接一空袋后離心（程序12）， 離心完畢后，將紅細(xì)胞上清液用分漿夾引流回空袋中，熱合去掉空袋。

③用無菌接管機(jī)將去甘油紅細(xì)胞與輸血器及濃氯化鈉溶液聯(lián)接。

④將紅細(xì)胞放在旋轉(zhuǎn)儀或采血稱上，用輸血器將濃氯化鈉溶液以6ml/分（120滴/分）的速度加入紅細(xì)胞中（1U：80ml，2u： 160ml），加入完畢后，平衡3分鐘。

⑤再用無菌接管機(jī)去掉濃氯化鈉溶液袋，同時(shí)聯(lián)接一次性使用鹽水聯(lián)袋，以80ml/分的速度加氯化鈉注射液300ml，平衡5分鐘。

⑥ 將平衡后的紅細(xì)胞取出離心（程序12）。離心完畢后，將紅細(xì)胞上清液引流入空聯(lián)袋中。

⑦以80ml/分的速度加入氯化鈉注射液300ml，平衡5分鐘。將平衡后的紅細(xì)胞取出離心（程序12）。離心完畢后，將上清液引流入空聯(lián)袋中，熱合、斷袋。

⑧無菌接合上一套三聯(lián)袋生理鹽水，按每次加入200ml生理鹽水洗滌紅細(xì)胞數(shù)次，一般在3至7次之間，直到上清液清亮為止。

⑨洗滌完畢后加入生理鹽水至紅細(xì)胞溶液為200ml±10%，并引流一截至少20cm血辮。

⑩用計(jì)算機(jī)進(jìn)行血液轉(zhuǎn)化錄入，打印《血液交接單》交供血科包裝、入庫。

3 解凍去甘油紅細(xì)胞的臨床應(yīng)用及療效觀察

項(xiàng)目開展三年多以來，做了RH（D）陰性血型冰凍紅細(xì)胞196袋。隨機(jī)抽取輸用解凍去甘油紅細(xì)胞48例患者分析，分別為顱腦損傷、新生兒溶血病、外傷、消化道出血四種疾病類型各12例，通過回訪發(fā)現(xiàn)輸血前血紅蛋白分別為71g/l、100g/l、73g/l、50g/l，輸血后24小時(shí)血紅蛋白分別為92g/l、177g/l、89g/l、71g/l，輸血量分別為3U、2U、5U、2U，輸血均有效。

4 實(shí)施結(jié)果

我站在2013討論決定開展冰凍紅細(xì)胞項(xiàng)目，通過項(xiàng)目計(jì)劃、外出學(xué)習(xí)、反復(fù)試驗(yàn)，得到質(zhì)量保證后，在2014年2月使解凍去甘油的過程從7小時(shí)縮短到了3個(gè)小時(shí)，達(dá)到了我們預(yù)期的效果。改良法解凍去甘油紅細(xì)胞縮短洗滌時(shí)間，及時(shí)提供RH（D）陰性血液、輸注效果好，讓病人和醫(yī)生都能夠很快的接受，能得到更快的推廣。所以深低溫保存紅細(xì)胞技術(shù)的開展是一件利國利民的好事，不但節(jié)約稀有RH（D）陰性血液資源，又能及時(shí)、有效提供給RH（D）陰性病人使用，為危重病人提供生命的保障。

5 結(jié)束語

在開展冰凍紅細(xì)胞項(xiàng)目之前，RH（D）陰性患者在需要輸注血液時(shí)要提前預(yù)約，血液到達(dá)醫(yī)院輸入病人體內(nèi)也需要10小時(shí)左右。對于病人來說，時(shí)間就是生命，在緊急搶救時(shí)如果血液能及時(shí)輸入病人體內(nèi)，那就是贏得了時(shí)間、贏得了生命的希望，對于后期治療來說會愈后更好，特別是新生兒溶血的病人，及早得到換血治療，留下的后遺癥就會更少、更輕。

參考文獻(xiàn)

[1] 張新龍，劉海英.少數(shù)民族地區(qū)RhD（-）血液冰凍保存洗滌復(fù)蘇技術(shù)及臨床應(yīng)用[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志，2017，4（5）：803-804.

[2] 湛玉武，李康生.惠州市稀有血型Rh陰性冰凍血庫的建立及臨床意義[J].青島醫(yī)藥衛(wèi)生，2018，50（3）：220-222.