IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征參數(shù)的相關(guān)性分析

代聰偉 李娜 楊艷艷 王蓓 閆萍

河北省人民醫(yī)院婦科（石家莊 050051）

IGFs家族包括IGF?1和IGF?2兩類生長(zhǎng)因子及其相應(yīng)受體，IGF?1基因結(jié)構(gòu)上與胰島素原具有高度的同源性［1-2］，當(dāng)IGF?1及其受體的分泌和表達(dá)發(fā)生異常時(shí)就有可能導(dǎo)致子宮內(nèi)膜的異常增生，誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生［3-4］。有研究表明IGF?2具有腫瘤抑制效應(yīng)，而腫瘤組織中IGF?2的非功能性突變也潛在的抑制了主體的免疫功能［5］。胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白（insulin?1ike growth factor binding Protein，IGFBP）也屬于 IGFs家族，其中IGFBP?3在血液中的濃度很多，與胃癌、肝癌等惡性腫瘤有密切的關(guān)系［6-7］，但是與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系還無(wú)相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)IGF?1、IGF?2、IGFBP?3在子宮內(nèi)膜癌組織與癌旁組織中的表達(dá)，探討其與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征參數(shù)的相關(guān)性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 采用回顧性、總結(jié)研究方法，2015年9月至2017年12月選擇在我院進(jìn)行手術(shù)診治的子宮內(nèi)膜癌患者120例的癌組織標(biāo)本與癌旁組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前未接受放療、化療及激素治療；有完整的臨床病理資料；病理檢查診斷為子宮內(nèi)膜癌；癌旁組織與離癌組織距離≥3 cm；手術(shù)方式為子宮內(nèi)膜癌分期手術(shù)（廣泛子宮切除術(shù)、雙附件切除及盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)）；醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：婦科內(nèi)分泌疾病及生殖道炎癥；妊娠與哺乳期婦女標(biāo)本。

在120例患者的組織標(biāo)本中，年齡最小45歲，最大78歲，平均（65.33±4.21）歲，年齡≥ 60歲60例；分化程度：高分化80例，中分化20例，低分化20例；臨床分期：Ⅰ期60例，Ⅱ期40例，Ⅲ期20例；病理類型：子宮內(nèi)膜腺癌70例，漿液性乳頭狀腺癌30例，透明細(xì)胞癌20例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例；肌層浸潤(rùn)50例；形態(tài)：局灶型50例，彌漫型70例。

1.2 免疫組化方法 所有患者的癌組織標(biāo)本與癌旁組織標(biāo)本取材后，甲醛固定、石蠟包埋，制成石蠟切片（4 μm厚）。兔抗人IGF?1、IGF?2、IGFBP?3多克隆抗體來(lái)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，DAB酶底物顯色劑來(lái)自廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司，超敏鏈霉菌抗生物素蛋白?過(guò)氧化酶染色法（S?P免疫組化法）廣譜免疫組化試劑盒來(lái)自廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司。將切片組織37℃烤24 h，3%H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶10 min，抗原修復(fù)后加入一抗，濕盒內(nèi)4℃過(guò)夜，二抗37℃孵育30 min。DAB顯色，脫水封片后在光學(xué)顯微鏡觀察。取已知陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 觀察指標(biāo) IGF?1蛋白表達(dá)陽(yáng)性為胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒，IGF?2蛋白表達(dá)陽(yáng)性為胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，IGFBP?3蛋白表達(dá)陽(yáng)性染色為黃色或者棕黃色顆粒位于細(xì)胞質(zhì)中。染色強(qiáng)度陰性為0分、染色強(qiáng)為3分、染色清晰為2分、染色弱但強(qiáng)于陰性對(duì)照為1分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分，＞60%為3分，31%～60%為2分，10%～30%為1分。上述二種評(píng)分相加0～1分為（-），2分為（+），3～4分為（++），5～6分為（+++）。鏡下順序放大200倍，每張切片隨機(jī)選取10個(gè)視野，（++）例數(shù)+（+++）例數(shù)/組內(nèi)例數(shù)× 100.0%=陽(yáng)性率，都由病理科醫(yī)院進(jìn)行判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.00統(tǒng)計(jì)軟件包整理錄入資料，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用率、百分比等表示，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對(duì)比方法為χ2檢驗(yàn)與t檢驗(yàn)等，應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析進(jìn)行相關(guān)性分析，檢驗(yàn)顯著性水平α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達(dá)陽(yáng)性率情況 癌組織中IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達(dá)陽(yáng)性率分別為90.8%、74.2%和30.0%，癌旁組織分別為28.3%、36.7%和93.3%，對(duì)比都有顯著差異（P＜0.05）。見(jiàn)表1與圖1、2、3。負(fù)相關(guān)（P＜ 0.05），IGF?2也與IGFBP?3呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表1 不同組織的IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達(dá)陽(yáng)性率情況Tab.1 The positive expression rates of IGF?1，IGF?2 and IGFBP?3 in different tissues 例（%）

圖1 IGF?1表達(dá)的免疫組化情況Fig.1 IGF?1 immunohistochemical expression

圖2 IGF?2表達(dá)的免疫組化情況Fig.2 IGF?2 immunohistochemical expression

圖3 IGFBP?3表達(dá)的免疫組化情況Fig.3 IGFBP?3 immunohistochemical expression

2.2 IGF?1、IGF?2、IGFBP?3 表達(dá)與臨床病理特征參數(shù)的相關(guān)性 在子宮內(nèi)膜癌組織中，IGF?1、IGF?2蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率隨著分化程度的降低、臨床分期的增加、肌層浸潤(rùn)深度的加深、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而增高（P＜0.05），IGFBP?3剛好相反（P＜0.05）；IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達(dá)陽(yáng)性率與患者年齡、大體類型、組織類型無(wú)關(guān)（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 IGF?1、IGF?2、IGFBP?3的相關(guān)性分析 在子宮內(nèi)膜癌組織中，Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示IGF?1與IGF?2呈正相關(guān)（P＜ 0.05），與IGFBP?3呈

表2 IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達(dá)與臨床病理特征參數(shù)的相關(guān)性Tab.2 Correlation between expression of IGF?1，IGF?2 and IGFBP?3 and clinicopathological parameters 例（%）

3 討論

IGFs家族能刺激細(xì)胞有絲分裂，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)分化及抑制細(xì)胞凋亡；也可促進(jìn)加強(qiáng)機(jī)體組織攝糖、糖異生、糖酵解等糖的的代謝，促使蛋白質(zhì)、脂肪的合成增加，還能使得糖元合成增加，分解減少［8-9］。IGF?1是生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素的一種，子量為7.5 kD，分子中含有3個(gè)二硫鍵，由70個(gè)氨基酸的單鏈多肽組成，多存在于血液中。IGF?2基因?qū)儆≯E基因，其是一種強(qiáng)有力的促有絲分裂劑，可以直接作用于細(xì)胞而導(dǎo)致分裂和增殖，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡［10］。IGFBP?3占IGFBPs的絕大多數(shù)，可通過(guò)自分泌、旁分泌的方式對(duì)進(jìn)入組織，IGFBP?3可與IGF?1形成復(fù)合物，延長(zhǎng)IGF?1的半衰期，從而影響IGF?1的生物學(xué)效應(yīng)［11］。本研究顯示子宮內(nèi)膜癌組織中IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達(dá)陽(yáng)性率分別為90.8%、74.2%和30.0%，癌旁組織分別為28.3%、36.7%和93.3%，對(duì)比都有顯著差異。有學(xué)者檢測(cè)了子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜不典型增生及正常對(duì)照人群血清中IGF?1濃度，顯示患者中血清IGF?1濃度顯著高于正常對(duì)照人群［12］。IGF?1、IGF?2過(guò)度表達(dá)，能夠激活增生子宮內(nèi)膜的蛋白激酶B途徑，提示IGF?1、IGF?2的高表達(dá)會(huì)增加子宮內(nèi)膜病變的可能性［13］。本研究顯示在子宮內(nèi)膜癌組織中，IGF?1、IGF?2蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率隨著分化程度的降低、臨床分期的增加、肌層浸潤(rùn)深度的加深、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而顯著增高，IGFBP?3剛好相反。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)子IGF?1、IGF?2也在多種腫瘤組織中均呈高表達(dá)，且與腫瘤的分化程度、預(yù)后有關(guān)［14］。

表3 子宮內(nèi)膜癌組織IGF?1、IGF?2、IGFBP?3表達(dá)的相關(guān)性分析Tab.3 Correlation analysis of expression of IGF?1，IGF?2 and IGFBP?3 in endometrial carcinoma

IGFBPs可與絕大多數(shù)的IGF結(jié)合，IGFBPs可作為IGFs的載體，形成一個(gè)IGFs循環(huán)池與IGFs緩慢釋放組織，從而對(duì)IGFs的濃度起著重要的調(diào)節(jié)作用［13］。本研究顯示在子宮內(nèi)膜癌組織中，Spearman等級(jí)相關(guān)分析分析顯示IGF?1與IGF?2呈顯著正相關(guān)性，與IGFBP?3呈顯著負(fù)相關(guān)，IGF?2也與IGFBP?3呈顯著負(fù)相關(guān)。有研究通過(guò)轉(zhuǎn)染不能結(jié)合IGFs的IGFBP?3突變體到乳腺癌細(xì)胞后，其依然能抑制細(xì)胞中DNA的合成，并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡［8］。不過(guò)對(duì)于IGF?1、IGF?2及IGFBP?3與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究還很有限，具體的機(jī)制還有待進(jìn)一步分析。

綜上所述，IGF?1、IGF?2、IGFBP?3與子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征參數(shù)密切相關(guān)，IGFBP?3可與IGF?1、IGF?2 形成復(fù)合物，進(jìn)而阻止激活 IGF?1、IGF?2受體以及由此誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，從而抑制子宮內(nèi)膜癌的形成。