生姜提取物對(duì)苯并芘染毒小鼠Ⅱ相酶的誘導(dǎo)作用及對(duì)Nrf2-Keap1通路的影響

高增明，馬冉冉，劉步云，王永麗*，王 斌，李大鵬，李 鋒*

（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東省高校食品加工技術(shù)與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 泰安 271018）

生姜是姜科姜屬草本宿根植物，在中國(guó)及東南亞地區(qū)被廣泛用作傳統(tǒng)的調(diào)味料和藥材。生姜提取物及其成分具有多種生物活性及藥理學(xué)作用，如抑菌消炎、抗氧化、止嘔、抗運(yùn)動(dòng)病等[1,2]。最新研究表明，生姜提取物能夠有效緩解黃曲霉毒素B1導(dǎo)致的氧化損傷及肝臟毒性[3]，以及毒死蜱導(dǎo)致的大鼠腦、子宮氧化損傷[4]，作用機(jī)理或與姜酚類成分激活核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2，Nrf2）-Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1（Kelch like ECH associated protein 1，Keap1）信號(hào)通路有關(guān)[5]。因此，研究生姜功能成分的生物及藥理學(xué)活性，對(duì)于理解生姜的營(yíng)養(yǎng)健康作用及開發(fā)新型的生姜源功能食品或藥品具有重要意義。

苯并芘（benzo[α]pyrene，BαP）是一種強(qiáng)致癌多環(huán)芳烴類化合物。BαP本身毒性較低，但經(jīng)細(xì)胞色素P450酶系催化后，會(huì)形成強(qiáng)致癌代謝物——BαP-7,8-二羥基-9,10-環(huán)氧化物（BαP-7,8-dihydroxy-9,10-epoxide，BPDE），同時(shí)產(chǎn)生大量活性氧自由基，對(duì)DNA和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)造成損傷[6-7]。在BαP代謝過程中，抗氧化酶和Ⅱ相酶構(gòu)成了機(jī)體質(zhì)量要的防御體系，它們能夠抑制BPDE的形成[8-9]。前期以生物活性為導(dǎo)向，采用鼠肝癌Hepa1c1c7模型發(fā)現(xiàn)生姜中某些成分是很強(qiáng)的Ⅱ相酶誘導(dǎo)子[10]，而且該活性受生姜品種的影響[11]。進(jìn)一步通過細(xì)胞活性分析對(duì)31 種全國(guó)各地生姜的Ⅱ相酶誘導(dǎo)潛力進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)廈門同安土姜誘導(dǎo)能力最強(qiáng)[11]。因此，本研究擬進(jìn)一步采用BαP染毒小鼠模型，研究上述提取物對(duì)抗氧化酶、Ⅱ相酶活力以及Nrf2-Keap1信號(hào)通路的影響，以期從體內(nèi)角度揭示生姜對(duì)外源性致癌物的解毒作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

廈門同安土姜（Zingiber oきcinale Roscoe）由山東省萊蕪市農(nóng)科院提供。4 周齡SPF級(jí)昆明雄性小鼠由山東泰邦生物研究所提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（魯）2013-0006。

BαP（純度＞96%） 美國(guó)Sigma公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒、過氧化氫酶（catalase，CAT）試劑盒、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶（glutathione-S-transferase，GST）試劑盒南京建成生物工程研究所；血氧合酶1（hemooxygenase 1，HO-1）試劑盒、醌氧化還原酶（quinone reductase，QR）試劑盒 上海邦奕生物科技有限公司；二喹啉甲酸（bicinchonininc acid，BCA）蛋白測(cè)定試劑盒 上海碧云天生物技術(shù)中心；Nrf2、Keap1單克隆抗體 美國(guó)CST公司；SYBR premix EX Taq Kit 日本Takara公司。

1.2 儀器與設(shè)備

TDL-50B 低速臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；Avanti J-30I高速離心機(jī) 美國(guó)Beckman Coulter公司；UV-5500紫外-可見分光光度計(jì) 上海元析儀器有限公司；SpectraMax M2 多功能酶標(biāo)儀 美國(guó)MD公司；LC-LTQ Orbitrap XL MS/MS液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀美國(guó)Thermo Fisher公司；1260高效液相色譜系統(tǒng)（配有二極管陣列檢測(cè)器） 美國(guó)Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 生姜提取物的制備

樣品洗凈、晾干，切成絲狀，按料液比1∶10（m/V）用無水乙醇索氏提取4 h。重復(fù)提取3 次，過濾并合并濾液。真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮成膏狀，然后取50 g溶于500 mL水中，加入等體積的乙酸乙酯充分振蕩分層，取乙酸乙酯層，重復(fù)5～6 次。然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機(jī)試劑，得到生姜提取物，經(jīng)計(jì)算得率為3.51%。

1.3.2 動(dòng)物飼養(yǎng)與處理

35 只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，每組7 只動(dòng)物：對(duì)照組（CK）、BαP處理組（BαP）、低劑量生姜組（100 mg/（kg·d），BαP+LG）、中劑量生姜組（200 mg/（kg·d），BαP+MG）及高劑量生姜組（400 mg/（kg·d），BαP+HG）。生姜提取物劑量按體質(zhì)量計(jì)，溶于玉米油后灌胃，對(duì)照組和BαP組給予同等體積的玉米油，連續(xù)飼養(yǎng)14 d。最后一次灌胃后禁食2 h，除對(duì)照組外，其余組分別腹腔注射50 mg/kg BαP。禁食24 h后，各組小鼠稱質(zhì)量，眼眶取血。采用斷頸法處死小鼠，解剖摘取肝臟和腎臟，濾紙吸干，稱質(zhì)量，計(jì)算臟體比。

1.3.3 血清及組織勻漿的制備

血液在4 ℃、3 000×g離心3 min，收集上清液，即為血清。取一定質(zhì)量的器官組織，按照1∶9（m/V）的比例加入生理鹽水，在冰上手動(dòng)勻漿，勻漿液在4 ℃、3 000×g離心10 min，取上清液，即10%的組織勻漿。組織勻漿在4 ℃、14 000×g離心30 min，取上清液即為細(xì)胞漿。

1.3.4 抗氧化酶和Ⅱ相酶活力的測(cè)定

血清及組織勻漿中抗氧化酶CAT、GPx、SOD及GST活力，按照南京建成試劑盒說明測(cè)定；Ⅱ相酶QR、HO-1活力按照試劑盒說明測(cè)定。

1.3.5 Nrf2及Keap1蛋白表達(dá)測(cè)定

采用BCA法測(cè)定樣品蛋白濃度。取40 μg蛋白樣品進(jìn)行10%的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDSPAGE）。將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上。室溫封閉1 h后，加入相應(yīng)一抗，4 ℃孵育過夜。用TBST洗膜3 次，每次15 min，然后加入二抗（1∶2 000稀釋）孵育2 h后，再次用TBST洗膜3 次，每次15 min。最后，采用電子化學(xué)發(fā)光顯影，暗室曝光。

1.3.6 Ⅱ相酶及Nrf2、Keap1基因表達(dá)測(cè)定

取出凍存組織，加入TRIzol充分勻漿，終質(zhì)量濃度100 mg/mL，室溫放置5 min，然后于4 ℃、14 000×g離心5 min，取上清液，按照動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒說明書提取RNA樣品。參照?qǐng)?bào)道的方法合成Nrf2、Keap1及Ⅱ相酶的引物（表1）[12]。參照熒光定量試劑盒SYRB Green法說明書，進(jìn)行去除基因組DNA反應(yīng)、反轉(zhuǎn)錄以及實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative realtime polymerase chain reaction，qPCR）檢測(cè)。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性10 s，60 ℃退火15 s，40 個(gè)循環(huán)，反應(yīng)體積20 μL。以GADPH為內(nèi)參基因，計(jì)算基因表達(dá)的相對(duì)變化。

表 1 主要Ⅱ相酶及Nrf2、Keap1基因的引物序列Table 1 Primers used for qPCR analysis of phase II enzyme genes,Nrf2 and Keap1

1.3.7 液相色譜-質(zhì)譜分析條件

色譜條件：色譜柱H y p e r s i l G O L D C18柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），柱溫40 ℃，流動(dòng)相為水（含0.2%甲酸，A）和乙腈（B），梯度洗脫程序：0～5 min，3% B；5～30 min，3%～35% B；30～40 min，35%～95% B；40～47 min，95% B；47～47.2 min，95%～3% B；47.2～53 min，3% B；流速0.5 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，DAD檢測(cè)器（掃描波長(zhǎng)200～600 nm）。

質(zhì)譜條件：負(fù)離子電噴霧離子源，電壓4.1 kV，毛細(xì)管溫度300℃，鞘氣壓力35 kPa，輔助氣壓力10 kPa，質(zhì)量掃描范圍m/z 200～600。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 生姜提取物對(duì)BαP染毒小鼠體內(nèi)抗氧化酶活力的影響

在實(shí)驗(yàn)期間，全部35 只小鼠均存活良好，沒有動(dòng)物死亡現(xiàn)象出現(xiàn)，表明實(shí)驗(yàn)中使用的生姜提取物灌胃濃度及BαP注射劑量均無致死作用。

表 2 生姜提取物對(duì)BαP染毒小鼠體內(nèi)抗氧化酶活力的影響（n＝ 7）Table 2 Effect of ginger extract on antioxidant enzyme activities in mice exposed to BαP (n= 7)

由表2可知，與對(duì)照組相比，BαP處理對(duì)小鼠血清、肝和腎臟中CAT和GSH-Px活力無顯著影響（P＞0.05），但極顯著提升了肝臟中SOD活力（P＜0.01）。經(jīng)生姜提取物連續(xù)灌胃14 d后，不同劑量的生姜提取物表現(xiàn)出對(duì)抗氧化酶活力不同的影響。與BαP處理組相比，低劑量處理顯著提升了肝臟中CAT活力（P＜0.05）；中劑量處理極顯著提高了血清中GSH-Px活力（P＜0.01）、肝臟中CAT、SOD和GSH-Px活力以及腎臟中CAT和GSH-Px活力（P＜0.01）；高劑量灌胃則對(duì)血清、肝臟和腎臟中CAT活力影響最為顯著（P＜0.01），對(duì)其他抗氧化酶無影響（P＞0.05），與BαP處理組相比，CAT活力分別提高了76.0%、15.4%和70.3%。

2.2 生姜提取物對(duì)BαP染毒小鼠體內(nèi)Ⅱ相酶的影響

2.2.1 Ⅱ相酶活力變化

圖 1 生姜提取物對(duì)BαP致毒小鼠肝臟和腎臟中Ⅱ相酶活力的影響Fig. 1 Effect of ginger extract on phase II enzyme activities in liver and kidney of mice exposed to BαP

如圖1所示，與對(duì)照組相比，BαP處理均極顯著刺激了肝臟中3 種主要Ⅱ相代謝酶的活力（P＜0.01），以及腎臟中GST和HO-1的活力，對(duì)QR活力無顯著影響（P＞0.05），這可能與肝臟是體內(nèi)主要的解毒器官有關(guān)[13]。當(dāng)BαP進(jìn)入機(jī)體后，激活了Ⅱ相酶的表達(dá)機(jī)制，提高酶的活性以抵抗外界異生物質(zhì)。相比于BαP處理組，不同劑量的生姜提取物灌胃14 d能極顯著提高肝臟和腎臟中QR、GST和HO-1的活力（P＜0.01），并且對(duì)肝臟與腎臟中QR和HO-1的活力具有顯著的劑量誘導(dǎo)效應(yīng)。BαP+HG處理組肝臟中QR和HO-1的活力分別提高了29.05%和56.39%，腎臟中QR和HO-1的活力分別提高了26.93%和57.22%。中劑量處理對(duì)小鼠肝臟和腎臟中GST活力誘導(dǎo)效果最明顯。

2.2.2 Ⅱ相酶mRNA表達(dá)變化

圖 2 生姜對(duì)BαP致毒小鼠肝臟和腎臟中Ⅱ相酶mRNA表達(dá)的影響Fig. 2 Effect of ginger extract on mRNA expression of phase II enzymes in liver and kidney of mice exposed to BαP

為進(jìn)一步探討生姜提取物對(duì)BαP染毒小鼠Ⅱ相酶的誘導(dǎo)效應(yīng)，采用qPCR技術(shù)從基因表達(dá)方面分析了小鼠肝臟中NQO1、GST和HO-1 mRNA的變化情況（圖2）。與對(duì)照組相比，BαP處理極顯著提高了GST和HO-1 mRNA的相對(duì)含量（P＜0.01），分別增加了39%和33%。與BαP處理相比，不同劑量的生姜處理對(duì)小鼠肝臟中NQO1和HO-1 mRNA的表達(dá)具有極顯著的劑量誘導(dǎo)效應(yīng)（P＜0.01）；中劑量處理對(duì)肝臟中GST mRNA的表達(dá)具有極顯著誘導(dǎo)作用（P＜0.01），與BαP處理組相比，提高了58.2%。結(jié)果與Mohamed等[14]研究一致。他們發(fā)現(xiàn)生姜提取物和乙酸鉛共同處理能顯著提高GST-α1（1.4 倍）、GPx1（1.8 倍）和CAT（8 倍）mRNA的表達(dá)。

2.3 生姜提取物對(duì)BαP染毒小鼠肝臟Nrf2-Keap1信號(hào)通路的影響

圖 3 生姜提取物對(duì)BαP致毒小鼠肝臟中Nrf2-Keap1蛋白表達(dá)的影響Fig. 3 Effect of ginger extract on protein expression of Nrf2-Keap1 in liver of mice exposed to BαP

如圖3所示，與對(duì)照組相比，BαP處理組Nrf2的蛋白表達(dá)水平增加了14.1%（P＜0.01），Keap1蛋白的表達(dá)降低了48.6%（P＜0.01）。經(jīng)不同劑量的生姜提取物喂養(yǎng)后，肝臟中Nrf2蛋白表達(dá)水平極顯著升高（P＜0.01），與BαP處理組相比，低、中、高劑量組分別增加了6.14%、21.9%和9.6%；同時(shí)，Keap1蛋白表達(dá)水平極顯著下降（P＜0.01），分別降低了8.2%、34.7%和13.1%。

圖 4 生姜提取物對(duì)BαP致毒小鼠肝臟中Nrf2-Keapl mRNA表達(dá)的影響Fig. 4 Effect of ginger extract on mRNA expression of Nrf2-Keap1 in liver of mice exposed to BαP

由圖4可知，與對(duì)照組相比，BαP處理能極顯著提高Nrf2 mRNA的表達(dá)（提高15.8%），降低Keap1 mRNA的表達(dá)（降低12.3%）（P＜0.01）。而經(jīng)不同劑量的生姜提取物連續(xù)灌胃14 d后，與BαP處理組相比，低、中和高劑量組Nrf2 mRNA表達(dá)水平分別提高了38.3%、199.1%和121.7%（P＜0.01），Keap1 mRNA的表達(dá)水平分別降低了12.5%、33.5%和28.5%。Nrf2與Keap1的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)于Keap1-Nrf2信號(hào)通路至關(guān)重要。

2.4 生姜提取物的成分鑒定

為進(jìn)一步明確生姜提取物對(duì)BαP染毒小鼠抗氧化酶及Ⅱ相酶誘導(dǎo)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，采用LC-LTQ Orbitrap XL MS/MS對(duì)生姜提取物的主要成分進(jìn)行了鑒定。

圖 5 生姜提取物總離子流圖Fig. 5 Total ion current chromatogram of ginger extract

生姜提取物成分鑒定總離子流圖見圖5。根據(jù)總離子流圖出峰時(shí)間、MS/MS數(shù)據(jù)以及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，共鑒定出19 種主要的生姜成分（表3）。由于缺乏相應(yīng)的商業(yè)化標(biāo)品，當(dāng)前并沒有對(duì)這些成分進(jìn)行定量分析。在鑒定的這些成分中，大多屬于姜酚類物質(zhì)。

表 3 生姜提取物L(fēng)C-LTQ Orbitrap XL MS/MS鑒定結(jié)果Table 3 Identi fication of chemical compounds in ginger extract by LC-LTQ Orbitrap XL MS/MS

3 討 論

BαP作為一種強(qiáng)致癌性多環(huán)芳烴類化合物，廣泛存在于環(huán)境中，如汽車尾氣、石化工業(yè)廢氣、吸煙煙氣、煙熏及燒烤肉制品等[13]。研究表明，BαP的高致癌性主要源于其在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化過程中生成的高活性中間代謝產(chǎn)物BPDE[6]；同時(shí)，該過程也會(huì)刺激大量ROS的產(chǎn)生，造成對(duì)蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子的氧化損傷[7]。因此，在BαP的體內(nèi)代謝解毒過程中，Ⅱ相酶和抗氧化酶發(fā)揮了重要的角色[8-9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)生姜提取物連續(xù)灌胃14 d后，不同劑量的生姜提取物對(duì)BαP染毒小鼠的抗氧化酶活力影響不同。與BαP損傷組相比，中劑量灌胃組和中劑量灌胃組顯著誘導(dǎo)小鼠血清中CAT和GSH-Px活力及肝腎中CAT、SOD和GSH-Px的活力（P＜0.05）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果一致。姜衛(wèi)星[15]研究了生姜醇提取物對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響，發(fā)現(xiàn)生姜提取物能顯著提高CAT和SOD的活力。Kota等[16]研究發(fā)現(xiàn)用5%生姜粉喂養(yǎng)30 d可顯著影響大鼠肝臟中CAT、SOD和GPX的活力，與對(duì)照組相比，酶活力分別提高了94%、141%和30%。El-Sharaky等[17]也發(fā)現(xiàn)用100 mg/（kg·d）的生姜提取物能顯著緩解溴苯導(dǎo)致的大鼠肝臟中GPx和SOD活力的降低。這些結(jié)果表明，生姜提取物在一定程度上能提高BαP染毒小鼠機(jī)體內(nèi)抗氧化酶活力。

BαP等外源性有毒物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體會(huì)經(jīng)過Ⅰ相代謝和Ⅱ相代謝。在細(xì)胞色素P450酶催化的Ⅰ相代謝反應(yīng)中，BαP會(huì)由無活性的前致癌物活化為強(qiáng)致癌代謝物-BPDE，這些物質(zhì)進(jìn)一步在QR、GST和HO-1等Ⅱ相代謝酶的催化下解毒并排出體外[6-7]。因此，誘導(dǎo)Ⅱ相代謝酶的表達(dá)，可以有效保護(hù)機(jī)體免受外源毒性物質(zhì)和活性氧的損傷，這也被認(rèn)為是許多植物化學(xué)成分發(fā)揮化學(xué)預(yù)防作用的重要機(jī)制[18]。相比于BαP處理組，連續(xù)灌胃14 d后，不同劑量的生姜提取物灌胃14 d能極顯著提高肝臟和腎臟中QR、GST和HO-1的活力（P＜0.01），并且對(duì)肝臟與腎臟中QR和HO-1的活力具有顯著的劑量誘導(dǎo)效應(yīng)。類似的結(jié)果在前人研究中也有報(bào)道。Nirmala等[19]研究表明，1%和5%的生姜化合物能顯著提高BαP誘導(dǎo)的肝臟和腎臟中QR和GST活力。Li Feng等[20]也發(fā)現(xiàn)生姜中6-脫氫姜烯酚和1-脫氫-6-姜二酮等成分具有顯著誘導(dǎo)小鼠肝癌Hepa1c1c7細(xì)胞中NAD(P)H：醌氧化還原酶的潛力。并且，RT-PCR檢測(cè)結(jié)果也表明生姜提取物對(duì)小鼠肝臟中NQO1、GST和HO-1 mRNA的影響結(jié)果與Ⅱ相酶活力變化結(jié)果基本一致，進(jìn)一步證實(shí)了生姜提取物可以從酶活和轉(zhuǎn)錄兩方面對(duì)BαP染毒小鼠肝臟和腎臟中的Ⅱ相酶發(fā)揮誘導(dǎo)作用。

在機(jī)體應(yīng)對(duì)外界氧化和化學(xué)物質(zhì)等導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)中，Nrf2-Keap1/抗氧化反應(yīng)元件（antioxidant response element，ARE）信號(hào)通路被認(rèn)為是機(jī)體內(nèi)最重要的內(nèi)源性抗氧化信號(hào)通路[21]。在生理狀態(tài)下，Nrf2的Neh2結(jié)構(gòu)域和Keap1蛋白的BTB結(jié)構(gòu)域和C-端的Kelch重復(fù)單元結(jié)合，并且錨定于細(xì)胞漿中的肌動(dòng)蛋白上；當(dāng)受氧化刺激時(shí)，Nrf2-Keap1復(fù)合物解離，Nrf2由細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并且與ARE以及Maf蛋白結(jié)合，從而啟動(dòng)ARE-編碼的Ⅱ相酶基因以及某些抗氧化酶基因的轉(zhuǎn)錄[22-23]。為探討生姜提取物對(duì)抗氧化酶和Ⅱ相酶的誘導(dǎo)機(jī)制，進(jìn)一步分析了Nrf2和Keap1蛋白及mRNA表達(dá)變化。結(jié)果表明，生姜提取物對(duì)Ⅱ相酶的誘導(dǎo)作用與其對(duì)Nrf2-Keap1/ARE信號(hào)通路的激活有關(guān)。不同劑量的生姜提取物可從蛋白表達(dá)和mRNA相對(duì)含量水平兩方面上調(diào)肝臟內(nèi)Nrf2和抑制Keap1表達(dá)。Bak等[24]也證實(shí)，富含6-姜烯酚的生姜提取物能夠顯著誘導(dǎo)細(xì)胞和小鼠肝臟Nrf2蛋白的表達(dá)，同時(shí)能夠提高HO-1、CAT等抗氧化酶的活力。進(jìn)一步分析了處理前后Nrf2/Keap1相對(duì)比例變化，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組和BαP組相比，生姜提取物處理極顯著提高了Nrf2/Keap1相對(duì)含量（P＜0.01），表明它們確實(shí)從轉(zhuǎn)錄層面激活了Nrf2-Keap1/ARE信號(hào)通路。

最后，采用LC-LTQ Orbitrap XL MS/MS對(duì)生姜提取物的主要成分進(jìn)行了鑒定。鑒定出的19 種成分大多屬于姜酚類物質(zhì)。研究表明，很多姜酚類成分具有化學(xué)預(yù)防作用及抗氧化應(yīng)激作用。如姜黃素被證實(shí)具有抗氧化、抗腫瘤及抗突變等作用[25-27]，其對(duì)多種腫瘤的化學(xué)預(yù)防作用與其較強(qiáng)的Ⅱ相酶誘導(dǎo)能力密切相關(guān)[28]，構(gòu)效關(guān)系分析表明其活性主要與β-二酮官能團(tuán)有關(guān)。姜黃素對(duì)BαP誘導(dǎo)的人肺上皮細(xì)胞BEAS-2B的損傷也具有保護(hù)作用[29]。6-脫氫姜烯酚[30]、6-姜烯酚和1-脫氫-6-姜二酮[20]在人肝癌HepG2細(xì)胞和小鼠肝癌Hepa1c1c7等多種細(xì)胞評(píng)價(jià)體系中，均表現(xiàn)出較強(qiáng)的Ⅱ相酶誘導(dǎo)潛力。

4 結(jié) 論

本研究探討了生姜提取物對(duì)BαP染毒小鼠主要抗氧化酶及Ⅱ相酶的影響，并基于Nrf2-Keap1/ARE信號(hào)通路分析了可能的調(diào)控機(jī)制。結(jié)果表明，生姜提取物處理能顯著誘導(dǎo)BαP致毒小鼠血清中CAT和GSH-Px活力及肝腎中CAT、SOD和GSH-Px的活力。同時(shí)，顯著提升動(dòng)物肝臟中QR、HO-1和GST等Ⅱ相酶的活力。生姜提取物可從蛋白表達(dá)和基因轉(zhuǎn)錄兩方面提高Nrf2的表達(dá)以及抑制Keap1表達(dá)。最后，采用高效液相色譜-軌道離子阱質(zhì)譜聯(lián)用方法從提取物中鑒定得到19 種成分。以上研究結(jié)果表明，生姜提取物能夠通過誘導(dǎo)體內(nèi)抗氧化酶和Ⅱ相酶的表達(dá)，緩解BαP對(duì)機(jī)體的氧化損傷，這為進(jìn)一步以生姜為原料開發(fā)相關(guān)的功能食品或藥品提供了參考。