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    一例Bx01O01亞型伴抗B抗體患者的血型鑒定報告

    2018-10-26 03:20:30趙媛劉偉趙一賀宋廣平李代紅天津市第一中心醫(yī)院輸血科天津300192
    實用器官移植電子雜志 2018年4期
    關鍵詞:微柱分子生物學血型

    趙媛,劉偉,趙一賀,宋廣平,李代紅(天津市第一中心醫(yī)院輸血科,天津 300192)

    ABO血型系統(tǒng)是人類最重要的血型系統(tǒng),除常見的ABO表型外,還有一類與正常ABO血型抗原結(jié)構(gòu)、性能或抗原位點數(shù)有一定差異的亞型存在。亞型也有遺傳基礎,也具有明確的血清學特點[1]。例如:Bx亞型紅細胞與單克隆抗-B呈弱凝集,甚至不凝集;與抗-AB弱凝集~2+凝集;H抗原表達近似于O型紅細胞;血清中常伴有不規(guī)則抗B抗體,當抗體較強時極易誤診為O型;ABO亞型的誤診對臨床輸血安全、器官移植、骨髓移植、法醫(yī)學鑒定、新生兒溶血病造成嚴重危害。1990年首次通過基因測序明確了人類ABO血型系統(tǒng)中A1、B、O三個主要等位基因的分子生物學基礎,分子生物學逐步應用到人類血型鑒定。目前,被dbRBC NCBI血型抗原基因突變數(shù)據(jù)庫收集的Bx等位基因有12個,其分子機制均為點突變[2]。本文總結(jié)1例血清學極易誤診的Bx亞型伴有較強抗B抗體標本,結(jié)合分子生物學基因分型測序分析報道如下。

    1 臨床資料

    1.1 對象:先證者,男,39歲,漢族,大面積燒傷急診入院進行ABO血型鑒定時,微柱凝膠法判定為O型,常溫試管法發(fā)現(xiàn)正反定型不符。

    1.2 血清學檢測

    1.2.1 經(jīng)典試管法:嚴格按照《中國輸血技術操作規(guī)程》[3]進行操作,結(jié)果見表1。

    1.2.2 微柱凝膠法:EDTA抗凝血5 ml,3 000 r/min,5分鐘充分離心排除血漿內(nèi)纖維蛋白原干擾。嚴格按照戴安娜血型設備使用說明書及操作規(guī)程,進行ABO正反定型、不規(guī)則抗體篩查、自身抗體檢測、直接抗體檢測。

    ABO血型結(jié)果與試管法室溫立即離心結(jié)果不一致,正定型抗-A:-,抗B:-;反定型Ac:4+,Bc:2+,全自動系統(tǒng)判定為O型,見圖1。不規(guī)則抗體篩查:Ⅰ-、Ⅱ-、Ⅲ-。自身抗體陰性,直接抗體陰性。

    表1 經(jīng)典試管法鑒定結(jié)果

    圖1 微柱凝膠法鑒定ABO正反定型結(jié)果

    1.2.3 吸收放散實驗:被檢紅細胞經(jīng)3次洗滌后留壓積紅細胞,加入抗-B血清4℃吸收1小時,中間每10分鐘震搖1次,離心取上清與標準抗-B血清對照,倍比稀釋加入B型標準紅細胞,證實B抗原存在。吸收后壓積紅細胞多次洗滌后56℃熱放散10分鐘,離心取放散液加入B型標準紅細胞,檢測到B抗原存在,結(jié)果見表2。

    1.3 分子生物學檢測

    1.3.1 SSP基因分型:嚴格按照DNA提取試劑盒操作說明書操作,DNA濃度 30~50 ng/μl,DNA純度A260/A280比率在1.6~2.0。患者ABO基因型為Bx01/O,結(jié)果見圖2。

    表2 吸收放散試驗結(jié)果

    圖2 ABO血型基因分型電泳圖

    1.3.2 B基因第6、7外顯子測序(圖3):對患者1 ~ 7外顯子基因測序結(jié)果為Bx01O1雜合子,根據(jù)NCBI提供的血型抗原基因突變數(shù)據(jù)庫,比對A101基因序列第6外顯子存在1個堿基突變:297 A>G;第7外顯子存在7個堿基突變:526 C>G;657 C>T;703 G>A;796 C>A;803 G>C; 871G>A;930 G>A。發(fā)生R 176 G、G 235 S、L 266 M、G 268 A、D 291 N氨基酸替換。

    圖3 第6、7外顯子部分基因測序

    2 討 論

    ABO血型系統(tǒng)免疫原性最強,也是人類最早發(fā)現(xiàn)和認定的紅細胞血型系統(tǒng),對輸血安全、器官移植、法醫(yī)學鑒定、新生兒溶血病等意義重大,錯誤判斷血型會造成嚴重后果,甚至危及患者生命。除了常規(guī)的A、B、O、AB表型外,還存在著具有同一血型抗原,但抗原位點、結(jié)構(gòu)、性能等存在差異的ABO亞型系統(tǒng)。ABO亞型的血清學特點是與抗-A、抗-B反應很弱,甚至無反應,血清中易產(chǎn)生針對減弱抗原的血型抗體,給ABO血型鑒定帶來困難,易發(fā)生誤診。血清學ABO正反定型是目前臨床上檢測ABO血型的常規(guī)方法,實驗耗時少、簡單易操作,全自動微柱凝膠法應用到血清學血型鑒定之后,避免了因?qū)嶒炇覘l件、操作者判斷凝集強度差異等帶來的誤差。有報道稱微柱凝膠法較經(jīng)典試管法靈敏,弱抗原抗體檢出率高[4-5]。但本實驗發(fā)現(xiàn)由于微柱凝膠法的分子篩只能通過游離單個紅細胞,能夠檢出部分肉眼不可見抗原抗體結(jié)合物造成假陽性結(jié)果,特別是反應格局與正常ABO血型一致時會發(fā)生誤判。與報道因離心應切力大于弱抗原抗體結(jié)合親和力造成假陰性結(jié)果不符,有待進一步分析研究[6]。常溫經(jīng)典試管法由于對弱抗原抗體檢出率低于微柱凝膠法,更易發(fā)生正反定型不符的非常規(guī)反應格局,更易于提示亞型存在的可能性;當發(fā)現(xiàn)異常反應格局或試管法與微柱凝膠法結(jié)果判斷不一致時,應考慮亞型的發(fā)現(xiàn),進一步完善血清學實驗,通過吸收放散、檢測血型物質(zhì)、抗體檢測等手段進行確認。目前《中華人民共和國藥典》未要求單克隆抗-B血清凝集B3、BX抗原紅細胞,ABO亞型漏檢發(fā)生率高,正定型加入抗-AB血清十分必要[7]。當發(fā)生本文標本正定型為O,反定型Ac、Bc一側(cè)已達4+且凝聚強度差接近2+時,將反定型標本放入IgM抗體最適反應條件的手段不可行。

    雖然大部分ABO亞型血清學反應格局已有總結(jié),但比較籠統(tǒng),同時由于大量單克隆血清代替多克隆血清在臨床上廣泛的使用,故以前由于單獨以血清學為基礎分類亞型的適當性值得探討[8]。ABO血型系統(tǒng)由A、B、O 3個等位基因控制,A和B基因產(chǎn)生糖基轉(zhuǎn)移酶(H轉(zhuǎn)移酶),在此基礎上A基因產(chǎn)生N-乙酰半乳糖轉(zhuǎn)移酶(A酶)、B基因產(chǎn)生半乳糖轉(zhuǎn)移酶(B酶),這兩種酶可使H寡糖鏈(H抗原)上加入特異性糖,而產(chǎn)生特異性A或B抗原,堿基突變造成氨基酸替換導致糖基轉(zhuǎn)移酶活性喪失出現(xiàn)亞型。至今已發(fā)現(xiàn)ABO等位基因達300多個,大多數(shù)ABO亞型分子基礎已明確,隨著血型抗原基因數(shù)據(jù)庫的不斷完善,運用分子生物學技術進行ABO亞型分類已經(jīng)逐步顯示出了特異性、準確性的優(yōu)勢,成為了ABO疑難血型鑒定中血清學診斷的有力驗證。但是分子生物學同時存在試驗要求條件高、耗時長的缺點,不適用于目前日常臨床緊急狀況下使用。本文病例深度大面積燒傷、貧血、休克、急性腎衰竭急診入院,血清學發(fā)現(xiàn)疑難后緊急搶救給予AB型血漿2 000 ml,O型洗滌紅細胞4單位,經(jīng)血清學吸收放散發(fā)現(xiàn)B抗原存在,后續(xù)治療改為B型血漿輸注。經(jīng)分子生物學鑒定患者血型為Bx01O01,由于患者存在不規(guī)則抗B抗體,仍采用配合型輸血O型洗滌紅細胞,患者無輸血反應且無效輸血現(xiàn)象經(jīng)治療轉(zhuǎn)歸良好。

    4 總 結(jié)

    完善的血清學檢測和分子生物學相結(jié)合能夠有效減少亞型漏檢,在滿足臨床緊急情況的前提下做到合理安全用血,是臨床輸血安全的最有效保障。Bx等位基因的個體血清中是否存在抗B報道不一[2,9]。本次發(fā)現(xiàn)的Bx01O01個例存在較強抗B抗體,或提示Bx血型表型存在較多異質(zhì)性,有待進一步研究證實。

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