galectin-1和VEGF在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系

鄧曉燕，林海燕，陳衛(wèi)國(guó)

1南方醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣州 510515

南方醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院2超聲醫(yī)學(xué)科，3婦科，廣州 510900

4南京醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院放射科，廣州 510515

作為女性最常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，宮頸癌在全世界范圍內(nèi)每年新增病例約有50萬(wàn)[1]。在中國(guó)宮頸癌也屬于最常見(jiàn)的婦科腫瘤，對(duì)中國(guó)婦女的健康造成了極大的威脅[2]。隨著醫(yī)療水平的發(fā)展，對(duì)宮頸癌的診斷也有了進(jìn)一步的提高，但因早期宮頸癌患者沒(méi)有明顯癥狀，發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)出現(xiàn)擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。因此確定宮頸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白對(duì)判斷預(yù)后和診斷治療具有極其重要的意義。研究表明，半乳糖凝集素-1（galactose agglutinin-1，galectin-1）作為一種單一糖類識(shí)別結(jié)構(gòu)域，能夠和β-半乳糖苷鍵特異性非共價(jià)結(jié)合，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖，還可以和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）結(jié)合促進(jìn)腫瘤血管的生成[3]。VEGF作為一種特異性血管生成調(diào)控因子，可以直接作用于內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管通透性增加，獲得更多的氧氣和養(yǎng)分，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，加速腫瘤向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[4]。因此本研究通過(guò)觀察galectin-1和VEGF在宮頸癌組織中的表達(dá)，并分析其與宮頸癌患者臨床特征的關(guān)系，從而為宮頸癌的診斷治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年12月至2017年10月在南方醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院婦科就診的宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者的石蠟標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為宮頸鱗狀細(xì)胞癌；②患者臨床資料齊全；③標(biāo)本采集前患者均未接受過(guò)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：資料缺失患者。共納入患者80例，年齡34～72歲，平均（47.8±7.9）歲，其中＜45歲48例，≥45歲32例；分化程度：高分化10例，中分化25例，低分化45例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51例；大體類型：內(nèi)生型35例，外生型45例；宮頸癌國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecologists and Obstetricians，F(xiàn)IGO）分期：I期21例，Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期28例。選擇同期30例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的宮頸活檢組織石蠟標(biāo)本（經(jīng)病理學(xué)證實(shí)），年齡32～71歲，平均（47.3±7.6）歲。另選擇30例宮頸病變行宮頸錐切術(shù)后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為慢性宮頸炎患者的正常宮頸上皮組織石蠟標(biāo)本，年齡35～70歲，平均（47.3±8.2）歲。3組患者的年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè)

取石蠟標(biāo)本切片，采用二甲苯和梯度酒精進(jìn)行脫蠟，然后在3%過(guò)氧化氫溶液中浸泡，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化酶，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution，PBS）洗片，微波修復(fù)抗原，分別滴加一抗鼠抗人galectin-1單克隆抗體及鼠抗人VEGF單克隆抗體，4℃冰箱過(guò)夜，PBS清洗，滴加生物素標(biāo)記二抗，室溫孵育15 min，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蒸餾水終止染色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，烤干，顯微鏡觀察染色結(jié)果。

1.3 結(jié)果評(píng)定

免疫組化染色結(jié)果表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，通過(guò)染色的強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分判定是否陽(yáng)性。染色強(qiáng)度：無(wú)特異性染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分；陽(yáng)性細(xì)胞比例：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例1%～25%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＞25%為2分。兩項(xiàng)評(píng)分相加≥2分即為免疫組化染色陽(yáng)性[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)-計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 galectin-1、VEGF表達(dá)情況的比較

galectin-1、VEGF在宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組織及正常宮頸上皮組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 galectin-1、VEGF在宮頸鱗癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變、正常宮頸上皮組織中的表達(dá)情況比較[n（%）]

2.2 宮頸鱗癌中g(shù)alectin-1、VEGF表達(dá)情況與臨床特征的關(guān)系

galectin-1的陽(yáng)性表達(dá)可能與FIGO分期有關(guān)（P＜0.05），而與年齡、大體類型、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P＞0.05）。VEGF的陽(yáng)性表達(dá)可能與分化程度、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與年齡、大體類型無(wú)關(guān)（P＞0.05）。（表2）

表2 宮頸鱗癌中g(shù)alectin-1、VEGF表達(dá)情況與臨床特征的關(guān)系（n=80）

2.3 宮頸鱗癌中VEGF與galectin-1陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，VEGF陽(yáng)性表達(dá)與galectin-1陽(yáng)性表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.949，P=0.004）。

3 討論

宮頸癌作為當(dāng)今社會(huì)威脅婦女健康的主要疾病之一，近些年來(lái)逐漸趨于年輕化，因?yàn)槠涓咿D(zhuǎn)移的特點(diǎn)，很多患者在確診時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。因此研究腫瘤轉(zhuǎn)移成為科研工作者不斷探尋的課題。

galectin-1蛋白結(jié)構(gòu)上含有1個(gè)或2個(gè)糖識(shí)別域，能夠參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，在炎性反應(yīng)以及腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等諸多生理過(guò)程中起著重要的作用。在前列腺癌、肝癌以及胃癌組織中g(shù)alectin-1蛋白均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)[6]。研究認(rèn)為galectin-1可以增強(qiáng)酪氨酸磷酸化[7]，也有研究稱其可以通過(guò)激活ERK/MAPK通路來(lái)完成細(xì)胞的分裂增殖[8]。本研究檢測(cè)galectin-1在宮頸鱗癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變、正常宮頸上皮組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示galectin-1在宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為90.0%，高于宮頸上皮內(nèi)瘤變及正常宮頸上皮組織，提示galectin-1在宮頸鱗癌中起著重要的作用。且有研究證明，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中通過(guò)siRNA方法干擾galectin-1表達(dá)，細(xì)胞的增殖受到抑制[9]。本研究結(jié)果顯示，galectin-1的表達(dá)與FIGO分期有關(guān)，而與年齡、大體類型、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，提示galectin-1的陽(yáng)性表達(dá)與宮頸鱗癌的惡性程度密切相關(guān)。Sundblad等[10]研究發(fā)現(xiàn)，galectin-1可以和骨骼肌上的整合蛋白發(fā)生結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生黏附，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。

惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移與血管生成密切相關(guān)，VEGF作為一種特異性極高的血管調(diào)控因子，主要通過(guò)增加血管通透性和促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，來(lái)促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。有學(xué)者采用免疫組化法檢測(cè)腎母細(xì)胞瘤中VEGF的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期有密切關(guān)系，并認(rèn)為VEGF是腫瘤新生血管的增強(qiáng)因子，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[11]。Zuo等[12]通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法干擾VEGF的表達(dá)，結(jié)果顯示，促進(jìn)血管形成通路MAPK信號(hào)通路中的相關(guān)蛋白表達(dá)降低，腫瘤的增殖能力明顯減弱。本研究結(jié)果顯示，VEGF在宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常宮頸上皮和宮頸上皮內(nèi)瘤變組織。VEGF的陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。國(guó)內(nèi)學(xué)者通過(guò)對(duì)體內(nèi)移植宮頸癌的小鼠進(jìn)行放化療，結(jié)果顯示VEGF的表達(dá)受到抑制，腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力也受到抑制，從而為宮頸癌靶向治療提供了新的靶點(diǎn)[13]。Lin等[14]通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證明galectin-1和腫瘤血管生成密切相關(guān)，且galectin-1可以與VEGF的一個(gè)協(xié)同受體神經(jīng)纖毛蛋白-1（neurpilin-1，NRP-1）相結(jié)合促進(jìn)血管的生成。本研究采用Spearman相關(guān)分析法，結(jié)果顯示VEGF陽(yáng)性表達(dá)與galectin-1陽(yáng)性表達(dá)呈顯著正相關(guān)。

綜上所述，galectin-1和VEGF在宮頸鱗癌中可能通過(guò)共同調(diào)節(jié)血管生成來(lái)促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，galectin-1和VEGF在宮頸鱗癌中的表達(dá)與腫瘤惡性程度、轉(zhuǎn)移有關(guān)，可為宮頸鱗癌治療提供新的靶點(diǎn)。