HPLC法同時(shí)測(cè)定藥品塑料包裝材料中五種抗氧劑的含量

靳貴英 王彩媚 莫湫萍 李寶生

1.廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東廣州 510180，2.廣東藥科大學(xué)，廣東廣州 510180

塑料因阻隔性好、強(qiáng)度高、透明、質(zhì)輕等優(yōu)點(diǎn)成為主要的包裝材料[1]。在生產(chǎn)中會(huì)加入抗氧劑和穩(wěn)定劑以阻緩其老化[2]。一些常用抗氧化劑的信息見(jiàn)表1。抗氧劑雖可阻緩材料老化，但過(guò)量加入會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。世界各國(guó)相繼頒布了針對(duì)直接接觸食品包裝材料的法律法規(guī)[3-9]。抗氧劑含量的研究一直是科學(xué)家們研究的焦點(diǎn)之一[10-13]。本文通過(guò)HPLC法對(duì)塑料藥品包裝材料中常用的BHA、BHT、Irganox1076、Irganox1010和 Irgafos168等 抗氧劑同時(shí)進(jìn)行分析，以期為藥品包裝材料標(biāo)準(zhǔn)的建立和質(zhì)量監(jiān)督管理提供技術(shù)支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫Agilent 1260 Infinity/G1311C型高效液相色譜儀，帶有自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)（美國(guó)安捷倫公司），色譜柱為phenomenex EVO C18柱子（250mm×4.6mm，5μm）；Branson 8800超聲波儀器；Millipore純水儀；Sartorius十萬(wàn)分之一電子天平。

1.2 試藥

BHA、BHT和Irgafos168均購(gòu)自Dr.Ehrenstorfer.GmbH公司，批號(hào)分別為109231、126182和21105，含量分別為98.8%、99.5%和98.0%；Irganox1076和Irganox1010均購(gòu)自AccuStandard公司，批號(hào)分別為5691-01和5692-01，含量均按100%計(jì)。

7批藥品包裝材料：其中3批為滴眼液，2批為口服液體制劑，2批為口服片劑的包裝材料，材質(zhì)包括：聚氯乙烯（PVC），聚丙烯（PP），聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯（PET），聚乙烯（PE）及高/低密度聚乙烯（LDPE/HDPE）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為phenomenex EVO C18柱子（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水為流動(dòng)相，按照表2進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm，柱溫60℃，進(jìn)樣量10μL。

表1 部分常用抗氧劑結(jié)構(gòu)一覽表

表2 梯度洗脫表

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液：分別稱取BHA、BHT、Irganox1076、Irganox1010和Irgafos168五種抗氧劑各10mg，精密稱定，置于50mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，制備濃度為200 μg/mL的混合對(duì)照品貯備溶液。取該混合對(duì)照貯備溶液適量，加乙腈適量分別制得濃度為 1、2、4、5、6、8、10 μg/mL 的系列對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取7批塑料包裝材料，粉碎呈約0.2cm×0.2cm大小，取1.0g，精密稱定，置于50mL錐形瓶中，精密加異丙醇10mL，密塞，稱重，超聲2h，放置過(guò)夜，用異丙醇補(bǔ)充減失的重量，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。

空白溶液：除不加樣品外，其余按照上述“供試品溶液”制備方法進(jìn)行操作，得空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取2.3項(xiàng)下溶液各10μL，注入液相色譜儀，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。在上述色譜條件下，空白溶液無(wú)干擾?？瞻准皩?duì)照品溶液色譜圖見(jiàn)圖1 ～ 2。對(duì)照品溶液中五種抗氧劑的理論塔板數(shù)均不低于35000，分離度均大于1.5。圖1中除各對(duì)照峰外，還存在多處雜質(zhì)峰，其中5.3min處為BHA的共存雜質(zhì)峰，9.0min和19.021.4min處為Irgafos168的共存雜質(zhì)峰。

圖1 空白溶液的高效液相色譜圖

圖2 10μg/mL混合對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系試驗(yàn) 取2.3項(xiàng)下濃度分別為1、2、4、5、6、8、10μg/mL 的系列對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10μL，記錄峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到各抗氧劑線性回歸方程如下：BHA：Y=97.1473x-4.2546，r=0.9998；BHT：Y=123.4671x-0.6027，r=0.9999；Irgafos 168：Y=119.9199x-168.6832，r=0.9966；Irganox 1010：Y=91.6412x-9.4185，r=0.9997；Irganox 1076：Y=36.9012x+48.6384，r=0.9999。結(jié)果表明，各抗氧劑濃度在1～10μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將10μg/mL混合對(duì)照品溶液放置1個(gè)月后，精密注入10μL，記錄液相色譜圖。結(jié)果對(duì)照品各峰強(qiáng)度明顯減弱，表明各抗氧劑組分穩(wěn)定性較差，試驗(yàn)溶液應(yīng)臨用新配。

2.3.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為10μg/mL的對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果BHA、BHT、Irgafos 168、Irganox 1010和Irganox 1076各抗氧劑峰面積的RSD分別為0.3%、0.08%、0.2%、0.2%、0.5%和0.6%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品（為滴眼液PVC包材），共6份，依法制備供試品溶液，精密注入10μL，記錄液相色譜圖。結(jié)果Irganox 1076峰面積的RSD為1.2%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知抗氧劑含量的同批樣品（口服液體PET包材）1.0g，分別置于50mL錐形瓶中，按高、中、低三個(gè)水平分別精密加入100μg/mL抗氧劑Irgafox 168標(biāo)準(zhǔn)溶液0.6、0.5、0.4mL，按2.3項(xiàng)下供試品溶液配制方法處理，得到加樣回收試液。按上述色譜條件分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.4 樣品含量測(cè)定

取藥品包裝材料7批，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定7批樣品中5種抗氧劑的含量，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果顯示僅口服液體PP包材含有Irganox 1010，含量為4.9μg/g，所有樣品均檢出Irganox1076，含量分別為8.0 μg/g（滴眼劑PVC包材，批號(hào)17061303）；5.2μg/g（滴眼劑PP包材，批號(hào)17010402）；5.0μg/g（滴眼劑LDPE包材，批號(hào)16102501）5.2 μg/g（口服片劑HDPE包材，批號(hào) 21605023）；1.6μg/g（口服液體PET包材，批號(hào) 170622）；4.0μg/g（口服液體 PP包材，批號(hào)170602）；2.1μg/g（口服膠囊PET外包材，批號(hào)17030701）。樣品典型圖譜見(jiàn)圖3。

3 討論

抗氧劑種類繁多，查閱中國(guó)期刊網(wǎng)，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有文獻(xiàn)多數(shù)以分析BHA和BHT，或者單獨(dú)分析Irga類物質(zhì)為主，而將它們同時(shí)分析還尚未見(jiàn)報(bào)道。本文選擇了上述5種較為常見(jiàn)的抗氧劑進(jìn)行同時(shí)分析研究，為多組分抗氧劑的分析提供了思路。

表3 塑料包材抗氧劑加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

圖3 代表樣品色譜圖（口服片劑HDPE包材，批號(hào)21605023）

試驗(yàn)比較了不同提取溶劑對(duì)抗氧劑的提取能力。參考國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)比較了異丙醇、環(huán)己烷、二氯甲烷-環(huán)己烷混合液等多種不同提取溶劑，在相同條件下對(duì)抗氧劑的提取情況[14-16]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)異丙醇的提取效果較好，可有效分離BHA、BHT、Irgafos 168、Irganox 1010和 Irganox 1076。

試驗(yàn)同時(shí)比較了不同比例的乙腈-水、甲醇-水等流動(dòng)相系統(tǒng)的變化對(duì)抗氧劑測(cè)定的影響，結(jié)果采用乙腈-水梯度洗脫程序，可有效去除干擾，改善各成分間的分離度。此外還考察了提取方式及提取時(shí)間的影響，因抗氧劑穩(wěn)定性較差，所以加熱回流等較為激烈的方式會(huì)對(duì)其產(chǎn)生影響，試驗(yàn)最終采用超聲2h加浸泡過(guò)夜的提取方式。另外需要注意的是，因抗氧劑的不穩(wěn)定性，所有測(cè)試溶液應(yīng)在配制完成后盡快測(cè)試。

對(duì)于抗氧劑的限度，各國(guó)法規(guī)針對(duì)具體對(duì)象規(guī)定不同。世界衛(wèi)生組織WHO公布了 BHA、BHT每日攝入量上限分別為500μg/kg和125μg/kg。FDA規(guī)定了植物油中抗氧劑總量，并且規(guī)定食品輔料量不得超過(guò)食品中脂肪或油或芳香（揮發(fā)）油的200μg/kg。美國(guó)農(nóng)業(yè)部要求任一抗氧劑含量不得超過(guò)100μg/kg，或在動(dòng)物性脂肪中抗氧劑聯(lián)用總量不得超過(guò)200μg/kg?！稓W洲藥典》中規(guī)定輸液管中抗氧劑總量≤0.3%。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樣品中各抗氧劑的含量均低于10μg/g。

本文方法學(xué)考察結(jié)果表明，試驗(yàn)所采用的方法操作簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性高，可同時(shí)測(cè)定上述5種抗氧劑，可作為塑料包裝材料中抗氧劑的定量檢測(cè)方法。由于塑料包裝材料中抗氧劑種類多樣，可作為其他類抗氧劑檢測(cè)的參考，為藥品包裝材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬定提供支持。