亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產(chǎn)患者絨毛蛻膜組織中MMP—9、TSP—1的表達(dá)及臨床意義分析

文麗　楊小燕　張桂麗　張漢英

[摘要]目的 探討亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產(chǎn)患者絨毛蛻膜組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、血小板反應(yīng)蛋白-1（TSP-1）的表達(dá)及臨床意義。方法 選擇2016年7月～2017年7月在我院婦產(chǎn)科門診就診的亞臨床甲狀腺功能減退稽留流產(chǎn)患者25例為研究組，選擇同期于我院就診的正常妊娠并自愿行人工流產(chǎn)的早孕患者25例為對照組?；仡櫺苑治鰞山M的臨床資料，比較兩組絨毛蛻膜組織中MMP-9陽性表達(dá)情況和TSP-1陽性區(qū)的積分光密度值（IOD）差異。結(jié)果 研究組絨毛蛻膜組織中MMP-9表達(dá)陽性率為64.00%，低于對照組（88.00%），TSP-1陽性區(qū)IOD值（165.48±8.69），高于對照組（123.71±6.23），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產(chǎn)患者絨毛蛻膜組織中MMP-9表達(dá)明顯下降，TSP-1表達(dá)明顯升高，上述兩指標(biāo)變化抑制新生血管形成，降低滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲力，影響胚胎種植，進(jìn)而導(dǎo)致稽留流產(chǎn)發(fā)生。

[關(guān)鍵詞]亞臨床甲狀腺功能減退癥；稽留流產(chǎn)；絨毛蛻膜；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；血小板反應(yīng)蛋白-1

[中圖分類號] R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）6（a）-0108-03

[Abstract]Objective To investigate the expression and clinical significance of matrix metalloproteinase-9（MMP-9） and thrombospondin-1 （TSP-1） in chorionic and decidual tissues in missed abortion patients with subclinical hypothyroidism.Methods 25 cases of missed abortion patients with subclinical hypothyroidism treated in Department of Obstetrics and Gynecology clinic of our hospital from July 2016 to July 2017 were selected in the study group，and other 25 cases of early pregnant patients for voluntary induced abortion at the same period in our hospital were enrolled in the control group.The clinical data of two groups were retrospectively analyzed，and the MMP-9 positive expression in chorionic and decidual tissues and the integral optical density （IOD） in TSP-1 positive region were compared between the two groups.Results The MMP-9 positive expression rate in the chorionic and decidual tissues in the study group was lower than that in the control group，while the IOD value in TSP-1 positive region was higher than that in the control group，the differences were statistically significant （P<0.05）.Conclusion In missed abortion patients with subclinical hypothyroidism，the expression of MMP-9 in chorionic and decidual tissues decreases significantly while the expression of TSP-1 increases significantly.The above two indexes can inhibit the neovascularization，reduce the invasiveness of trophoblasts and affect the embryo implantation，leading to the occurrence of missed abortion.

[Key words]Subclinical hypothyroidism；Missed abortion；Chorionic and decidual；MMP-9；TSP-1

稽留流產(chǎn)指妊娠20周內(nèi)子宮內(nèi)出現(xiàn)死胎或胎兒死亡后未能及時排出體外的現(xiàn)象，是一種特殊的流產(chǎn)類型[1]。造成稽留流產(chǎn)的常見原因包括宮內(nèi)感染、內(nèi)分泌紊亂、染色體異常、免疫抗體等因素。妊娠期亞臨床甲狀腺功能減退癥患者存在代謝異常，可增加不良妊娠結(jié)局的發(fā)生風(fēng)險，與流產(chǎn)有一定關(guān)聯(lián)[2]。相關(guān)文獻(xiàn)報道[3]，基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）低表達(dá)會影響胚胎正常著床和生長發(fā)育。而血小板反應(yīng)蛋白-1（TSP-1）高表達(dá)則影響胚胎種植，兩者在絨毛蛻膜組織中的表達(dá)與流產(chǎn)密切相關(guān)。本研究旨在探究亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產(chǎn)患者絨毛蛻膜組織中MMP-9、TSP-1的表達(dá)水平和臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年7月～2017年7月在我院婦產(chǎn)科門診就診的亞臨床甲狀腺功能減退稽留流產(chǎn)患者25例為研究組，選擇同期于我院就診的正常妊娠并自愿行人工流產(chǎn)的早孕患者25例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡24～35歲，月經(jīng)基本規(guī)律，妊娠天數(shù)49～70 d；均為單胎妊娠；經(jīng)宮腔鏡或子宮輸卵管造影證實宮腔形態(tài)正常，無宮腔粘連等器質(zhì)性疾病；自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并糖尿病、甲亢、腎上腺功能異常等全身疾病者；合并衣原體、支原體等宮腔感染者。研究組年齡（28.46±5.47）歲；孕齡（7.36±2.48）周。對照組年齡（27.86±5.82）歲；孕齡（7.13±2.27）周。兩組的年齡、孕周等資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05），具有可比性。

1.2方法

①標(biāo)本采集及處理：兩組均在行人工流產(chǎn)手術(shù)時收集絨毛蛻膜組織，用0.9%氯化鈉溶液沖洗后即刻放置于10%的甲醛溶液中，12～36 h后包埋于石蠟中，4 μm厚度切片，常規(guī)HE染色。②免疫組化法：將組織切片置于60℃恒溫箱中烤片20 min，用二甲苯將切片脫蠟；梯度乙醇脫水后用蒸餾水浸泡，行抗原修復(fù)；滴加3%過氧化氫室溫孵育20 min以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性；二抗使用免疫組化試劑盒，進(jìn)行DAB顯示，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明封片。③MMP-9陽性評判標(biāo)準(zhǔn)[4]：顯微鏡下拍照，每張切片于400倍鏡下隨機(jī)選擇5個視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞；以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，無著色或背景顏色一致則判定為陰性細(xì)胞；計算陽性細(xì)胞數(shù)目，換算成百分?jǐn)?shù)取平均值；根據(jù)百分比計分，0%為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分；根據(jù)細(xì)胞著色強(qiáng)度計算強(qiáng)度得分，無著色為0分，淺棕色為1分，棕褐色為2分，深棕褐色為3分；陽性得分和強(qiáng)度得分相乘得總分，0分為陰性（-），1～3分為弱陽性（+），4～8分為中度陽性（++），9～12分為強(qiáng)陽性（+++）。④TSP-1水平測定：計算機(jī)圖文系統(tǒng)隨機(jī)選擇切片的10個視野（400倍鏡下），分析陽性區(qū)積分光密度值（IOD）。

1.3觀察指標(biāo)[5]

比較兩組絨毛蛻膜組織中MMP-9陽性表達(dá)情況和TSP-1陽性區(qū)的IOD值。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 21.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組絨毛蛻膜組織中MMP-9表達(dá)陽性率的比較

研究組絨毛蛻膜組織中MMP-9表達(dá)陽性率為64.00%，低于對照組（88.00%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2兩組TSP-1在絨毛蛻膜組織中表達(dá)的比較

采用計算機(jī)圖文系統(tǒng)隨機(jī)選擇絨毛蛻膜組織切片的10個視野（400倍鏡下），發(fā)現(xiàn)研究組TSP-1陽性區(qū)IOD值為165.48±8.69，高于對照組的123.71±6.23，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=19.532，P<0.05）。

3討論

妊娠期亞臨床甲狀腺功能減退癥患者由于發(fā)生內(nèi)分泌、代謝紊亂可導(dǎo)致流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局發(fā)生。隨診斷技術(shù)的發(fā)展，流產(chǎn)的發(fā)現(xiàn)和報道逐漸增多，稽留流產(chǎn)作為一種特殊的流產(chǎn)類型，其發(fā)生率也呈上升趨勢。近年來，對于MMP-9、TSP-1與胚胎植入、胚胎發(fā)育的關(guān)聯(lián)逐漸引起了臨床重視，本研究也就此展開了探討。

相關(guān)文獻(xiàn)表明[6-7]，MMP-9作為一種可參與組織創(chuàng)傷修復(fù)、促進(jìn)新生血管形成的蛋白酶，在人體內(nèi)分布較為廣泛。其作為一種活性物質(zhì)，可與TIMPs這類抑制物結(jié)合，共同維持一個動態(tài)平衡，參與胎盤形成、植入、宮頸擴(kuò)張等一系列生殖過程[8]。胚胎植入過程與滋養(yǎng)層細(xì)胞對子宮內(nèi)膜的侵入作用息息相關(guān)，而MMP-9可降解內(nèi)膜組織中細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），促進(jìn)胚胎順利種植[9]。ECM組分中存在不同類型的糖蛋白、膠原蛋白等，MMP-9即通過對其的消化作用達(dá)到降解ECM，并加強(qiáng)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力[10]。本研究結(jié)果顯示，研究組絨毛蛻膜組織中MMP-9表達(dá)陽性率低于對照組，與蔣德菊等[11]的研究結(jié)果基本一致。該學(xué)者認(rèn)為，MMP-9及其抑制物均在胚胎滋養(yǎng)層及蛻膜組織合成，兩者的平衡和相互調(diào)控對基質(zhì)重建和侵入控制有關(guān)鍵作用。相關(guān)文獻(xiàn)報道稱，稽留流產(chǎn)患者的MMP-9在絨毛蛻膜組織中的低表達(dá)可降低滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲力，不利于胚胎著床[12-13]。

TSP-1作為粘附蛋白家族的成員之一，在抑制血管生成中有重要作用[14-15]。胚胎種植及妊娠維持過程中，血管生成素和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）通過促進(jìn)血管生成達(dá)到穩(wěn)定妊娠的作用[16]。而TSP-1可通過對VEGF合成的抑制作用破壞妊娠過程，影響胚胎種植[17]。在正常子宮內(nèi)膜組織中，TSP-1主要存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞的胞漿中，在妊娠第1～3 天持續(xù)表達(dá)，通過激活TGF-β1推動蛻膜化和胚胎種植；至妊娠第6天，TSP-1分泌減少，對血管生成的抑制作用也降低[18]。本研究中，研究組TSP-1陽性區(qū)IOD值高于對照組，提示稽留流產(chǎn)患者絨毛蛻膜組織中TSP-1表達(dá)明顯升高，通過抑制血管生成，破壞胚胎植入，進(jìn)而增加流產(chǎn)風(fēng)險。

綜上所述，亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產(chǎn)患者絨毛蛻膜組織中MMP-9表達(dá)明顯下降，TSP-1表達(dá)明顯升高，上述兩指標(biāo)變化抑制新生血管形成，降低滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲力，影響胚胎種植，進(jìn)而增加稽留流產(chǎn)發(fā)生的風(fēng)險。

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（收稿日期：2018-02-08 本文編輯：崔建中）