分散液液微萃取-氣質聯(lián)用法分析尿液中的曲馬多

劉凌云，徐仿敏

（江陰市公安局，江蘇 江陰 214431）

曲馬多（Tramadol）是一種非阿片類中樞性止痛藥，主要作用于血清張力素及μ-阿片類受體和去甲腎上腺素系統(tǒng)，可以用于減輕疼痛。近年來，由于曲馬多與甲基苯丙胺、海洛因等傳統(tǒng)毒品相比，具有獲得方便、便宜等優(yōu)勢，被一些不法分子用作傳統(tǒng)毒品的替代品來使用。目前，尿液中曲馬多的提取方法主要有液液萃取法[1]、固相萃取法[2]、固相微萃取膜[3]等，但這些方法存在操作繁瑣、不經濟環(huán)保等缺點。因此，建立一種簡便、快速的尿液中曲馬多檢驗方法，對打擊此類違法犯罪具有重要意義。

本文建立了分散液液微萃取-氣質聯(lián)用法對尿中曲馬多進行檢驗，對影響實驗的參數進行考察優(yōu)化。最終目的是為了建立一種簡便、快捷、高效的檢驗方法來分析尿液中的曲馬多。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Varian3800 Saturn2200 GC/MS；臺式離心機；移液器；分析天平。甲醇、乙醇、丙酮、乙腈（色譜純，Sigma 公司）；四氯化碳（光譜純）、氯苯（分析純）、四氯乙烯（色譜純）（百靈威公司）；氫氧化鈉、鹽酸、碳酸氫鈉、碳酸鈉（分析純）（上海化學試劑有限公司）。曲馬多（中國藥品生物制品檢定所）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：VF-5 ms（30 m × 0.25 mm DF＝0.25）；柱溫：80℃，保持1min，20℃/min升至 280℃，保持 9min；載氣：氦氣；流速：1.0 mL/min ；進樣口溫度：280 ℃ ；進樣量1 μL，不分流進樣。

1.2.2 質譜條件

離子阱溫度：150℃；歧管溫度：45℃；傳輸線溫度：220 ℃ ；離子源：EI源；溶劑延遲：3.3 min ；掃描范圍：50～450 amu ；EI電壓：70 ev。

1.2.3 標準溶液的配置

稱取0.01 g曲馬多至10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到1 mg/mL的曲馬多儲備液，置于冰箱中保存，所需不同濃度的工作液均從儲備液得到稀釋。空白尿為近期未服用任何藥物的健康志愿者提供。

1.2.4 分散液液微萃取過程

在離心試管中，加入5 mL尿樣，然后快速注入分散劑和萃取劑混合液，形成乳濁液，靜置片刻后以2325×g離心5 min，直接抽取底部的沉積相，進行GC-MS檢驗。

2 結果與討論

在分散液液微萃取過程中，有多種因素影響著萃取結果。為了得到最優(yōu)的萃取效果，對以下實驗條件進行考察：分散劑和萃取劑的種類、用量、萃取時間、pH值等。尿液試樣中曲馬多的濃度為0.1μg/mL，萃取過程按照1.2.4的方法進行操作，使用GC-MS進行分析。

2.1 分散劑和萃取劑的選擇

在分散液液微萃取過程中，首先要求分散劑既能與樣品互溶，同時還能與萃取劑互溶，其次，萃取劑的要求是密度必須比水大，同時對目標物具有較好的溶解性。因此，本實驗分別選擇了乙醇、甲醇、乙腈、丙酮作為分散劑，選擇四氯化碳、氯苯、四氯乙烯作為萃取劑，根據曲馬多的回收率來選擇合適的分散劑和萃取劑。

圖1 不同分散劑和萃取劑對曲馬多萃取效果的影響

由圖1可以看出，分散劑和萃取劑分別選擇乙醇和四氯乙烯以及乙醇和氯苯的時候，曲馬多的峰面積均較高，表明在這兩個體系下曲馬多的回收率較高。但是，在乙醇和氯苯體系下，色譜圖中雜峰較多，背景干擾比較明顯，因此，本實驗分別選擇乙醇和四氯乙烯作為分散劑和萃取劑。

2.2 分散劑的用量

本實驗中選擇乙醇作為分散劑，乙醇的體積直接影響著“水-乙醇-四氯乙烯乳濁液”體系的形成，導致四氯乙烯在水中的分散程度發(fā)生改變，從而影響萃取效率。本實驗考察了乙醇體積（0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mL）對萃取效率的影響，實驗結果見圖 2。

圖2 分散劑體積對萃取效果的影響

由圖2可以得出，隨著乙醇體積的增加，曲馬多的峰面積也相應增加，在0.5 mL時達到最大值，緊接著又隨著乙醇體積的增加而開始減小。出現(xiàn)這一現(xiàn)象的主要原因是使用少量乙醇的情況下，四氯乙烯不能較好分散在水相中，從而導致回收率較低，曲馬多的峰面積較?。浑S著乙醇體積的增大，四氯乙烯逐漸均勻的散在水相中，曲馬多的回收率逐漸增大，相應的峰面積也隨之變大，但是當乙醇體積繼續(xù)增大時，會使得曲馬多在水相中的分配比變大，又導致曲馬多的回收率出現(xiàn)下降，因此，選擇乙醇體積為 0.5 mL。

2.3 萃取劑的用量

四氯乙烯的用量不但會影響萃取效率，還會影響沉積相的體積。本實驗中考察了四氯乙烯體積（10、15、20、25、30、40μL）對沉積相以及回收率的影響。

圖3 萃取劑體積對沉積相體積的影響

圖4 萃取劑體積對萃取效果的影響

由圖3和圖4可以看出，隨著四氯乙烯體積的增加，沉積相的體積也隨之增大，但是回收率卻在增大到一定量的時候出現(xiàn)基本無變化或者略有下降趨勢，因此，本實驗選取四氯乙烯的體積為30μL。

2.4 萃取時間考察

分散液液微萃取是一個能快速達到平衡的萃取過程，其優(yōu)點就是用時少、分散面積大、萃取效率高。萃取時間，即分散劑和萃取劑被快速注入樣品溶液中，整個溶液體系迅速形成乳濁液，萃取劑被分散在整個溶液中，能夠很快達到分配平衡所需的時間。 本實驗中將萃取時間分別設置為 0.5、1、2、4、10 min進行考察，來選擇最優(yōu)的萃取時間。

由圖5可以看出，隨著萃取時間的增加，萃取過程達到平衡，在2 min就能達到較好的萃取效果，并且隨著時間的延長也無太大變化。因此，本實驗選擇的萃取時間為不小于2 min。

圖5 萃取時間對萃取效果的影響

2.5 pH值考察

樣品的pH值不同直接影響萃取效果，通過調整樣品的pH值能得到最好的萃取效率，本文中分別調整樣品的pH值為8、9、10、11進行優(yōu)化選擇。

圖6 pH值對萃取效果的影響

由圖6，可以看出在4種pH值案件下峰面積基本沒有太大變化，其中pH＝8的時候峰面積略大，為了得到最優(yōu)的實驗結果，因此選擇pH為8。

2.6 方法評價

2.6.1 工作曲線

用空白尿液分別配置曲馬多濃度為10、20、40、100、200、400、1 000 μg/L的工作液，在最優(yōu)的實驗條件下，按照1.2.4的方法進行萃取操作后，直接進行GC-MS檢測。以曲馬多的峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制工作曲線，得出線性回歸方程：y＝39826x-4818.7，相關系數r2＝0.9930，線性范圍：10～1000μg/L。2.6.2 檢出限和定量限

在空白尿液中添加少量的曲馬多進行分析，計算色譜峰高相當于噪音強度3倍和10倍的曲馬多濃度，即為檢出限和定量限。本方法尿液中曲馬多的檢出限為 0.97 μg/L，定量限為 3.22 μg/L。

2.6.3 回收率、準確度和精密度的考察

配制曲馬多濃度為100 μg/L的空白添加尿液，按照“1.2.4”進行操作，并根據工作曲線計算曲馬多的濃度，所得結果與添加值之比為回收率，富集因子EF為沉積相的濃度與空白尿液初始濃度的比值，結果計算得出EF為185，回收率為80.45%±1.98%（n=7）。

2.7 案例應用

2015年11 月，抓獲涉嫌吸食曲馬多的吸毒人員，提取其尿液送來要求進行檢驗。按照優(yōu)化的實驗方法，由圖7～8可以看出，在嫌疑人的尿液中檢出曲馬多成分。

圖7 嫌疑人尿液的總離子流色譜圖

圖8 曲馬多的質譜圖

3 結論

本文所建立的分散液液微萃取方法-氣質聯(lián)用法操作簡單、快捷、高效，該方法實用性強，對尿液中曲馬多的提取回收率達到80%以上，為尿液中其他毒品檢測提供參考。