苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油復(fù)合添加劑對(duì) 大腸桿菌攻毒仔豬生長(zhǎng)性能、抗氧化能力和 空腸消化吸收功能的影響

蒲俊寧 陳代文 田 剛 何 軍 鄭 萍 毛湘冰 虞 潔 黃志清 羅鈞秋 羅玉衡 朱 玲 余 冰*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所，動(dòng)物抗病營(yíng)養(yǎng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，雅安625014；2. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，動(dòng)物生物技術(shù)中心，成都610043)

為了獲得更高的經(jīng)濟(jì)效益，仔豬早期斷奶已成為現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)常用的重要技術(shù)之一。然而，早期斷奶仔豬腸道發(fā)育不完善，易受飼糧、環(huán)境和心理等因素的影響，進(jìn)而易遭受病原微生物的侵害引起腸道結(jié)構(gòu)和功能的損傷，導(dǎo)致仔豬腹瀉和死亡[1]。產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(enterotoxigenicEscherichiacoli, ETEC)是導(dǎo)致仔豬腹瀉和死亡的主要病源性致病因子之一[2-3]。已有研究表明，ETEC感染會(huì)引起幼齡動(dòng)物抗氧化能力降低，尤其是腸道細(xì)胞抗氧化酶活性的降低，促進(jìn)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，從而破壞腸黏膜的完整性及功能，且這一過(guò)程可能是ETEC導(dǎo)致仔豬腹瀉的重要機(jī)制之一[4-5]。飼糧中添加飼用抗生素是預(yù)防斷奶仔豬腹瀉的一種常用技術(shù)手段，但是抗生素長(zhǎng)期大量使用會(huì)造成動(dòng)物機(jī)體免疫力下降、細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)以及抗生素殘留等諸多問(wèn)題，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康[6-7]。因此，尋找一種安全、高效的抗生素替代品或替代技術(shù)顯得十分重要。

前人研究發(fā)現(xiàn)，苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油均具有較強(qiáng)的抗氧化能力，并對(duì)多種應(yīng)激源誘導(dǎo)的氧化損傷具有顯著緩解作用，具有替代抗生素的可能性。Chang等[8]研究發(fā)現(xiàn)，苯甲酸含有羧基能夠清除機(jī)體內(nèi)自由基，中斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，緩解氧化損傷。Kodali等[9]研究表明，凝結(jié)芽孢桿菌可以清除機(jī)體產(chǎn)生的活性氧(ROS)，抑制產(chǎn)生ROS的微生物，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。牛至油是從植物牛至中提取的一種揮發(fā)油，主要有效成分是香芹酚和百里香酚[10]。百里香酚含有苯酚羥基基團(tuán)，可為脂肪氧化第一步產(chǎn)生的過(guò)氧化氫基團(tuán)提供氫供體，延緩氫過(guò)氧化物的形成[11]。此外，牛至油進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體后可激活抗氧化酶系統(tǒng)，提高抗氧化酶活性，增強(qiáng)機(jī)體清除氧自由基的能力，從而提高機(jī)體抗氧化能力[12]。但是，生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油單獨(dú)添加作用有限，且結(jié)果變異較大。近年來(lái)，有機(jī)酸、益生菌和精油在動(dòng)物飼糧中組合添加的“協(xié)同”和“加性”效應(yīng)已引起廣泛關(guān)注[13-14]。但是，尚缺乏關(guān)于苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油在飼糧中組合添加緩解大腸桿菌攻毒誘導(dǎo)仔豬氧化應(yīng)激的報(bào)道。因此，本研究根據(jù)苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油具有的抗氧化功能，將它們組合添加，初步考察其對(duì)大腸桿菌攻毒條件下仔豬生長(zhǎng)性能、抗氧化能力、空腸黏膜二糖酶活性和養(yǎng)分轉(zhuǎn)運(yùn)載體mRNA表達(dá)的影響，以期為3種添加劑的合理使用積累資料，也可為仔豬飼用抗生素替代品的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

苯甲酸：帝斯曼(中國(guó))有限公司生產(chǎn)，純度99.5%，推薦劑量3 000～5 000 g/t；凝結(jié)芽孢桿菌：昆明三正集團(tuán)惠贈(zèng)，含量5×109CFU/g，推薦劑量200～400 g/t；牛至油：珠海建明工業(yè)有限公司惠贈(zèng)，主要有效成分香芹酚和百里香酚含量分別大于2.2%和1.1%，推薦劑量300～500 g/t。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取20頭平均體重(7.64±0.46) kg健康的(24±1)日齡“杜×長(zhǎng)×大”斷奶仔豬，按體重相近原則，隨機(jī)分為對(duì)照組(CON組)、大腸桿菌組(ETEC組)、抗生素組(AT組)和復(fù)合添加劑組(ABO組)4個(gè)組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬。CON和ETEC組飼喂基礎(chǔ)飼糧，AT和ABO組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加抗生素(20 g/t硫酸黏菌素+40 g/t桿菌肽鋅)和復(fù)合添加劑(3 000 g/t苯甲酸+400 g/t凝結(jié)芽孢桿菌+400 g/t牛至油)的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)第22天早上，ETEC、AT和ABO組仔豬每頭灌服含3×1011CFU大腸桿菌的培養(yǎng)液，CON組仔豬灌服相同劑量的無(wú)菌培養(yǎng)液，試驗(yàn)期共26 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧

基礎(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型飼糧，參照NRC(2012)7～25 kg斷奶仔豬營(yíng)養(yǎng)需要配制而成，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)飼糧由相應(yīng)的添加劑產(chǎn)品等量替代基礎(chǔ)飼糧中的玉米構(gòu)成。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)期間，仔豬自由飲水，每日飼喂4次(08:00、12:00、16:00、20:00)，少喂勤添，飼喂量以豬只吃飽后料槽內(nèi)略有剩余為度。圈舍溫度控制在25～28 ℃，相對(duì)濕度60%～70%。試驗(yàn)仔豬按是否用大腸桿菌攻毒處理分別飼養(yǎng)于2間代謝室，防止交叉感染。

1.5 大腸桿菌培養(yǎng)與感染

本試驗(yàn)所用的大腸桿菌菌株為ETEC，由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院生物技術(shù)中心重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，其血清型包括O149、K88和K91。在試驗(yàn)第22天早上仔豬空腹稱(chēng)重后進(jìn)行攻毒，攻毒組每頭仔豬通過(guò)胃導(dǎo)管灌服含3×1011CFU(濃度為1×109CFU/mL)大腸桿菌培養(yǎng)液，未攻毒組仔豬灌服同等劑量的無(wú)菌培養(yǎng)液。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)維生素預(yù)混料可為每千克飼糧提供 Vitamin premix provided the following per kg of the diet：VA 9 000 IU，VD33 000 IU，VE 20.0 IU，VK33.0 mg，VB11.5 mg，VB24.0 mg，VB63.0 mg，VB120.02 mg，煙酸 nicotinic acid 30.0 mg，泛酸 pantothenic acid 15.0 mg，葉酸 folic acid 0.75 mg，生物素 biotin 0.1 mg。

2)礦物質(zhì)預(yù)混料可為每千克飼糧提供 Mineral premix provided the following per kg of the diet：Fe 100 mg，Cu 150 mg，Mn 20 mg，Zn 100 mg，I 0.3 mg，Se 0.3 mg。

3)營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。Nutrient levels were calculated values.

1.6 樣品采集與處理

試驗(yàn)第27天早上仔豬空腹稱(chēng)重后，前腔靜脈采血20 mL，置于普通離心管，室溫下放置30 min，3 500 r/min離心10 min，分離血清，置于-20 ℃保存，待測(cè)血清抗氧化指標(biāo)。采血后，所有仔豬麻醉致死后迅速打開(kāi)腹腔分離腸道，將空腸從其腸系膜處取下后于冰上取樣。于空腸1/2處截取20 cm左右腸段，縱向剖開(kāi)，用預(yù)冷生理鹽水輕輕沖洗除去腸壁上的內(nèi)容物，放置于濾紙上吸干水分，用載玻片沿同一方向輕輕刮取黏膜，裝入EP管中，用錫箔紙包好，液氮速凍后-80 ℃保存待測(cè)。

1.7 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.7.1 生長(zhǎng)性能

以重復(fù)為單位，于試驗(yàn)開(kāi)始后第1和27天早晨對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行空腹稱(chēng)重，記錄每日采食量，計(jì)算仔豬平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)、平均日增重(average daily gain，ADG)和料重比(feed/gain，F(xiàn)/G)。

1.7.2 腹瀉指標(biāo)

大腸桿菌攻毒后，每天觀察并記錄每個(gè)組仔豬腹瀉狀況，用于腹瀉指數(shù)和腹瀉率計(jì)算。糞便評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。當(dāng)糞便評(píng)分大于或等于2時(shí)定義為仔豬腹瀉。腹瀉率和平均腹瀉指數(shù)的計(jì)算，分別參照Yuan等[15]和廖波[16]。計(jì)算公式如下：

腹瀉率(%)=[試驗(yàn)期腹瀉頭次/

(試驗(yàn)仔豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))]×100； 腹瀉指數(shù)=總腹瀉評(píng)分/(試驗(yàn)仔豬頭數(shù)× 試驗(yàn)天數(shù))。

1.7.3 血清和腸道抗氧化能力

血清和腸道中總抗氧化能力(total antioxidant capability，T-AOC)，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)和總超氧化物岐化酶(total superoxide dismutase，T-SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定，操作均按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行?？漳c黏膜勻漿操作如下：用精密電子天平稱(chēng)取各組空腸黏膜1 g左右，按重量∶體積=1∶9的比例加入提前預(yù)冷的生理鹽水，置冰上勻漿后，勻漿液于冷凍離心機(jī)中按不同指標(biāo)要求轉(zhuǎn)速離心，取上清液用于T-AOC，GSH-Px、T-SOD活性及MDA含量測(cè)定。

表2 腹瀉評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

1.7.4 空腸黏膜二糖酶活性

采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行空腸黏膜蔗糖酶和麥芽糖酶活性測(cè)定。樣品測(cè)定之前需進(jìn)行勻漿預(yù)處理，稱(chēng)取0.5 g空腸黏膜樣品，按重量∶體積=1∶9的比例加入預(yù)冷的生理鹽水，冰浴條件下進(jìn)行勻漿，勻漿液于4 ℃冷凍離心機(jī)中3 500 r/min離心10 min，取上清液用于蔗糖酶和麥芽糖酶活性測(cè)定。

1.7.5 空腸黏膜養(yǎng)分轉(zhuǎn)運(yùn)載體mRNA表達(dá)水平

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)檢測(cè)空腸黏膜鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(sodium-glucose cotransporter 1,SGLT1)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(glucose transporter type 2,GLUT2)和寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(oligopeptide transporter 1,PepT1)mRNA表達(dá)水平。

空腸黏膜總RNA提取按照試劑盒(Trizol Reagent，TaKaRa，日本)操作說(shuō)明進(jìn)行，RNA濃度采用核酸蛋白檢測(cè)儀(Beckman Du-800，CA，美國(guó))檢測(cè)。A260/A280表示的是RNA的純度，該比值位于1.8～2.0之間表明RNA純度較好。cDNA合成采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTMreagent kit，TaKaRa，日本)進(jìn)行，具體操作步驟參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，反應(yīng)結(jié)束后-20 ℃保存?zhèn)溆?。利用NCBI搜索目的基因片段，運(yùn)用Primer 5、Oligo 6.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，由大連寶生生物公司合成，引物序列及退火溫度見(jiàn)表3。用實(shí)時(shí)定量PCR儀(ABI7900HT Real-Time PCR System，ABI，美國(guó))進(jìn)行測(cè)定，RT-qPCR反應(yīng)體系為10 μL：5 μL SYBR Premix Ex TaqTMⅡ(2×) (TaKaRa，日本)，0.4 μL上游引物，0.4 μL下游引物，3.2 μL雙蒸水，1 μL cDNA模板。PCR擴(kuò)增條件為：95 ℃ 30 s，95 ℃ 5 s，適宜的退火溫度30 s，共40個(gè)循環(huán)，95 ℃ 10 s。熔解曲線：55～95 ℃，溫度以0.5 ℃/s速率提升。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)作為內(nèi)參基因，相對(duì)熒光定量計(jì)算采用2-ΔΔCt法[17]。

表3 RT-PCR引物序列及退火溫度

1.8 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)先用Excel 2013進(jìn)行初步整理，然后采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件的獨(dú)立t檢驗(yàn)程序檢測(cè)CON和ETEC組之間的差異；大腸桿菌攻毒組(ETEC、AT和ABO組)數(shù)據(jù)先進(jìn)行單因素方差分析，然后用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。所有數(shù)據(jù)均以“平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)”表示，以P<0.05為差異顯著，0.05≤P≤0.10為有趨勢(shì)。

2 結(jié) 果

2.1 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表4可知，試驗(yàn)全期各組仔豬ADFI無(wú)顯著

差異(P>0.05)。與CON組相比，ETEC組仔豬ADG降低了9.91%(P>0.05)，F(xiàn)/G增加了5.11%(P>0.05)。與ETEC組相比，ABO組仔豬ADG顯著提高(P<0.05)，F(xiàn)/G顯著降低(P<0.05)。與AT組相比，ABO組仔豬ADG提高了17.21% (P>0.05)，F(xiàn)/G降低了5.29% (P>0.05)。

表4 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬生長(zhǎng)性能的影響

#表示ETEC與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)；a、b、c表示大腸桿菌攻毒組(ETEC、AT和ABO組)間的差異，同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。P1表示ETEC組與對(duì)照組間比較的P值，P2表示大腸桿菌攻毒組(ETEC、AT和ABO組)間比較的P值。下表同。

# mean significantly different between ETEC and CON groups (P<0.05). a, b and c indicate the difference among ETEC-challenged groups (ETEC, AT and ABO groups), values in the same row with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05).P1 mean theP-value of CON group compared with ETEC group,P2 mean theP-value compared among ETEC-challenged groups (ETEC, AT and ABO groups). The same as below.

2.2 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬腹瀉的影響

由表5可知，在試驗(yàn)第22～26天(攻毒后)，與CON組相比，ETEC組仔豬腹瀉率和腹瀉指數(shù)顯著提高(P<0.05)。與ETEC組相比，ABO組仔豬腹瀉率和腹瀉指數(shù)顯著降低(P<0.05)，AT組腹瀉率和腹瀉指數(shù)一定程度降低(P>0.05)。與AT組相比，ABO組仔豬腹瀉指數(shù)顯著降低(P<0.05)。

2.3 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬血清和空腸黏膜抗氧化能力的影響

由表6可知，與CON組相比，ETEC組仔豬血清和空腸黏膜MDA含量顯著提高(P<0.05)，血清T-AOC和T-SOD活性顯著降低(P<0.05)，有降低空腸黏膜T-AOC和T-SOD活性趨勢(shì)(P<0.10)。與ETEC組相比，ABO組仔豬血清和空腸黏膜T-AOC和T-SOD活性顯著升高(P<0.05)，血清和空腸黏膜MDA含量顯著降低(P<0.05)；AT組血清T-AOC活性顯著升高(P<0.05)。與AT組相比，ABO組仔豬血清T-AOC活性顯著提高(P<0.05)。各組仔豬血清和空腸黏膜GSH-Px活性均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.4 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬空腸黏膜二糖酶活性的影響

由表7可知，各組仔豬空腸黏膜麥芽糖酶和蔗糖酶活性差異均不顯著(P>0.05)。與CON組相比，ETEC組仔豬空腸黏膜麥芽糖酶和蔗糖酶活性分別降低了21.18%和9.46%；與ETEC組相比，ABO組仔豬空腸黏膜麥芽糖酶和蔗糖酶活性分別提高了26.17%和8.59%。

表6 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬血清和空腸黏膜抗氧化能力的影響

表7 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬空腸黏膜二糖酶活性的影響

2.5 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬空腸黏膜養(yǎng)分轉(zhuǎn)運(yùn)載體mRNA表達(dá)的影響

由表8可知，與CON組相比，ETEC組仔豬空腸黏膜SGLT1 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)。與ETEC組相比，ABO組仔豬空腸黏膜SGLT1和PepT1 mRNA表達(dá)水平顯著提高(P<0.05)，AT組空腸黏膜PepT1 mRNA表達(dá)水平顯著提高(P<0.05)。然而，各組仔豬空腸黏膜GLUT2 mRNA表達(dá)水平均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表8 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬空腸黏膜養(yǎng)分轉(zhuǎn)運(yùn)載體mRNA表達(dá)的影響

3 討 論

3.1 動(dòng)物攻毒模型的構(gòu)建

本試驗(yàn)利用大腸桿菌攻毒建立仔豬腹瀉模型發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌攻毒導(dǎo)致仔豬ADG降低9.91%，F(xiàn)/G增加5.11%，結(jié)果與前人報(bào)道結(jié)果[18]基本一致。其可能原因，一方面與大腸桿菌攻毒后營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)從促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移到支持機(jī)體免疫應(yīng)答有關(guān)，另一方面與腸道功能障礙以及腹瀉導(dǎo)致對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力降低有關(guān)[19-20]。前人研究表明，大腸桿菌誘導(dǎo)的腸道抗氧化能力降低可能是其導(dǎo)致仔豬腹瀉的重要機(jī)制[21]。本研究也發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌攻毒顯著提高了仔豬血清和空腸黏膜MDA含量，降低了血清T-AOC和T-SOD活性，有降低空腸黏膜T-AOC和T-SOD活性的趨勢(shì)，結(jié)果與前人研究報(bào)道[4,22]一致。因此，我們推測(cè)從飼糧途徑增強(qiáng)仔豬的抗氧化能力可能是緩解仔豬大腸桿菌腹瀉的有效措施之一。

3.2 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬生長(zhǎng)性能和腹瀉的影響

前人研究發(fā)現(xiàn)，苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油作為飼料添加劑，具有改善畜禽生長(zhǎng)性能和增強(qiáng)疾病抵抗力的效應(yīng)。Papatsiros等[23]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加苯甲酸和蠟樣芽胞桿菌混合物可顯著提高斷奶仔豬ADG，降低F/G和腹瀉率。Hui等[24]研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬飼糧中添加2 000 mg/kg苯甲酸和100 mg/kg百里香酚顯著改善了仔豬生長(zhǎng)性能，降低了腹瀉指數(shù)。李潔云等[25]在研究酸化劑、益生菌、精油和酶制劑共同組合添加對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，與AT組相比，該4種產(chǎn)品同時(shí)添加顯著提高了斷奶仔豬ADG，降低了F/G和腹瀉率。本研究也發(fā)現(xiàn)，苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油組合添加顯著改善了大腸桿菌攻毒仔豬ADG，降低了F/G、腹瀉率和腹瀉指數(shù)，且作用效果優(yōu)于AT組。其原因可能與3種添加劑的抗氧化作用有關(guān)。

3.3 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬抗氧化能力的影響

眾所周知，為了抵抗氧化損傷，體內(nèi)存在的酶類(lèi)抗氧化系統(tǒng)和非酶類(lèi)抗氧化系統(tǒng)相互作用共同維持機(jī)體自由基平衡，其中T-AOC、T-SOD、GSH-Px是酶類(lèi)抗氧化系統(tǒng)的重要組成部分[26]。MDA則是脂質(zhì)過(guò)氧化所產(chǎn)生的穩(wěn)定終產(chǎn)物，其含量常常用來(lái)反映機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化程度和細(xì)胞損傷程度[27]。已有研究發(fā)現(xiàn)，苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油具有很強(qiáng)的抗氧化能力，可以緩解病理?xiàng)l件誘導(dǎo)的氧化損傷。刁慧[28]研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬飼糧中添加0.5%苯甲酸能夠顯著降低仔豬血清MDA含量。唐曉溪[29]在小鼠飼糧中添加植物精油可提高肝臟GSH-Px活性及心臟過(guò)氧化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性，降低肝臟、肺臟MDA含量。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加復(fù)合添加劑顯著緩解了大腸桿菌攻毒引起的血清和空腸黏膜T-AOC和T-SOD活性降低及MDA含量升高，且作用效果優(yōu)于AT組。結(jié)果表明，苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油組合添加可提高機(jī)體和腸道的抗氧化能力，緩解大腸桿菌攻毒誘導(dǎo)的氧化損傷。

3.4 復(fù)合添加劑對(duì)大腸桿菌攻毒仔豬空腸消化吸收功能的影響

小腸是機(jī)體食物消化吸收的最主要部位，腸黏膜上的二糖酶對(duì)碳水化合物的吸收起著重要作用[30]。Jang等[31]研究發(fā)現(xiàn)，肉雞飼糧中添加50 mg/kg的植物精油能顯著提高胰蛋白酶、α-淀粉酶和麥芽糖酶的活性。郭娟[32]研究發(fā)現(xiàn)，地衣芽袍桿菌能夠顯著提高小腸黏膜二糖酶活性。本研究發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌攻毒使仔豬空腸黏膜麥芽糖酶和蔗糖酶活性分別降低了21.18%和9.46%，而飼糧添加復(fù)合添加劑則明顯抑制大腸桿菌誘導(dǎo)的麥芽糖酶和蔗糖酶活性的下降。與此同時(shí)，在動(dòng)物腸道黏膜中存在大量的養(yǎng)分轉(zhuǎn)運(yùn)載體，其表達(dá)量的高低反映出腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)能力。GLUT2和SGLT1是介導(dǎo)葡萄糖吸收的主要載體[33]。PepT1在小腸黏膜中主要運(yùn)輸來(lái)自食物蛋白質(zhì)消化分解產(chǎn)生的二肽和三肽[34]。本研究發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌攻毒顯著降低了仔豬空腸黏膜SGLT1 mRNA表達(dá)水平，而飼糧添加復(fù)合添加劑顯著抑制了大腸桿菌誘導(dǎo)的SGLT1和PepT1 mRNA表達(dá)水平的降低。結(jié)果表明，飼糧添加復(fù)合添加劑可顯著改善大腸桿菌攻毒仔豬腸道養(yǎng)分消化吸收能力，這可能與苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油組合添加可提高仔豬抗氧化能力，緩解大腸桿菌攻毒誘導(dǎo)的氧化損傷，進(jìn)而改善腸道屏障結(jié)構(gòu)和功能完整性有關(guān)。

4 結(jié) 論

飼糧添加苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油復(fù)合添加劑可顯著抑制大腸桿菌誘導(dǎo)的仔豬腹瀉和氧化損傷，提高仔豬抗氧化能力，改善仔豬生長(zhǎng)性能和空腸養(yǎng)分消化吸收能力。