投喂頻率對(duì)虎斑烏賊生長(zhǎng)性能、體成分、消化酶 活性、組織脂肪酸和氨基酸含量的影響

朱婷婷 李晨晨 陸 游 金 敏 王學(xué)習(xí) 羅嘉翔 周歧存

(寧波大學(xué)海洋學(xué)院魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)研究室，寧波315211)

投喂策略由投喂頻率、攝食水平(或投飼率)和投飼方式等環(huán)節(jié)組成，是魚(yú)類(lèi)集約化養(yǎng)殖管理的重要內(nèi)容之一[1]。投喂頻率為影響水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要因素之一，不合理的投喂頻率會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)速度緩慢，從而使個(gè)體間的規(guī)格分化差異變大[2]。投喂頻率過(guò)高往往會(huì)降低飼料效率，進(jìn)而導(dǎo)致養(yǎng)殖成本升高并且造成養(yǎng)殖環(huán)境的惡化；而投喂頻率過(guò)低則會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)性能的降低[3]。因此，適宜的投喂頻率對(duì)魚(yú)類(lèi)的養(yǎng)殖有重要的意義。

虎斑烏賊(Sepiapharaonis)，隸屬于軟體動(dòng)物門(mén)(Mollusca)，頭足綱(Cephalopoda)，十腕目(Decapoda)，烏賊科(Sepiidae)，烏賊屬(Sepia)，廣泛分布于我國(guó)南海海域[4]。虎斑烏賊個(gè)體較大，口味鮮美，具有抗病力強(qiáng)、生長(zhǎng)快和適合高密度養(yǎng)殖等優(yōu)點(diǎn)，是一種具有養(yǎng)殖前景的經(jīng)濟(jì)頭足類(lèi)[5]。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)虎斑烏賊的研究主要集中在烏賊膜特性[6]、生態(tài)因子的耐受程度[7]以及烏賊不同組織的體成分、氨基酸、脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)成分[8]和胚胎發(fā)育[9]等，但有關(guān)投喂頻率對(duì)虎斑烏賊影響的研究還尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)旨在通過(guò)研究不同投喂頻率對(duì)虎斑烏賊生長(zhǎng)性能、體成分、消化酶活性、組織氨基酸和脂肪酸含量的影響，確定適宜投喂頻率，為虎斑烏賊幼體階段的合理投喂和養(yǎng)殖、品質(zhì)調(diào)控和能量物質(zhì)轉(zhuǎn)換利用等提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)用虎斑烏賊購(gòu)自象山來(lái)發(fā)養(yǎng)殖場(chǎng)，并在寧波市海洋與漁業(yè)科技創(chuàng)新基地進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)。試驗(yàn)前，將虎斑烏賊幼體放在300 L的藍(lán)桶中馴養(yǎng)2周，養(yǎng)殖桶置于室內(nèi)自然光照下，室內(nèi)為透明塑料頂棚，水體每天充氣，馴養(yǎng)期間每日用冰鮮蝦(體成分和氨基酸組成、脂肪酸組成分別見(jiàn)表1和表2)投喂2次。馴養(yǎng)結(jié)束后，饑餓24 h，挑選大小均一、體表無(wú)外傷的初始體重為(13.08±0.01) g的虎斑烏賊幼體180只，隨機(jī)分成3組(投喂頻率分別為每天1、2和4次，分別命名為F1、F2和F4投喂組)，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只。試驗(yàn)期4周。

表1 冰鮮蝦體成分(濕重基礎(chǔ))和氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目 Items含量Content賴氨酸 Lys0.44 組氨酸 His0.14 精氨酸 Arg0.35 非必需氨基酸 NEAA天門(mén)冬氨酸 Asp0.57 絲氨酸 Ser0.23 谷氨酸 Glu0.87 甘氨酸 Gly0.28 丙氨酸 Ala0.30 胱氨酸 Cys0.04 酪氨酸 Tyr0.18 脯氨酸 Pro0.27 總氨基酸 TAA5.29 必需氨基酸 EAA2.56 非必需氨基酸 NEAA2.73 必需氨基酸/總氨基酸 EAA/TAA0.05

表2 冰鮮蝦脂肪酸組成(占總脂肪酸的百分比)

續(xù)表2項(xiàng)目 Items含量ContentC24∶00.05C22∶6n-3 (DHA)9.76飽和脂肪酸 SFA37.74單不飽和脂肪酸 MUFA31.91多不飽和脂肪酸 PUFA30.32n-3高不飽和脂肪酸 n-3HUFA27.29n-6高不飽和脂肪酸 n-6HUFA3.03n-3/n-69.01DHA/EPA0.63

EPA：二十碳五稀酸 eicosapentaenoic acid；DHA：二十二碳六稀酸 docosahexaenoic acid。表7、表8同。The same as
Table 7 and
Table 8.

1.2 飼養(yǎng)管理

3組虎斑烏賊隨機(jī)分在9個(gè)桶中，每個(gè)桶20只。在試驗(yàn)中不同的投喂頻率和時(shí)間分別為：F1投喂組，每天1次(09:00)；F2投喂組，每天2次(09:00、18:00)；F4投喂組，每天4次(09:00、12:00、15:00和18:00)。每次投喂都為過(guò)量投喂，投喂前將冰凍蝦解凍，吸除表面水分并稱(chēng)重，投喂后1 h吸出殘餌，吸去表面水分并稱(chēng)重，攝食量為投喂重量減去殘餌重量，每天08:00以微流水方式換水，換水量為30%。養(yǎng)殖周期為4周，在此期間，水溫為29.0～34.9 ℃，溶解氧濃度為6.0 mg/L以上，鹽度為23.0‰～27.3‰。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，饑餓24 h，將烏賊用0.15 mol/L氯化鎂(MgCl2)麻醉后[10]，稱(chēng)重計(jì)數(shù)，計(jì)算增重率(weight gain rate，WGR)、成活率(survival rate，SR)和特定增長(zhǎng)率(specific growth rate，SGR)等指標(biāo)。在每個(gè)養(yǎng)殖桶中隨機(jī)取3只烏賊，分別稱(chēng)重，測(cè)量其胴長(zhǎng)，解剖取肝臟稱(chēng)重，用來(lái)計(jì)算肥滿度(condition factor，CF)和肝體比(hepatosomatic index，HSI)。取10只烏賊，在冰袋上解剖，取其前腸、肝臟于2.0 mL離心管內(nèi)，用于消化酶活性及氨基酸、脂肪酸含量的測(cè)定，剝離腹部肌肉于4 mL離心管內(nèi)，用于肌肉組成成分、氨基酸及脂肪酸含量的測(cè)定，樣品于-80 ℃冰箱中保存。

1.4 分析方法

肌肉和肝臟常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量測(cè)定參照AOAC(1995)[11]方法，其中水分含量測(cè)定用105 ℃恒重法；粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用蛋白測(cè)定儀(Leco FB-528)，原理是熱導(dǎo)吸收法；粗脂肪含量的測(cè)定采用脂肪測(cè)定儀(SX360)，原理是索氏抽提法；粗灰分含量的測(cè)定采用馬弗爐550 ℃焚燒失重法。

脂肪酸含量分析：將肝臟和肌肉樣品冷凍干燥48 h，在鹽酸-甲醇溶液和氫氧化鉀-甲醇溶液中抽提脂肪進(jìn)行前處理后，送到中國(guó)科學(xué)院寧波材料技術(shù)與工程研究所測(cè)試中心，使用氣相-質(zhì)譜儀(GCMS-QP2010 Plus，SHIMADZU公司，日本)進(jìn)行脂肪酸的甲酯化，用面積歸一法求得各類(lèi)脂肪酸的相對(duì)百分含量。

氨基酸含量分析：將肝臟和肌肉樣品用6 mol/L鹽酸沙浴24 h后，用50 mL容量瓶定容并吸取1 mL溶液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后的樣品加入0.02 mol/L的鹽酸后，使用氨基酸分析儀(L-8900)進(jìn)行分析。

腸道消化酶活性和肝臟抗氧化酶活性分析：腸道胰蛋白酶(trypsin)、α淀粉酶(α-amylase，AMS)、脂肪酶(lipase，LPS)、肌酸激酶(creatine kinase，CK)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-glutamyl transferase，γ-GT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)、Na+，K+-ATP酶(Na+，K+-ATPase)活性，肝臟的丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性，均采用南京建成工程生物研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.5 計(jì)算公式

成活率(%)=100×Nt/N0； 增重率(%)=100×(Wt-W0)/W0； 特定生長(zhǎng)率(%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t； 攝食量(feed intake，F(xiàn)I，g)=投喂量-殘餌量； 飼料效率(feed efficiency，F(xiàn)E，%)= 100×(Wf+Wd-Wi)/FI； 肥滿度(g/cm3)=100×W/L3； 肝體比(%)=100×Wh/W。

式中：Nt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)烏賊數(shù)量(只)；N0為試驗(yàn)初始烏賊數(shù)量(只)；Wt為試驗(yàn)烏賊末均重(g)；W0為試驗(yàn)烏賊初均重(g)；t為試驗(yàn)天數(shù)(d)；Wf為終末烏賊總重(g)；Wd為死亡烏賊總重(g)；Wi為初始烏賊總重(g)；FI為攝食量(g)；W為烏賊體重(g)；L為烏賊胴長(zhǎng)(cm)；Wh為肝臟重(g)。

1.6 數(shù)據(jù)處理及分析

數(shù)據(jù)先用Excel 2007處理，然后用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。先對(duì)數(shù)據(jù)作單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著時(shí)，用Turkey程序進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié) 果

2.1 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊生長(zhǎng)性能及形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

投喂頻率對(duì)虎斑烏賊生長(zhǎng)性能及形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響見(jiàn)表3。試驗(yàn)結(jié)果表明，各組虎斑烏賊的存活率和肥滿度沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。攝食量隨著投喂頻率的升高而顯著上升(P<0.05)。F2投喂組的餌料效率顯著高于F1和F4投喂組(P<0.05)，F(xiàn)1和F4投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。F2和F4投喂組的增重率、特定生長(zhǎng)率和肝體比顯著高于F1投喂組(P<0.05)，F(xiàn)2和F4投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

2.2 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟和肌肉組成的影響

投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟和肌肉組成的影響見(jiàn)表4。試驗(yàn)結(jié)果表明，各組虎斑烏賊的肝臟粗蛋白質(zhì)含量沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)；F4投喂組的肝臟水分含量顯著低于F1投喂組(P<0.05)；F4投喂組的肝臟粗脂肪含量顯著高于F1和F2投喂組(P<0.05)，F(xiàn)2投喂組顯著高于F1投喂組(P<0.05)。F2和F4投喂組的肌肉水分含量顯著低于F1投喂組(P<0.05)，肌肉粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量顯著高于F1投喂組(P<0.05)，但F2和F4投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表3 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊生長(zhǎng)性能及形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表4 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟和肌肉組成的影響(濕重基礎(chǔ))

2.3 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊組織氨基酸組成的影響

投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肌肉氨基酸組成的影響見(jiàn)表5。試驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)2投喂組的肌肉必需氨基酸中蘇氨酸(Thr)、亮氨酸(Leu)和賴氨酸(Lys)含量顯著高于F1投喂組(P<0.05)，F(xiàn)4投喂組與F1和F2投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。F2投喂組的肌肉非必需氨基酸中天門(mén)冬氨酸(Asp)、絲氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)和丙氨酸(Ala)含量顯著高于F1投喂組(P<0.05)，F(xiàn)4投喂組與F1和F2投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表5 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肌肉氨基酸組成的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟氨基酸組成的影響見(jiàn)表6。試驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)1投喂組的肝臟中Thr、纈氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、異亮氨酸(Ile)、Leu、苯丙氨酸(Phe)、Lys、組氨酸(His)、精氨酸(Arg)、Asp、Ser、Glu、甘氨酸(Gly)、Ala、半胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、總氨基酸、必需氨基酸和非必需氨基酸含量均顯著高于F2和F4投喂組(P<0.05)，其中F2和F4投喂組之間的肝臟中Val、Met、His、Arg、Asp、Glu、Gly、Ala、Cys、總氨基酸和非必需氨基酸含量沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

2.4 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊組織脂肪酸組成的影響

投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肌肉脂肪酸組成的影響見(jiàn)表7。試驗(yàn)結(jié)果表明，各組肌肉中二十碳五稀酸(EPA)、飽和脂肪酸(SFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA)、多不飽和脂肪酸(PUFA)和n-3高不飽和脂肪酸(n-3HUFA)含量沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)；F1投喂組肌肉中二十二碳六稀酸(DHA)、n-6高不飽和脂肪酸(n-6HUFA)含量和DHA/EPA顯著高于F2和F4投喂組(P<0.05)，F(xiàn)2和F4投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。F2投喂組的n-3/n-6顯著高于F1投喂組(P<0.05)，但與F4投喂組沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表6 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟氨基酸組成的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表7 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肌肉脂肪酸組成的影響(占總脂肪酸的百分比)

續(xù)表7項(xiàng)目Items組別 GroupsF1F2F4C20∶3n-30.32±0.030.28±0.010.25±0.02C20∶5n-3 (EPA)12.86±0.5613.61±0.2113.34±0.23C22∶1n-90.19±0.030.20±0.030.11±0.01C22∶5n-61.16±0.06b0.87±0.06a0.93±0.08abC22∶5n-32.27±0.082.01±0.132.23±0.04C22∶6n-3 (DHA) 32.06±0.88b29.90±0.51a29.43±0.25a飽和脂肪酸 SFA39.33±1.4642.15±0.6542.18±0.28單不飽和脂肪酸 MUFA8.62±0.648.58±0.478.89±0.15多不飽和脂肪酸 PUFA52.05±1.4349.27±0.9748.93±0.25n-3高不飽和脂肪酸 n-3HUFA47.62±1.4445.86±0.7745.32±0.07n-6高不飽和脂肪酸 n-6HUFA4.44±0.38b3.41±0.21a3.61±0.19an-3/n-610.73±0.35a13.54±0.64b12.61±0.63abDHA/EPA2.50±0.06b2.20±0.01a2.21±0.06a

投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟脂肪酸組成的影響見(jiàn)表8。試驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)2和F4投喂組的肝臟中EPA、MUFA含量和n-3/n-6均顯著高于F1投喂組(P<0.05)，而F2和F4投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。F1投喂組的肝臟中DHA、SFA含量和DHA/EPA顯著高于F2和F4投喂組(P<0.05)，而F2和F4投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表8 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟脂肪酸組成的影響(占總脂肪酸的百分比)

續(xù)表8項(xiàng)目Items組別 GroupsF1F2F4C22∶1n-91.24±0.07a1.55±0.04b1.61±0.05bC22∶5n-60.17±0.01b0.11±0.02a0.13±0.01abC22∶5n-30.76±0.01a0.99±0.07b1.02±0.03bC24∶00.15±0.010.14±0.070.10±0.02C22∶6n-3 (DHA)22.70±0.76b19.80±0.56a19.83±0.16a飽和脂肪酸 SFA33.78±0.21b29.65±0.53a29.15±0.04a單不飽和脂肪酸 MUFA25.72±0.15a29.24±0.36b29.08±0.26b多不飽和脂肪酸 PUFA40.50±0.2541.11±0.8341.78±0.28n-3高不飽和脂肪酸 n-3HUFA36.47±0.2937.41±0.8137.95±0.27n-6高不飽和脂肪酸 n-6HUFA4.03±0.05b3.70±0.04a3.83±0.06abn-3/n-69.06±0.17a10.12±0.20b9.91±0.15bDHA/EPA1.84±0.13b1.26±0.04a1.23±0.04a

2.5 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟抗氧化性能和腸道消化酶活性的影響

投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟抗氧化性能和腸道消化酶活性的影響見(jiàn)表9。試驗(yàn)結(jié)果表明，各組肝臟超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)，F(xiàn)1投喂組的肝臟谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性顯著高于F2投喂組(P<0.05)，與F4投喂組沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

各組前腸的胰蛋白酶、肌酸激酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶和Na+，K+-ATP酶活性沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。F1投喂組的前腸α-淀粉酶、脂肪酶和堿性磷酸酶活性均顯著高于F2投喂組(P<0.05)，F(xiàn)2和F4投喂組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表9 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟抗氧化性能和腸道消化酶活性的影響

3 討 論

3.1 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊生長(zhǎng)性能的影響

在適宜的投喂頻率范圍內(nèi)，大多數(shù)魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)速率會(huì)隨著投喂頻率的增加而增加[12]，林艷等[13]研究發(fā)現(xiàn)，每天投喂5次時(shí)，團(tuán)頭魴(Megalobramaambycephala)的特定生長(zhǎng)率和增重率都顯著高于每天投喂1和2次的。王武等[14]在瓦氏黃顙魚(yú)(Pelteobagrusvachellirichardson)幼魚(yú)的研究中也發(fā)現(xiàn)，隨著投喂頻率的增加，黃顙魚(yú)的特定生長(zhǎng)率顯著升高。許氏平鲉(Sebastesschlegeli)幼魚(yú)的特定生長(zhǎng)率在每天投喂4次時(shí)最高，比其他組(每天投喂1、3次和每2天投喂3次)高2.25%～15.43%[1]。本試驗(yàn)同樣發(fā)現(xiàn)，當(dāng)每天投喂2次(F2投喂組)時(shí)，虎斑烏賊的增重率和特定生長(zhǎng)率都顯著高于F1投喂組，這可能是因?yàn)樵谶m宜的較高投喂頻率下，虎斑烏賊每天接近或達(dá)到飽食的次數(shù)更多，使得自身獲得更多的營(yíng)養(yǎng)與能量用于體重增加[15]，進(jìn)而引起餌料效率的提高，這在團(tuán)頭魴[13]里也有相同的結(jié)果，說(shuō)明適當(dāng)?shù)奶岣咄段诡l率有利于魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)中，F(xiàn)2投喂組的餌料效率顯著高于F4投喂組，可能是因?yàn)楫?dāng)投喂頻率過(guò)高時(shí)，一方面，由于虎斑烏賊增加了因攝食而需要消耗的能量，使其用于生長(zhǎng)的能量減少，并且水生生物各種活動(dòng)行為頻繁，能量消耗過(guò)快，不利于其自身生長(zhǎng)，并且會(huì)增加餌料成本[16]；另一方面，因?yàn)闉踬\是有胃動(dòng)物，胃中可以容納較多的食物，反復(fù)多次飼喂會(huì)導(dǎo)致消化道內(nèi)含物反射性急速移動(dòng)，在未消化的情況下被排掉，從而降低了食物的轉(zhuǎn)化效率，影響生長(zhǎng)。

3.2 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟和肌肉組成成分、形態(tài)學(xué)指標(biāo)及組織氨基酸組成的影響

3.3 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊組織脂肪酸組成的影響

海水魚(yú)靠自身合成EPA和DHA的含量不能滿足其自身生長(zhǎng)的需要，必須要從食物中獲得[26]。缺乏EPA和DHA會(huì)對(duì)魚(yú)類(lèi)的視覺(jué)系統(tǒng)和色素沉積產(chǎn)生不利影響，降低魚(yú)苗捕食能力，影響神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)發(fā)育，升高死亡率[27]?；ㄉ南┧?ARA，C20∶4n-6)作為高不飽和脂肪酸其中之一也影響著某些海水魚(yú)的正常發(fā)育[28]，在本研究中，隨著投喂頻率從每天1次升高到每天2次，烏賊肌肉和肝臟中的C20∶4n-6含量均顯著降低，而F2和F4投喂組之間沒(méi)有顯著性差異。隨著投喂頻率的升高，雖然肌肉中的EPA含量沒(méi)有顯著性差異，但是總體表現(xiàn)出上升趨勢(shì)，而肌肉中DHA含量和DHA/EPA顯著下降，這與肝臟中的EPA和DHA含量變化相一致，表明肌肉和肝臟中脂肪酸的含量和組成有一定的正相關(guān)性，這可能跟脂肪儲(chǔ)存及脂肪酸的選擇性保留相關(guān)。魚(yú)體脂肪酸n-3/n-6作為評(píng)價(jià)水產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要因素之一，WHO/FAO推薦的水平是至少在0.1～0.2[29]，在虎斑烏賊試驗(yàn)中，冰鮮蝦和虎斑烏賊的肌肉n-3/n-6為9.01～13.54，遠(yuǎn)大于WHO/FAO的推薦值，表明冰鮮蝦作為虎斑烏賊的餌料，能夠滿足其脂肪酸的需要量。

3.4 投喂頻率對(duì)虎斑烏賊肝臟抗氧化性能和腸道消化酶活性的影響

肝臟是重要的代謝器官，是自由基產(chǎn)生的重要場(chǎng)所。自由基會(huì)導(dǎo)致脂肪酸的氧化[30]。丙二醛作為脂質(zhì)過(guò)氧化的最終產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性[31]，本研究中，虎斑烏賊肝臟丙二醛含量隨著投喂頻率的升高表現(xiàn)為升高的趨勢(shì)，這表明高頻率的投喂會(huì)引起肝臟氧化應(yīng)激，這與團(tuán)頭魴[32]肝臟丙二醛含量在每天投喂6次時(shí)達(dá)到最高的結(jié)果相一致。在魚(yú)類(lèi)研究中，超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶是評(píng)價(jià)細(xì)胞抗氧化能力的重要指標(biāo)[33]。本試驗(yàn)中，F(xiàn)4投喂組肝臟超氧化物歧化酶活性最高，這會(huì)緩解由高頻投喂引起的氧化應(yīng)激。F2投喂組谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性顯著低于F1投喂組，而F4投喂組與F1和F2投喂組沒(méi)有顯著性差異。然而，目前關(guān)于投喂頻率對(duì)虎斑烏賊氧化應(yīng)激確切機(jī)制的研究還比較少，需要進(jìn)一步深入研究。

消化酶活性被認(rèn)為是評(píng)價(jià)魚(yú)類(lèi)吸收消化食物的能力之一[34]。本研究中，3種消化酶(α-淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶)活性都是隨投喂頻率的升高表現(xiàn)為先降低后升高的趨勢(shì)，F(xiàn)1投喂組的虎斑烏賊的前腸α-淀粉酶、脂肪酶活性均顯著高于其他組，但各組間胰蛋白酶活性沒(méi)有顯著性差異，這與灰海馬(Hippocampuserectus)[35]、條石鯛(Oplegnathusfasciatus)[3]和奧尼羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus×O.affreus)[36]的研究結(jié)果相似。這可能是由于在較低的投喂頻率下，虎斑烏賊攝入的食物不足，機(jī)體自身需要通過(guò)提高腸道消化酶活性，使食物中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被充分吸收，進(jìn)而滿足正常生長(zhǎng)所需要的能量；而當(dāng)攝入的食物增多時(shí)，虎斑烏賊用較低的消化酶活性就能獲得滿足正常生長(zhǎng)需要的能量，這也進(jìn)一步驗(yàn)證了與F4投喂相比，F(xiàn)2投喂組的虎斑烏賊對(duì)餌料的利用率更高。最近研究發(fā)現(xiàn)，腸道肌酸激酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和Na+，K+-ATP酶和消化酶的變化有相似的趨勢(shì)[37]，表明魚(yú)在最佳投飼頻率下吸收養(yǎng)分的能力增強(qiáng)。

4 結(jié) 論

綜合考慮生長(zhǎng)性能、餌料利用、肝臟和肌肉體成分、肝臟抗氧化酶活性、腸道消化酶活以及組織脂肪酸和氨基酸組成，在本試驗(yàn)條件下，虎斑烏賊幼體的適宜投喂頻率為每天2次。