不同栽培種配方對(duì)羊肚菌菌絲、菌核和分生孢子的影響*

劉福陽，王愛仙，王怡暄，鄧文明，顏振蘭，巫仁高**

（1．南平市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，福建 建陽 354200；2．南平市農(nóng)業(yè)局食用菌站，福建 延平 353000）

羊肚菌（Morchella spp．）隸屬于子囊菌門（Ascomycota） 盤菌綱 （Discomycetes） 盤菌目 （Pezizales） 羊肚菌科（Morchellaceae） 羊肚菌屬 （Morchella），又名羊肚菜、羊肚蘑、編笠菌、陽雀菌等，因其菌蓋部分長得很像羊肚而得名[1]。羊肚菌是一類大型珍稀野生食藥兼用真菌，既是宴席上的珍品，又有很高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，在歐美一些發(fā)達(dá)國家，其被認(rèn)為是僅次于塊菌的高級(jí)補(bǔ)品，最早收錄于李時(shí)珍的《本草綱目》，民間有“年年吃羊肚、八十照樣滿山走”的說法[2]。國內(nèi)外研究羊肚菌迄今已有100多年的歷史，但羊肚菌的具體出菇機(jī)制尚不明了，與氣候、菌核、分生孢子、外源營養(yǎng)袋等存在何種直接關(guān)系研究的也不夠透徹，使得羊肚菌在全國各地的大田栽培生產(chǎn)中，經(jīng)常出現(xiàn)產(chǎn)量不穩(wěn)定，出菇不均勻，子實(shí)體易變畸形等關(guān)鍵性問題[3－5]。本文研究不同栽培種基質(zhì)配方對(duì)羊肚菌菌絲、菌核、分生孢子和保存時(shí)間的影響，為羊肚菌人工栽培提供科學(xué)基礎(chǔ)[6]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1．1．1 菌種

菌種：野生羊肚菌（Morchella spp．）經(jīng)組織分離并保存。

1．1．2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂條 20 g、KH2PO40．5 g、MgSO40．5 g、蛋白胨 2 g，自來水1 000 mL，121℃滅菌30 min；原種培養(yǎng)基：木屑65%、小麥20%、土壤10%、KH2PO41%、Mg SO41%、生石灰1．5%、石膏1．5%，121℃滅菌120 min，其中小麥需提前用石灰水浸泡或水煮至無白芯再拌料滅菌。

1.2 試驗(yàn)方法

1．2．1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)計(jì)8種羊肚菌栽培種培養(yǎng)基配方，配方1：木屑57%、小麥30%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方2：木屑57%、小麥30%、草木灰10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方3：木屑55%、小麥30%、土壤10%、KH2PO41%、MgSO41%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方4：木屑37%、小麥30%、谷殼20%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方5：木屑37%、玉米粒30%、玉米芯20%、土壤 10%、生石灰1．5%、石膏 1．5%；配方 6：木屑27%、小麥60%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方7：木屑47%、棉籽殼20%、麥麩20%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%；配方8：木屑47%、谷殼20%、麥麩20%、土壤10%、生石灰1．5%、石膏1．5%。每個(gè)配方3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10瓶[7－8]。

1．2．2 栽培種的制備

8種配方中的小麥和玉米需提前用石灰水浸泡或水煮至無白芯，再按不同配方比例拌料混合均勻。為方便測(cè)量菌絲生長速度和觀察菌核，采用原種玻璃瓶進(jìn)行裝料，裝料時(shí)邊裝料邊抖動(dòng)，裝至瓶肩高（約13 cm）后在料面上輕輕壓平，以倒放時(shí)料不會(huì)倒出為準(zhǔn)。121℃滅菌120 min，待其冷切后無菌條件下接種，然后再擺放在21℃、黑暗條件下培養(yǎng)。

1．2．3 長時(shí)間保存

待等菌絲走滿瓶后放在常溫（8℃～22℃）、弱光條件下保存5個(gè)月。

1．2．4 播種

保存5個(gè)月后的栽培種，用耙種鉤將羊肚菌菌種從玻璃瓶中掏出搗碎，加水拌菌種直至菌種濕潤，但不滴水。在34 cm×47 cm×10 cm規(guī)格的周轉(zhuǎn)框上鋪上厚8 cm～10 cm的經(jīng)石灰消過毒、含水量在15%～25%的土壤，然后按每框半瓶的用種量直接播種到土壤面上，隨即將表層3 cm處的土壤和菌種拌均，覆蓋黑地膜保濕[9－11]。

1．2．5 記錄與觀察

當(dāng)栽培種的菌絲生長至原種玻璃瓶肩下3 cm時(shí)，給各配方統(tǒng)一劃起始線，5 d后再劃終止線，測(cè)算出菌絲生長速度并觀察菌絲生長長勢(shì)；在栽培種培養(yǎng)過程中觀察記錄各配方的菌核開始出現(xiàn)時(shí)間、菌核分布區(qū)域、菌核顏色變化和菌核數(shù)量；播種后每隔6 h觀察記錄各配方的菌種萌發(fā)時(shí)間、菌絲長勢(shì)以及分生孢子出現(xiàn)時(shí)間和數(shù)量。

1．2．6 數(shù)據(jù)分析

利用DPS分析軟件的多重比較LSD法分析菌絲生長速度數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)羊肚菌菌絲生長情況影響

不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)羊肚菌菌絲生長情況的影響結(jié)果見表1。

表1 羊肚菌在不同栽培種培養(yǎng)基中生長情況Tab．1 Growth situation of Morchella spp．in different culture media

接種1 d后，在不同栽培種培養(yǎng)基上用肉眼均能看到羊肚菌菌絲的萌發(fā)定植，并快速生長，但各個(gè)配方的生長速度不一致。從表1可以看出，配方6和配方5菌絲生長速度最快，分別為1．40 cm·d－1和1.39 cm·d-1，并與其他6個(gè)配方相比達(dá)到極顯著性差異。在菌絲性狀方面，不同配方的菌絲顏色差異不大，在生長前期均為白色，菌絲后期轉(zhuǎn)為黃色；配方4菌絲生長稠密，配方5菌絲生長稀疏，其他配方間菌絲生長差異不大，均為較密。

2.2 不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)羊肚菌菌核培養(yǎng)特征影響

羊肚菌菌核是由初生菌絲或次生菌絲形成致密交織扭結(jié)的菌絲團(tuán)。由于沒有明顯的結(jié)構(gòu)層次差異，不是起源于造孢組織，因此羊肚菌菌核屬于假菌核，但菌核發(fā)育過程與其他真菌菌核相似[2]。不同栽培種培養(yǎng)基質(zhì)對(duì)羊肚菌菌核的培養(yǎng)特征的影響，結(jié)果見表2。

表2 不同栽培種培養(yǎng)基質(zhì)上羊肚菌菌核的培養(yǎng)特征Tab.2 Culture characters of sclerotia of Morchella spp.in different culture media

由表2可以看出，從菌核開始形成的快慢來看，配方4和配方6最快，菌絲還未走到瓶底，菌核就開始形成，從接種到菌核開始形成只需9 d；其次是配方3，為10 d；最慢的是配方8，為16 d。從菌核的主要分布區(qū)域來看，都是從接種口瓶壁上端開始往下形成，配方5分布比較均勻，在瓶壁的不同位置都有出現(xiàn)，可能是原料中有玉米芯，比較蓬松且有空隙；大部分配方中瓶底都有發(fā)現(xiàn)菌核，而且密集、均勻，但是配方8和配方6未在瓶底發(fā)現(xiàn)菌核。從菌核的數(shù)量來看，配方6形成的菌核最多，具體排序?yàn)椋号浞?＞配方3、配方4＞配方1、配方2、配方5＞配方7、配方8。菌核的顏色在不同培養(yǎng)基配方上沒有明顯差別，在菌核形成的前期為白色小點(diǎn)，以后逐漸聚集變硬，并轉(zhuǎn)為淡黃色，最后變深呈黃褐色。

2.3 不同栽培種培養(yǎng)基在長時(shí)間保存后菌絲萌發(fā)情況

菌絲走滿瓶后保存5個(gè)月，然后播種到34 cm×47 cm×10 cm規(guī)格的周轉(zhuǎn)框土壤上，不同栽培種培養(yǎng)基在長時(shí)間保存后菌絲萌發(fā)情況見表3。

從表3中可以看出，配方3和配方6菌絲萌發(fā)最快，播種后18 h就肉眼可看到菌絲萌發(fā)，而配方5菌絲萌發(fā)最慢，30 h后才能看到菌絲萌發(fā)；配方2、配方3和配方7菌絲濃密，配方6菌絲較濃密，其他配方菌絲稀疏；菌絲顏色在不同培養(yǎng)基上無明顯差異，前期都為白色，后期逐漸轉(zhuǎn)為黃色。

表3 不同栽培種培養(yǎng)基長時(shí)間保存后菌絲萌發(fā)情況Tab.3 Germination condition of hypha after long-term preservation in different culture media

2.4 不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)羊肚菌分生孢子的影響

播種12 d以后，菌絲長透土層，土壤表面開始產(chǎn)生分生孢子，俗稱“菌霜”。15 d后土壤表面都被厚厚的“菌霜”覆蓋（圖1），不同栽培基質(zhì)的栽培種的分生孢子產(chǎn)生能力都很強(qiáng)，無明顯差異，說明羊肚菌產(chǎn)生分生孢子能力跟栽培種基質(zhì)無關(guān)，可能跟羊肚菌品種、氣候有比較大的關(guān)系。

圖1 羊肚菌分生孢子Fig.1 Conidia of Morchella spp.

3 結(jié)論與討論

雖然羊肚菌的出菇機(jī)制尚不明了，但與其菌核、分生孢子間存在千絲萬縷的關(guān)系。綜合從菌絲生長、菌核培養(yǎng)特征、長時(shí)間保存后菌絲萌發(fā)情況和產(chǎn)生分生孢子能力來看，配方6是優(yōu)良的栽培種配方，其菌絲生長速度最快達(dá)1.40 cm·d-1，菌絲較濃密；能較早形成菌核，且菌核數(shù)量最多；長時(shí)間保存后再播種，在18 h后能快速萌發(fā)，菌絲較濃密；分生孢子產(chǎn)生能力強(qiáng)[10]。

從配方2和配方1的對(duì)比情況來看，用草木灰代替土壤，菌絲生長會(huì)變慢，菌核數(shù)量差異不大，但長時(shí)間保存后菌種萌發(fā)的菌絲更濃密。對(duì)比配方3和配方2，添加無機(jī)離子，菌絲生長加快，菌核的開始形成時(shí)間提早，菌核數(shù)量增多，長時(shí)間保存后菌種能更早萌發(fā)。從配方4和配方1的對(duì)比情況來看，用谷殼代替部分木屑，菌絲生長加快，菌絲濃密，菌核開始形成時(shí)間提早，菌核數(shù)量增多。從配方5和配方4的對(duì)比情況來看，用玉米粒和玉米芯代替小麥和谷殼，菌絲生長更快，但菌絲稀疏；菌核的開始形成時(shí)間推遲，菌核數(shù)量減少，但菌核在瓶壁的分布較均勻，但長時(shí)間保存后菌種萌發(fā)推遲。從配方6和配方1的對(duì)比情況來看，提高小麥的用量，菌絲生長更快，菌核的開始形成時(shí)間提早，菌核數(shù)量增多，長時(shí)間保存后菌種萌發(fā)提前且菌絲濃密。對(duì)比配方7與配方1，用棉籽殼和麩皮代替小麥，菌絲生長變慢，菌核開始形成時(shí)間推遲，菌核數(shù)量減少，但長時(shí)間保存后菌種萌發(fā)的菌絲更濃密。對(duì)比配方8與配方4，用麩皮代替小麥，菌絲生長變慢，菌絲更稀疏；菌核開始形成時(shí)間推遲，菌核數(shù)量減少。因此添加無機(jī)離子、提高小麥用量、使用谷殼填充增加孔隙度有利于菌核的形成，而添加棉籽殼和麩皮卻不利于菌核形成。