消瘀降脂膠囊對兔動脈粥樣硬化的干預(yù)作用

龍俊科 趙水平?

動脈粥樣硬化（AS）是指早期動脈內(nèi)膜局部損傷后，脂質(zhì)沉積，進(jìn)而內(nèi)膜纖維組織增生，內(nèi)膜局部增厚，形成斑塊。全球每年約有2000萬人死于動脈粥樣硬化性疾病。為預(yù)防動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展，除西醫(yī)常用的降血脂、抗血小板等治療外，中醫(yī)藥治療也取得良好的治療效果［1］。消瘀降脂膠囊是由丹參水溶性總酚酸和山楂總?cè)扑峤M成的現(xiàn)代植物藥。前期研究表明，消瘀降脂膠囊預(yù)防性給藥能降低血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和總膽固醇（TC），有效降低血脂水平，具有防治高脂血癥的作用［2］。2017年4月至10月作者通過實驗研究觀察消瘀降脂膠囊對動脈粥樣硬化的作用效果并初步探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 消瘀降脂膠囊（0.25g/粒，貴陽新天藥業(yè)股份有限公司），阿托伐他汀片（20mg/片，輝瑞制藥有限公司），生理鹽水配制成各使用濃度。血清總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）等測定試劑盒均為日本和光純藥工業(yè)株式會社（wako）產(chǎn)品。膽固醇由上海阿拉丁試劑公司提供，大豆油為市售金龍魚牌大豆油，基礎(chǔ)飼料由上海福貝寵物用品有限公司提供。油紅O為Sigma公司提供。新西蘭兔，雄性，32只，體重2.0～2.5kg（長沙天勤生物有限公司）。脫色搖床（江蘇海門其林醫(yī)用儀器廠），全自動酶標(biāo)儀（ThermoFisher公司）。

1.2 方法 健康雄性新西蘭兔32只，以普通飼料喂養(yǎng)觀察1周后進(jìn)入實驗，記錄體重和進(jìn)行基線血脂、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）分析。隨機(jī)選取8只為正常組，予以120g/d的基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。其余新西蘭兔予以高膽固醇飼料（含膽固醇0.5%，大豆油3.0%，基礎(chǔ)飼料96.5%）120g/d喂養(yǎng)至第8周，隨機(jī)分為3組，即模型組、阿托伐他汀組、消瘀降脂膠囊組，每組8只，采集靜脈血進(jìn)行血脂和谷丙轉(zhuǎn)氨酶分析。從第9周開始，各組動物飲食不變，模型組予以30ml/d生理鹽水灌胃，阿托伐他汀組予以阿托伐他汀2mg/（kg·d）灌胃，消瘀降脂膠囊組予以消瘀降脂膠囊100mg/（kg·d）灌胃。所有組在12周后停止灌胃，采集靜脈血、主動脈和肝臟。按試劑盒提供的方法（酶法）檢測血脂四項，并檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量。對主動脈進(jìn)行油紅O染色，使用Image-Pro6.0測算其斑塊面積，并計算斑塊面積占整體主動脈面積的百分比，觀察實驗動物主動脈斑塊形成及變化情況。取主動脈組織進(jìn)行切片，蘇木精-伊紅染色法（HE）染色。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SSPS 21.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示。對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗，常規(guī)方差分析后post hoc兩兩比較（方差齊則LSD檢驗，方差不齊則Dunnett's檢驗）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 各組實驗兔體重呈生理性增長，各組體重在開始時（0周）、第8周末和第12周末，組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 各組血清學(xué)指標(biāo)比較 實驗開始時，各實驗組各項指標(biāo)組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。造模后，第8周末檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除正常組外，其余各組TC和LDL-C均顯著升高（P＜0.05），提示造模成功。12周末，模型組TC和LDL-C水平比第8周末繼續(xù)升高，而消瘀降脂膠囊組和阿托伐他汀組則明顯降低（P＜0.05）。第12周末，兩組與模型組比較，TC和LDL-C均顯著降低（P＜0.05），表明消瘀降脂膠囊與阿托伐他汀效果相當(dāng)，能顯著降低血清TC和LDL-C水平。

表1 消瘀降脂膠囊對兔血清學(xué)指標(biāo)的影響［mmol/L，（±s）］

表1 消瘀降脂膠囊對兔血清學(xué)指標(biāo)的影響［mmol/L，（±s）］

注：*與第8周末（即治療前）比，P＜0.05；#與第12周末模型組比，P＜0.05

組別 時間(周) TC(mmol/L) LDL-C(mmol/L)HDL-C(mmol/L) TG(mmol/L) ALT(U/L)正常組0 1.44±0.46 0.65±0.34 0.43±0.16 1.23±0.23 40.66±16.81 8 1.14±0.39 0.40±0.19 0.47±0.18 0.47±0.25 43.20±14.34 12 1.54±0.88 0.63±0.50 0.85±0.60 0.34±0.12 45.52±13.14 0 1.26±0.28 0.46±0.19 0.54±0.18 0.60±0.27 49.70±9.18 8 27.72±8.39 21.22±1.96 1.74±0.74 0.30±0.18 28.84±3.17 12 21.11±4.54# 14.77±3.92*#0.99±0.40 0.51±0.28 34.40±7.43模型組0 1.49±0.45 0.64±0.34 0.55±0.23 0.72±0.26 53.02±16.86 8 34.02±10.37 23.35±5.16 1.48±0.84 0.40±0.14 43.90±27.12 12 17.23±10.40*#12.59±7.30*# 1.29±0.43 0.51±0.28 96.22±78.03消瘀降脂膠囊組0 1.49±0.26 0.52±0.21 0.68±0.12 0.39±0.14 47.62±13.91 8 31.89±7.49 26.32±7.09 0.50±0.26 0.53±0.12 39.94±13.49 12 40.61±5.10 37.94±10.20 2.89±0.87 0.73±0.30 30.98±10.62阿托伐他汀組

2.3 各組斑塊形成情況 正常組實驗兔的主動脈無動脈粥樣硬化形成，使用Image-Pro 6.0測算其斑塊面積為整體主動脈面積的百分比為0%，而在模型組中，兔主動脈內(nèi)有大量動脈粥樣硬化斑塊形成，測算其面積為（72.13±8.20）%，顯著高于正常組，提示動脈粥樣硬化模型造模成功。經(jīng)阿托伐他汀治療組，斑塊面積為（51.01±9.02）%，經(jīng)消瘀降脂膠囊治療組，斑塊面積為（65.22±5.22）%，兩組斑塊面積比模型組減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 各組HE染色頸動脈切片 正常組兔頸動脈內(nèi)膜、中膜和外膜分界清楚，內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞完整，未見斑塊組織和泡沫細(xì)胞（見圖2A）。模型組內(nèi)皮明顯增厚，出現(xiàn)動脈粥樣硬化斑塊，而阿托伐他汀組及消瘀降脂膠囊組，雖然內(nèi)皮也明顯增厚，但比模型組明顯減輕。

圖1 各組對主動脈粥樣硬化斑塊形成的影響

圖2 各組對頸動脈切片組織的影響（A正常組；B模型組；C阿托伐他汀組；D消瘀降脂膠囊組；×200）

3 討論

目前，動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生發(fā)展過程已基本清楚。一般認(rèn)為，動脈粥樣硬化的啟動因子是LDL-C。當(dāng)血管遇到高血壓、糖尿病、吸煙等因素時易引起血管內(nèi)皮損傷，血清中過高的LDL-C脂質(zhì)顆粒沉積于動脈內(nèi)皮下，隨后被修飾標(biāo)記，氧化成氧化低密度脂蛋白膽固醇（ox-LDL-C）。隨著氧化的發(fā)生，單核細(xì)胞進(jìn)入血管內(nèi)皮，轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞并大量吞噬修飾的脂質(zhì)顆粒，最終形成大量泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞凋亡后，釋放出ox-LDL-C形成脂質(zhì)核心，并吸引動脈中層的平滑肌細(xì)胞遷移至內(nèi)膜，產(chǎn)生大量膠原和彈力纖維等包裹脂質(zhì)核心形成典型的粥樣硬化病變。目前他汀類藥物能有效降低血清中LDL-C水平，穩(wěn)定或消退粥樣硬化斑塊，但長期應(yīng)用對肝臟、肌肉、視覺系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等均有副作用。

消瘀降脂膠囊由丹參總酚酸和山楂總?cè)扑崽崛∥锝M成。文獻(xiàn)報道［3］，丹參水提物能保護(hù)高脂飲食去卵巢大鼠的內(nèi)皮功能紊亂，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血脂水平有關(guān)。既往化學(xué)成分研究表明，丹參總酚酸中主要化學(xué)成分為丹酚酸B，其主要活性成分為丹酚酸B和丹參素等。丹酚酸B能通過調(diào)節(jié)血紅素氧合酶-1和精氨酸酶的活性而干預(yù)NO的產(chǎn)生和其它炎癥因子的反應(yīng)，最終發(fā)揮出血管內(nèi)皮保護(hù)功能［4］（Yeonsoo Joe et al.）。山楂總?cè)扑嶂兄饕煞譃樾芄岷妄R墩果酸。給倉鼠喂含0.01%提取自山楂的熊果酸/齊墩果酸混合物的高膽固醇飼料，可顯著降低血漿VLDL-C和LDL-C 的量［5］。給喂高脂飼料小鼠喝15周含0.05%熊果酸的飲用水，顯著抑制喂高脂飼料升高的血脂和血糖水平［6］。而丹參與山楂合用可更顯著地降低血清TC、LDL-C、TG和MDA水平，提高SOD、NO水平，兩者具有協(xié)同作用［7］。

本資料通過喂養(yǎng)高脂飼料建立兔動脈粥樣硬化模型，造模成功后血脂TC和LDL-C水平比正常組顯著增高。造模成功后，分別給予消瘀降脂膠囊和阿托伐他汀治療4周，結(jié)果表明與模型組比較，消瘀降脂膠囊與阿托伐他汀均能顯著降低TC和LDL-C的水平，減緩?fù)脛用}粥樣硬化斑塊的形成。因此，消瘀降脂膠囊能減緩動脈粥樣硬化的形成，可能與降低血清TC、LDL-C水平、減緩動脈粥樣硬化斑塊形成有關(guān)，其機(jī)制值得進(jìn)一步研究。