蒲地藍(lán)消炎口服液黃芩苷與菊苣酸含量測(cè)定方法的優(yōu)化

蘇萬(wàn)福 楊學(xué)芳 王琨

【摘 要】 目的：建立可以同時(shí)檢測(cè)蒲地藍(lán)消炎口服液中黃芩苷與菊苣酸含量的分析方法，降低分析時(shí)間、提高檢測(cè)效率。方法：采用Agilent Zorbax SB-Pheny1（75 mm×4.6 mm，3.5μm）色譜柱，流動(dòng)相為水-乙腈-甲醇-磷酸（75∶15∶10∶0.2），柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為326nm，流速梯度洗脫。結(jié)果：黃芩苷與菊苣酸分離度良好，單次分析時(shí)間為23min，兩組分分別在90.58～1449.3μg、5.475～54.75μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（黃芩苷r=0.9999、菊苣酸r=0.9998）；黃芩苷與菊苣酸的平均回收率（n=6）分別為99.72%、99.38%。結(jié)論：該方法快速、準(zhǔn)確，適用于蒲地藍(lán)消炎口服液中黃芩苷與菊苣酸的檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】 蒲地藍(lán)消炎口服液；黃芩苷；菊苣酸

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）07-0014-03

Abstract：Objective To establisha method for determinating the content of baicalin and cichoric acid simultaneously in Pudilan Xiaoyan oral liquid， thus reducing the detection time and improving the detection efficiency.Methods The analysis was carried out on Agilent Zorbax SB-Pheny1 （75mm×4.6mm， 3.5μm） with water-acetonitrile-methanol-phosphoric acid （75∶15∶10∶0.2） as the mobile phase at the column temperature of 40℃，and the detection wavelength was 326nm， The flow rate wasgradient elution.Results Good separation for baicalin and cichoric acid were achieved， and single analysis time was 23min. The linear calibration was found for baicalin within the range of 90.58μg to 1449.3μg（r=0.9999）and cichoric acid within the range of 5.475μg to 54.75μg （r=0.9998）.The average recovery of baicalin and cichoric acid were 99.72% and 99.38% （n=6）， respectively.Conclusion The developed method is rapid and accurate，and suitable for the content determination of baicalin and cichoric acid in Pudilan Xiaoyan oral liquid.

Keywords：Pudilan Xiaoyan Oral Liquid； Baicalin； Cichoric Acid

蒲地藍(lán)消炎口服液由蒲公英、苦地丁、板藍(lán)根、黃芩等四味中藥按相應(yīng)比例配伍，經(jīng)過(guò)現(xiàn)代提取工藝提取并配制而成的純中藥口服制劑，具有清熱解毒，消腫利咽的功效，主要用于癤腫、腮腺炎、咽炎、扁桃體炎的治療[1-2]。研究表明，蒲地藍(lán)消炎口服液對(duì)小兒手足口病[3-4]、上呼吸道感染[5-6]也具有良好的臨床治療效果，有“天然抗生素”的美稱。

黃芩苷為黃芩中的主要有效成分，具有抗菌、抗病毒、清除氧自由基、解熱、鎮(zhèn)靜、調(diào)節(jié)免疫等作用[7-8]；菊苣酸為方中君藥蒲公英中的一種酚酸類化合物，具有抗菌、抗病毒、提高免疫力、抗炎、抗氧化等作用[9-11]。2015年版《中國(guó)藥典》中分別采用兩種方法對(duì)產(chǎn)品中的黃芩苷、菊苣酸的含量進(jìn)行了測(cè)定，該方法由于檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，不利于生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制，研究欲建立一種同時(shí)測(cè)定黃芩苷和菊苣酸含量的測(cè)定方法，以縮短中間體檢測(cè)時(shí)間，提高檢測(cè)效率。

1 儀器與材料

1.1 儀器 20AT型液相色譜儀（日本島津）；XS205型電子分析天平（Mettler）。

1.2 材料 黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715-201016，含量以94%計(jì)）、菊苣酸對(duì)照品（批號(hào)：111752-200902，含量以99.9%計(jì)）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；蒲地藍(lán)消炎口服液（濟(jì)川藥業(yè)集團(tuán)有限公司）；乙腈、甲醇均為色譜純，磷酸為分析純，均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對(duì)照品48.18mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為黃芩苷儲(chǔ)配液；精密量取黃芩苷儲(chǔ)配液8mL、4mL、2mL、1mL、0.5mL，分別置10mL量瓶中，用甲醇依次稀釋成不同濃度的黃芩苷系列溶液，備用。精密稱取菊苣酸對(duì)照品13.7mg，置100mL量瓶中，加乙腈-水（20∶80）至刻度，搖勻，作為菊苣酸儲(chǔ)配液；精密量取菊苣酸儲(chǔ)配液10mL、7.5mL、4mL、2mL、1mL，分別置25mL量瓶中，用乙腈-水（20∶80）依次稀釋成不同濃度的菊苣酸系列溶液，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取蒲地藍(lán)消炎口服液5mL，置50mL量瓶中，加乙腈-水（20∶80）稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱：Agilent SB-Pheny1（75mm×4.6mm，3.5μm）；流動(dòng)相：水-乙腈-甲醇-磷酸（75∶15∶10∶0.2）；柱溫：40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：326nm；進(jìn)樣量：10μL；流速為梯度洗脫見(jiàn)表1。

2.3 分離度試驗(yàn) 精密量取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。菊苣酸、黃芩苷出峰時(shí)間及菊苣酸峰、黃芩苷峰與附近峰的分離度，典型色譜圖如圖1所示。菊苣酸出峰時(shí)間為4.468min，與附近峰分離度為2.23；黃芩苷出峰時(shí)間為8.241min，與附近峰分離度為1.94。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下黃芩苷、菊苣酸不同濃度的系列溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。以濃度對(duì)峰面積作圖，黃芩苷、菊苣酸回歸方程分別為：Y黃芩苷=17463X+22877（r=0.9999），Y菊苣酸=39724X+15518（r=0.9998），黃芩苷在90.58～1449.3μg范圍內(nèi)，菊苣酸在5.475～54.75μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果黃芩苷、菊苣酸峰面積的RSD分別為0.15%、0.14%，表明儀器精密度良好。

2.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、1.5、3、6、9、12、18、24h按“2.2”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果黃芩苷、菊苣酸峰面積的RSD分別為0.94%、0.84%。表明供試品溶液在24h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別按“2.2”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果黃芩苷、菊苣酸的平均含量分別為10.68mg·mL-1、0.269mg·mL-1，以含量結(jié)果計(jì)算RSD（n=6）分別為0.96%和1.1%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的蒲地藍(lán)消炎口服液2.5mL，共6份，置50mL量瓶中，分別加入黃芩苷對(duì)照品約26.7mg、菊苣酸對(duì)照品儲(chǔ)備液（0.137mg/mL）5mL，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算回收率。結(jié)果黃芩苷、菊苣酸的平均回收率分別為99.72%、99.38%，RSD（n=6）分別為0.92%、0.99%。

2.9 方法對(duì)比 分別按照2015版《中國(guó)藥典》蒲地藍(lán)消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）、黃芩（黃芩苷）檢測(cè)方法、以及“2.1、2.2”項(xiàng)下分析方法對(duì)6批蒲地藍(lán)消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）、黃芩（黃芩苷）含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

分別采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)及二極管陣列檢測(cè)器在210～400nm分析對(duì)照品和供試品溶液，發(fā)現(xiàn)在326nm處菊苣酸有最大吸收，而黃芩苷的兩個(gè)最大吸收峰分別為278nm和315nm，由于黃芩苷在樣品中含量較高，而菊苣酸在樣品中含量偏低，參考相關(guān)文獻(xiàn)[12-13]，為提高菊苣酸的檢測(cè)靈敏度，選擇了326nm波長(zhǎng)處同時(shí)測(cè)定兩種成分的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在326nm處測(cè)定黃芩苷與原方法選定的280nm測(cè)定結(jié)果基本一致。

2015版《中國(guó)藥典》對(duì)于蒲地藍(lán)消炎口服液除了維持原有黃芩（黃芩苷）含量檢測(cè)指標(biāo)不變的基礎(chǔ)上，增加了蒲地藍(lán)消炎口服液中蒲公英（菊苣酸）含量測(cè)定，但菊苣酸藥典方法的單針進(jìn)樣分析時(shí)間長(zhǎng)達(dá)65min。在蒲地藍(lán)消炎口服液尤其是中間體（配制液）檢測(cè)過(guò)程中，不計(jì)對(duì)照品，單批次4針檢測(cè)時(shí)間為260min，耗時(shí)較長(zhǎng)，在一定程度上增加了產(chǎn)品的產(chǎn)出周期，而文中研究方法不僅將檢測(cè)時(shí)間大大縮短，也實(shí)現(xiàn)了一種方法同時(shí)分析黃芩苷、菊苣酸含量的效果。運(yùn)用本方法檢測(cè)蒲地藍(lán)消炎口服液中間體，不僅利于生產(chǎn)安排、消除生產(chǎn)瓶頸、降低分析成本、減少排污，同時(shí)也降低了配制液在等待檢測(cè)過(guò)程中的污染風(fēng)險(xiǎn)，提高了產(chǎn)品過(guò)程中的控制力度。

綜上，研究建立的HPLC法同時(shí)測(cè)定黃芩苷及菊苣酸的含量，方法可行，適用于蒲地藍(lán)消炎口服液生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制。

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（收稿日期：2018-02-22 編輯：程鵬飛）