槐米藥材薄層色譜鑒別研究

陳菊 余春香 王珂雅 張永豪 雷曄 楊梅瑾

【摘 要】 目的：建立新的槐米薄層色譜鑒別方法。方法：以蘆丁為對照品，采用硅膠G板，分別以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（5∶2∶0.5∶0.5）、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1 ）、乙酸乙酯-丙酮-水（5∶3∶1）、乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）為展開劑，噴以三氯化鋁試液顯色，置紫外燈（365 nm）下，檢視樣品中的蘆丁。結(jié)果：槐米藥材薄層色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，重復(fù)性好。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)，能為槐米的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 槐米；薄層色譜鑒別；蘆丁

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2018）04-0018-03

Abstract：Objective To establish the advanced TLC method of Sophora japonica. Methods Rutin was used as the reference substance. Using silica gel G thin layer plate， the sample rutin was developed respectively with ethyl acetate - methanol - formic acid - water （5∶2：0.5∶0.5）， ethyl acetate acetone formic acid - water （5∶3∶1∶1）， ethyl acetate and acetone water （5∶3∶1）， ethyl acetate - methanol - water （4∶1∶1）.The TLC plate was sprayed with aluminum chloride solution ， thereafter rutin was detected under the uv lamp 365nm.Results In the chromatogram，the same color fluorescent spots was displayed in the corresponding position of the reference chromatogram， and the spots has good repeatability. Conclusion The method was simple，accurate and economica ， which provides references for the quality control of Flos Sophorae.

Keywords：Flos Sophorae； Thin-layer chromatography identification； Rutin

蘆丁（Rutin）又名蕓香苷，是一種分布廣泛的黃酮類化合物，具有維生素P樣生理活性[1]，主要存在于槐米、蕎麥、小薊、銀杏葉、鬼針草等植物中[2-6]?；泵诪槎箍浦参锘盨ophora Japonica L.的干燥花及花蕾，主要分布在河南、山東、陜西、湖南、貴州、四川等地[7]?；泵字泻胸S富的蘆丁成分，其含量可達(dá)12%～20%[2]，據(jù)研究發(fā)現(xiàn)蘆丁具有涼血止血、清肝瀉火等功效，且具有抗癌防癌、抗血小板聚集、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗炎、抗過敏、抗自由基及抗氧化等多種活性[8-10]。臨床將蘆丁用于預(yù)防和治療糖尿病及合并高脂血癥[11]。此外，蘆丁作為食品中的抗氧劑和天然食用色素。《中華人民共和國藥典》2015版[8]收載槐米中蘆丁的薄層色譜鑒別采用的展開劑是乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1），研究擬對蘆丁薄層色譜鑒別的展開系統(tǒng)進(jìn)行改進(jìn)，選用其他展開劑代替藥典方法，為生產(chǎn)上蘆丁的鑒別提供更多的選擇。通過實(shí)驗(yàn)，已篩選出了一種展開劑，使得供試品中所鑒別的成分斑點(diǎn)清晰，分離度好，重復(fù)性好，可以代替原標(biāo)準(zhǔn)用于蘆丁的鑒別?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 ZF-I型三用紫外分析儀（上海光豪分析儀器公司）；點(diǎn)樣毛細(xì)管（上海申立玻璃儀器公司）；層析缸。

1.2 材料 硅膠G（青島海洋化工有限公司）；薄層板（自制）。甲醇、乙酸乙酯、甲酸、丙酮等均為分析純。蘆丁對照品（批號：201509，貴州省迪大科技有限公司），三氯化鋁顯色劑。槐米藥材購于黔東南州藥材公司（批號：20160201）。

2 方法

2.1 薄層板的制備 取羧甲基纖維素鈉0.2～0.5 g，溶于100 mL水中，攪拌，微熱使其完全溶解，再加入薄層層析硅膠G適量，沿同一方向研磨成均勻的稀糊，然后均勻地涂在預(yù)先準(zhǔn)備好的潔凈的玻璃板上，晾干。使用前110℃活化30 min，置于干燥器內(nèi)備用。

2.2 供試品溶液的制備 取槐米粉碎，過篩，準(zhǔn)確稱取20 g，加0.4%的硼砂水溶液200 mL，攪拌均勻，用石灰水調(diào)pH8～9，煮沸30 min ，保持水分和pH不變，提取兩次，合并濾液，用鹽酸調(diào)pH2～3，抽濾，精制，烘干，得蘆丁精品。稱取蘆丁粉末0.2 g，加甲醇5 mL，密塞，振搖10 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.3 對照品溶液制備 取蘆丁對照品適量，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液，備用。

2.4 薄層層析方法

2.4.1 改進(jìn)方法 照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2015版通則0502）試驗(yàn)，分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各5μL ，點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，采用預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出的四種展開劑：A.乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（5∶2∶0.5∶0.5），B.乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1 ），C.乙酸乙酯-丙酮-水（5∶3∶1），D.乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）分別展開，取出，晾干。噴以三氯化鋁試液顯色，待晾干后，置紫外燈（365 nm）下檢視蘆丁，供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果見圖1。

2.4.2 藥典方法 照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2015版通則0502）試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各10μL ，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，待乙醇揮干后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖2。

3 討論

蘆丁在四種展開劑中薄層鑒別見圖1，與藥典方法展開效果的比較見表1。由圖1、圖2和表1可知，選用的四種展開系統(tǒng)中，蘆丁在展開劑A中展開的效果最好，斑點(diǎn)圓整且清晰，展開時(shí)間是最少的，為25 min，藥典標(biāo)準(zhǔn)是20 min，展開劑B乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1 ）斑點(diǎn)清晰但有少許拖尾現(xiàn)象，展開劑C 乙酸乙酯-丙酮-水（5∶3∶1）拖尾嚴(yán)重，斑點(diǎn)模糊。

在展開劑 D 乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）中展開時(shí)間太長。綜上，實(shí)驗(yàn)篩選出的理想展開系統(tǒng)為乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（5∶2∶0.5∶0.5）。實(shí)驗(yàn)同時(shí)對展開環(huán)境的溫度和相對濕度進(jìn)行了考察，結(jié)果溫度在20～25℃，相對濕度在25%～65%，供試品色譜中主要斑點(diǎn)的分離度較好。對改進(jìn)后的方法進(jìn)行了穩(wěn)定性和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，樣品在6 h內(nèi)進(jìn)行薄層鑒別，供試品色譜中主要斑點(diǎn)的分離度較好，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)表明，改進(jìn)后的方法重復(fù)性良好。實(shí)驗(yàn)采用三氯化鋁的乙醇溶液作為顯色劑。中藥分析中，三氯化鋁是廣泛應(yīng)用于黃酮類成分定性、定量分析的顯色劑，能與蘆丁成分顯色并產(chǎn)生熒光?？捎糜诒狙芯恐谢泵滋J丁的薄層層析鑒別。

研究對展開劑的種類及配比進(jìn)行了大量摸索。嘗試乙酸乙酯-甲醇-水（10∶2∶3）、甲醇-水、丙酮-水作為展開劑，結(jié)果顯示展開結(jié)果無顯著差異，而且展開速度很慢，其中乙酸乙酯-甲醇-水（10∶2∶3）有分層現(xiàn)象。最終選用乙酸乙酯-甲醇—甲酸-水為展開劑，比例5∶2∶0.5∶0.5為佳，分離效果好，斑點(diǎn)Rf值適宜。與藥典原標(biāo)準(zhǔn)相比較，實(shí)驗(yàn)篩選出的展開劑系統(tǒng)中乙酸乙酯、甲酸的用量都減少，不僅不會影響槐米中蘆丁的鑒別，還節(jié)約了成本，同時(shí)減少有機(jī)溶劑對環(huán)境的污染，有著更廣泛的應(yīng)用意義，可替代原標(biāo)準(zhǔn)用于槐米蘆丁的薄層鑒別。

參考文獻(xiàn)

[1]李秋紅，欒仲秋. 槐米提取工藝研究綜述[J]. 中國農(nóng)業(yè)信息，2014（13）：133-134.

[2]史方超，喬立業(yè)，陸肶等.槐米提取物的制備工藝及其紫外吸收特性考察[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015，12（22）18-22.

[3]黃菊，翟淑敏.正交設(shè)計(jì)和響應(yīng)面法優(yōu)化蕎麥中蘆丁提取工藝的比較[J]. 糧食與油脂，2014，27（9）：45-48.

[4]黃麗. HPLC-DAD法同時(shí)測定中藥小薊中6種活性成分的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016，22（4）：66-68.

[5]魏若男，陳志遠(yuǎn)，耿敬章.毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光法檢測銀杏葉中的蘆丁[J]. 現(xiàn)代食品科技 2017，33（11）：257-261.

[6]布紫云，曲婷麗，趙正保.中藥材鬼針草的定性和定量研究[J].光明中醫(yī).2016，31（2）：211-213.

[7]李振志，朱華，謝鋒，等.不同產(chǎn)地槐米中蘆丁的含量測定[J]. 世界中醫(yī)藥，2013，8（8）：952-954.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：355.

[9]劉麗麗，李曉霞，陳玥，等.槐米化學(xué)成分研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，33（4）：230-233.

[10]張浪，賴永長，汪海濤，等.蘆丁對神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[J].中藥材，2014，37（4）：640-644.

[11]楊德全，葉建陽，劉鴻云，等. 從苦蕎麥中提取蘆丁的研究[J]. 延安大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 1997， 16（4）：67-71.